瓜蒌皮中水溶性多糖的提取及含量测定

1、瓜蒌皮中水溶性多糖的提取及含量测定【摘要】目的从瓜蒌皮中提取多糖，并测定其含量。方法水提醇沉法提取瓜蒌多糖。以葡萄糖为对照品，硫酸-苯酚法进展含量测定。结果标准曲线回归方程为A=6.8071+0.0227，r=0.9991，瓜蒌皮中多糖含量为5.43%，平均回收率99.11%。结论瓜蒌皮中多糖含量较高，该方法简便可靠，精细度好。【关键词】瓜蒌皮；多糖；提取；含量测定Abstrat：bjetiveTextratanddeterinethententfplysaharidesinPeriarpiutrihsanthis.ethdsPlysaharidesfPeriarpiuTrihsanthise

2、rebtainedbyhtaterextratinandalhlsedientatin.Phenl-vitrililrietryasusedtdeterinethentent.ResultsThestandardurveasA=6.8071+0.0227,r=0.9991.TheplysaharidententinPeriarpiutrihsanthisas5.43%,reveryrateas99.11%.nlusinTheplysaharidesntentishighinPeriarpiuTrihsanthis,andtheethdispreise,easyandreliable.Keyrd

3、s：Periarpiutrihsanthis;Plysaharide;Extratin;ntentdeterinatin瓜蒌是我国传统中医用药之一。据?本草纲目?记载，其有润肺、化痰、散结、滑肠作用。现代医学研究说明，瓜蒌提取物有扩张冠状动脉、增加血流量、进步耐缺氧才能、降低血清胆固醇、抗菌、抗癌等多种作用1。关于瓜蒌所含挥发油、氨基酸、微量元素、甾醇类和三萜类、油脂等成分的研究已有一些报道，而瓜蒌的多糖成分一直少有研究。本实验对瓜蒌皮中水溶性多糖的提取纯化方法进展了研究，并用硫酸-苯酚法测定了多糖的含量。1仪器与试药紫外分光光度计岛津UV-2401，日本岛津公司，离心机LD-2A型，北京医用

4、离心机厂，旋转蒸发仪ZFQ-85A，上海医疗器械厂，真空枯燥箱DZF-1B，上海跃进医疗器械厂。瓜蒌皮购于浙江平湖药材公司，试剂均为国产分析纯。6%苯酚溶液的制备：取苯酚100g，加0.1g铝和0.05gNaH3，在180182蒸馏，空气冷凝，得白色针状结晶。取重蒸馏后的苯酚15g，精细称定，置250l容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，避光冷藏。2方法与结果2.1瓜蒌多糖的提取与精制瓜蒌皮粉碎，过20目筛，取200g，用95%乙醇浸泡2d脱脂，药渣加水3000l，煮沸4h，放置，8层沙布压滤，残渣重复煮沸提取4h，过滤，合并滤液，离心别离，取上清液，60减压浓缩至原来体积的1/4，浓缩液加4倍量

5、的乙醇，冰箱放置24h，吸出多糖粗品。用Sevag法，氯仿正丁醇41脱蛋白，以3000r/in离心20in，除去蛋白质胶状沉淀，重复操作4次，直至紫外测定在260，280n无蛋白质和核酸的吸收峰。上清液对蒸馏水透析48h，除去氯仿和正丁醇。浓缩透析液至100l，加95%乙醇320l醇析多糖，静置24h，过滤，沉淀物60减压枯燥，得浅黄色瓜蒌多糖(1.8595g)。2.2标准曲线的绘制2.2.1葡萄糖标准溶液的配制精细称取105枯燥至恒重的葡萄糖对照品50g，置500l容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。2.2.2标准曲线的制备2精细汲取上述葡萄糖标准溶液1，2，3，4，5，6，7，8l，

6、分别置10l容量瓶中，加水至刻度。精细汲取1l，加6%苯酚水溶液1.0l，浓硫酸6l，静止10in，旋涡混合5in，室温放置20in，于波长490n处测定吸收度，以1l蒸馏水按同样显色操作为空白，以多糖毫克数为横坐标，吸收度值为纵坐标，求得标准曲线的回归方程为：A=6.8071+0.0227,r=0.9991。见图1。图1多糖含量测定标准曲线略2.3换算因子的测定精细称取60枯燥至恒重的瓜蒌多糖13.7g，置100l容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精细汲取1l，按测定标准曲线同样的方法测得吸收度A为0.487，从回归方程中求出多糖供试品中葡萄糖含量为0.0682g，按下式计算换算因子f，测得f

7、=2.01f=/(D)式中为多糖的质量(g)；为多糖稀释液中葡萄糖浓度(g/l)；D为多糖的稀释倍数。2.4供试溶液的制备和测定精细称取瓜蒌皮粗粉1.0434g，加水20l，沸水浴中提取两次，4h/次，并随时搅拌补水。离心，合并上清液，参加95%乙醇40l沉淀两次，离心。将沉淀加水溶解并定容到100l容量瓶中,摇匀。精细汲取供试品溶液0.2l，加水至1l，按标准曲线项下测定吸收度值，按下试计算多糖含量：多糖含量%=Df/100%式中：为样品溶液的中葡萄糖含量(g)，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因素，为样品的重量(g)，测得平均结果为5.43%，RSD=1.02%(n=3)。2.5稳定性实验

8、精细汲取供试溶液0.2l，加水至1l，按标准曲线项下操作。分别放置30，60，90，120，150，180，210in，测得的吸收度值在3.5h内无变化，RSD(%)=1.08(n=6)。2.6精细度测定精细汲取供试溶液0.2l，共称6份，加水至1l，分别按标准曲线项下操作。2.7加样回收率实验精细汲取含量的瓜蒌多糖溶液0.1l，共称6份，分别精细参加葡萄糖标准溶液一定量，按标准曲线项下操作，计算多糖含量，加样回收率平均为99.11%，RSD=1.67%(n=6)。结果见表1。表1回收率实验结果略3结论通过水提、脱蛋白、透析、醇沉方法从瓜蒌皮中获得不含蛋白质、核酸的中性纯粹瓜蒌多糖，得率为0.9298%。瓜蒌皮中多糖含量为5.43%，经UV扫描最大吸收波长为487n，苯酚-硫酸法测定瓜蒌中多糖含量时，硫酸在总体积中所占比例是否适宜是确保此方法可行性的重要环节，经比照实验硫酸体积和总体积比以22.6为宜。此方法简便可靠，不需要特殊的设备和试剂，稳定性良好，从分析结果看出，在上述条件下测定瓜蒌中多糖的含量，显色反响在3.5