高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素

1、高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素高效液相色谱法同时测定鸭梨种子中3种内源激素【关键词】高效液相色谱;内源激素;鸭梨;种子1(fdsienedepartentftianjinagriulturaluniversity,tianjin300384)2(llegeffdsieneandengineering,shanxiagriulturaluniversity,taigu030801)3(llegeffrestresuresandenvirnent,nanjingfrestryuniversity,nanjing210037)keyrdshighperfraneliquidhratgr

2、aphy;endgenushrnes;yalipear;seed1引言果实的生长成熟是一个复杂的生理生化过程，植物激素与果实的发育及成熟程度有关，而种子又是激素合成的主要场所1，因此，掌握内源激素在种子中的变化规律，对研究水果在采摘后的生理、成熟、衰老及褐变过程具有重要意义2。植物激素在植物体内含量甚微，而且其在植物体内的组成复杂，互相共存的干扰组分多，对温度等条件敏感，因此对植物激素的测定比拟困难3。高效液相色谱(hpl)是较理想的植物内源激素分析方法，植物激素的hpl测定已在仁用杏花芽4、甜樱桃5、梨6等果实，油菜7、莴苣8等籽粒上有所应用，对植物种子方面，主要集中在银杏9、山楂10、甜樱

3、桃5、五味子11、早蜜梨和黄金梨6等种子的激素含量测定上，而对鸭梨种子中激素的别离、测定还未见。由于在结合测定植物组织抽提液中的多种内源激素时，经常出现别离差、峰型不良及严重拖尾现象，因此选择适宜的内源激素提取方法和色谱条件尤为重要12。本研究采用高效液相色谱法对鸭梨种子中的赤霉素(ga3)、吲哚乙酸(iaa)、脱落酸(aba)3种植物激素进展结合别离与测定，建立起灵敏、简便、快速测定植物种子激素的方法。2实验局部2.1仪器、试剂与材料2.2标准品的制备分别准确称取0.01gga3、iaa和aba标样，用流动相溶解定容至100l棕色容量瓶中，作为母液(100g/l)，用以流动相、波长、柱温的选

4、择和定性分析。以流动相为溶剂，分别配制100g/lga3、10g/liaa和2.5g/laba的工作液。2.3样品的制备2.4hpl条件agilent18zrbax反相色谱柱(1504.6，5);柱温：35;流动相为v(甲醇)v(水，含1%乙酸)=46;流速：1.0l/in;进样量：20l;采用切换波长法;以外标法进展定量测定。3结果与讨论3.1色谱条件的挑选3.1.1流动相的选择3.1.2波长的选择将100g/l混合标准母液稀释10倍，分别在200300n范围内进展光谱扫描，发现ga3，iaa和aba的最大吸收波长分别为210，250和265n。参考文献4的条件，在254n波长下同时测定3种

5、激素，并对样品进展了测定(图2)，ga3响应值较低。采用hpl法分析多组分物质时常采用单一波长，但单波长检测不能使待测组分的响应值到达最大，切变波长可减少一些溶剂物质的干扰，更利于待测组分的分析检测16,17，所以本实验采用切换波长法检测植物内源激素。首先选择254n为检测波长，使溶剂峰较小化;在2.5in时ga3将要出峰，将检测器波长切换到ga3的最大吸收波长210n，3.8in出峰完毕，再次将波长切换到254n处，对iaa和aba进展检测(图3)。虽然在254n下iaa和aba的吸收值未到达最大，但已接近于最大，并且可以防止屡次切换波长造成的基线漂移。3.1.3柱温和流速的选择柱温对分析时

6、间影响较明显，柱温为20时，别离一个样品需25in;柱温升为35时，别离一个样品只需15in，因此选择柱温为35。随着流速的增加，各组分保存时间均缩短，但重叠现象也加剧;而流速太小那么会延长测定时间，经过挑选确定最正确流速为1l/in。3.2内源激素的定性分析用上述优化的色谱条件，对3种激素标准品进展分析(图4)。由图4可知，ga3，iaa和aba的保存时间分别为(2.9280.072)in、(5.5320.089)in和(11.9560.054)in。3.3内源激素的定量分析由图2可见，ga3在254n下响应值较低。采用切换波长法(图3)，可明显进步ga3的检测灵敏度，且3种组份均得到了良好

7、别离。ga3，iaa和aba在样品色谱图中的保存时间分别为2.916，5.525和11.962in，与标准品色谱图中保存时间根本一致，说明本实验采用的样品别离和hpl色谱条件可以满足鸭梨种子中3种激素的同时测定的要求。以3种激素的混合标准溶液为原液，分别稀释数倍，配制成含有ga3、iaa和aba的系列标准溶液;在优化的色谱条件下依次进样，以峰面积为纵坐标(y)，质量浓度为横坐标(x)，计算得到各个内源激素的回归方程、线性范围和相关系数(表1)。由表1可见，3种激素标准品的浓度与峰面积相关性良好，相关系数均大于0.99。表1激素在色谱条件下的标准曲线(略)3.4回收率的测定和实际样品分析称取1.

8、0g鸭梨种子，按照2.3中方法制备样品并按照上述方法进展测定，在已测样品中参加准确称重的相当于样品0.5，1.0，2.0倍的标准样品，测定激素含量，计算加标回收率，结果如表2所示。ga3，iaa和aba的平均回收率为92.8%，91.6%和94.7%，相对标准偏向均小于6.7%，说明本方法符合定量分析要求，数据误差小，上述提取及色谱条件是可行的。利用本方法对鸭梨种子内源激素含量进展了测定，并对贮藏中含量变化进展了跟踪。结果说明：鸭梨贮藏过程中，种子内的ga3和iaa含量呈先降后升，再降再升的变化趋势，ga3含量最高为349g/g，最低为163g/g;iaa含量最高为9.13g/g，最低为2.45g/g。aba含量呈逐渐下降的趋势，初始值为1.58g/g，贮藏末期降至0.36g/g。本方法可以满足对鸭梨贮藏中种子激素变化的检测要求，为进一步研究鸭梨种子激素代谢与果实褐变的关系奠定了基矗表2激素的加标回收率(略)【参考文献】1nitshjp.hrnalfatrsingrthanddevelpent.hulea.thebiheistryffruitsandtheirprduts.lndn,neyrk:aadeipress,1970：4274727zhang,sheilads,rus