通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织αSMA表达影响的实验研究

1、通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织-SMA表达影响的实验研究【摘要】目的观察通络益肾汤对糖尿病肾病DN大鼠肾小管上皮及间质平滑肌肌动蛋白-SA表达的影响，讨论本方对DN模型大鼠肾保护作用的可能机制。方法采用单侧肾切除+STZ诱导DN大鼠模型，大鼠随机分为正常组、病理组、通络益肾汤治疗组、西药治疗组。观察各组大鼠治疗后肾功能BUN、Sr、24h尿蛋白定量24hUpr、尿2微球蛋白2-G含量、肾脏肥大指数及肾组织-SA的表达等指标的变化。结果与病理组比拟，通络益肾汤治疗组大鼠肾脏肥大指数、BUN、Sr显著改善P0.01，24hUpr、尿2-G明显下降P0.01，肾小管上皮及间质-SA阳性表达率明显下降

2、P0.01，与西药组比拟，各项指标无显著性差异P0.05。结论通络益肾汤可能通过降低肾小管上皮-SA的表达，抑制肾小管上皮-间质细胞转分化，延缓肾小管间质纤维化，从而到达保护肾脏，改善肾功能的目的。【关键词】通络益肾汤糖尿病肾病-平滑肌肌动蛋白糖尿病肾病DN是糖尿病D开展到一定阶段而出现的主要并发症之一。DN持续、进展性开展，将导致终末期肾脏病(ESRD)。肾间质纤维化是导致ESRD的主要原因和共同病理过程，肾小管上皮-间质细胞转分化ET那么是肾间质纤维化的重要发病机制之一1，肾小管间质-平滑肌肌动蛋白-SA又是ET的标志因子2。此前我们针对DN肾亏阴阳两虚、血络瘀阻的病机，使用通络益肾汤治疗

3、DN，临床获得较好疗效3。本实验通过观察通络益肾汤对DN模型大鼠肾小管上皮-间质细胞转分化中-SA表达的影响，讨论其对DN肾间质纤维化的影响，提醒其肾保护作用的可能机制。1材料1.2用药及试剂通络益肾汤由桃仁、水蛭、生地、酒大黄、山萸肉、山药、黄芪等组成，大鼠用量按文献折算4。药物经常规煎煮、过滤，水浴蒸发至每毫升含生药2.23g，置于4冰箱保存备用。洛汀新：北京诺华制药消费，批号X1036；糖适平：北京万辉双鹤药业有限责任公司消费，批号070822。链脲佐菌素STZ：购自siga公司，批号S8050。-SA试剂盒，购自武汉博士德生物工程。2方法2.1模型复制及分组给药大鼠购回后适应性喂养1周

4、，称体重，经尿糖、尿蛋白定性检测为阴性后，随机抽取9只作为正常对照组A组。所有大鼠以10%水合氯醛3.5l/kg腹腔注射麻醉、备皮、常规消毒，在背部左肾区做11.5切口，A组仅暴露出左肾，用玻棒拨动后，缝合切口。模型组大鼠暴露左肾，剥离肾脏脂肪及肾上腺，结扎左肾门血管，切除左肾，缝合切口。碘伏消毒，红霉素软膏涂抹创口。术后1周，模型组按50g/kg体重腹腔内注射2%STZ溶液，A组腹腔注射等量的枸橼酸钠缓冲液。72h后经尾静脉取血，测空腹血糖高于16.7l/L为D模型成功。1周后，随机抽取两只测尿微量白蛋白15g/l，确定DN模型形成5,6。将造模成功后的43只大鼠随机分为病理组15只B组，通

5、络益肾汤治疗组14只组，西药治疗组14只D组。A、B组分别给蒸馏水2l灌胃，组给通络益肾汤煎液灌胃22.3g/kg,D组给洛汀新1.5g/kg糖适平10g/kg蒸馏水混悬液灌胃。以上给药均1次/d，共持续10周。2.2观测指标及方法24hUpr、尿2-G测定：治疗完毕后于处死前1d，代谢笼搜集尿液，检测24hUpr、尿2-G含量；治疗完毕后，腹腔麻醉下心脏采血，全自动生化分析仪检测BUN，Sr；大鼠处死后取肾脏称重，计算肾脏肥大指数肾重K/体重B；摘取右肾，肾组织常规石蜡包埋，切片，按-SA试剂盒操作说明，免疫组化法测定-SA表达。2.3资料统计与分析各组数据以s表示，组间比拟采用t检验。所有

6、数据统计学处理运用SPSS13.0进展分析。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1治疗后各组大鼠肾功能、肾脏肥大指数的比拟结果见表1。表1各组模型大鼠肾功能、肾脏肥大指数的比拟略B组大鼠BUN、Sr、肾脏肥大指数较A组明显增高，均有极显著性差异P0.01；与B组比拟，组、D组大鼠BUN、Sr、肾脏肥大指数明显降低，具有极显著性差异P0.01。、D两组比拟，上述指标无明显差异P0.05。说明通络益肾汤和西药治疗在改善DN大鼠肾脏肥大指数、肾功能方面有都有比拟理想的疗效，两者之间无显著性差异。3.2治疗后各组大鼠24hUpr、尿2-G含量比拟结果见表2。表2各组模型大鼠24hUpr、2-G含量略B组大

7、鼠24hUpr、2-G含量较A组明显升高，有极显著性差异P0.01；组、D组与B组比拟，24hUpr、2-G含量均有明显降低，具有极显著性差异P0.01。组与D组比拟，两者无明显差异P0.05。说明通络益肾汤和西药治疗均有降低24hUpr、2-G含量的作用，且疗效相当。3.3各组大鼠肾脏组织-SA的表达免疫组化阳性表达分析，每组样本按顺序观察9个视野,采PHTSHP图像处理软件计算小管间质免疫组化检测阳性面积和小管间质总面积的比值,取9个比值的均值作为每组实验大鼠-SA的测定值。结果见表3。表3各组大鼠肾组织-SA的比拟略4讨论肾间质纤维化主要表现为肾脏固有细胞消失、肌成纤维细胞增多、细胞外基

8、质沉积等7。糖尿病肾病是慢性开展过程，目前研究说明，慢性肾脏疾病肾功能的恶化趋势主要决定于肾小管间质纤维化(TIF)的程度和范围。在TIF过程中,肾小管基底膜被破坏的同时常伴有肾小管上皮细胞向肌纤维母细胞样细胞转分化，称之为肾小管上皮-间质细胞转分化ET，继之出现间质区细胞外基质(E)大量产生和沉积,导致间质区扩展加宽,肾小管萎缩,形成TIF。另有资料显示,肾脏病时肾间质中的成纤维细胞大局部都是通过ET由肾小管上皮细胞(RTE)转化而来的,且在基因鼠模型中,选择性阻断ET可以明显改善梗阻性肾病所致的TIF。因此,ET现象已日益被认为是TIF形成和进展过程中的重要环节1。现代研究发现-SA是肾小

9、管上皮细胞转化和肾间质纤维化程度的重要指标2。研究发现人肾组织中肾小管间质内-SA表达量与肾小管间质纤维化程度及肾功能恶化程度正相关8。李暖等9动物实验研究亦发现腺嘌呤肾小管间质纤维化大鼠模型第7周-SA表达已明显增多，第12、17周时-SA表达量进一步增加，-SA变化与肾病理、肾功能、尿蛋白变化一致，提示随病情进展,-SA表达量增加,肾脏病理变化越来越重,促进了肾小管间质纤维化的发生。我们的研究也证实，病理组大鼠肾小管上皮及间质-SA的阳性表达率明显高于正常对照组P0.01。本课题既往的临床研究证实，通络益肾汤能显著改善DN患者临床病症，能有效地降低或控制DN患者的尿蛋白，降低血糖、血脂，改

10、善患者的肾功能BUN、Sr；还能显著改善DN患者的局部血液流变学指标，对DN患者具有确切的治疗效果3。实验研究发现，该方能明显升高DN模型大鼠血浆N程度，显著降低其血浆ET的含量6,10。本实验结果显示,通络益肾汤能有效改善DN模型大鼠肾脏肥大指数、肾功能，降低24hUpr、尿2-G含量，对DN模型大鼠有良好的治疗效果。这一结果再次证实通络益肾汤的疗效，也验证了我们此前的研究。同时发现经本方治疗后，DN模型大鼠肾小管间质-SA表达率较病理组明显下降；观察肾脏病理变化发现，肾间质纤维化程度明显减轻。提示通络益肾汤有效治疗DN的机理与有效降低肾小管上皮及间质-SA的阳性表达，抑制肾小管上皮细胞转分

11、化，延缓肾小管间质纤维化有关，从而到达保护肾脏组织，改善和恢复肾功能之目的。【参考文献】1熊璟，李航，周全荣，等.中医药对肾小管上皮-间充质转变作用的干预研究概况J.中国中西医结合肾病杂志，2022，7(12)：743.2王瑞英,姚敏,王棉,等.2型糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中-SA的表达及其与肾功能的关系J.中国老年学杂志,2022，265：647.3董正华,曹广顺,曹雯，等.通络益肾汤治疗糖尿病肾病30例J.上海中医药杂志，2022，419：46.4孙敬方.实验动物方法学，第1版.北京：人民出版社，2001：478.5邢淑丽,郑君芙,黄文政.单侧肾切除STZ诱导糖尿病肾病大鼠动物模型研究J.中国中医急症，2022，156：643.6李小会，董正华.通络益肾汤对链脲佐菌素诱导DN大鼠血浆一氧化氮影响的实验研究J.时珍国医国药，2022，178：1399.7NgYY,HuangTP,Yang,etal.Tubularepithelial-yfibrblastsTransdiff-erentiatininprgressivetubulinstitialfibrsisin5/6nephretizedratsJ.KidneyInt,1998，54(3):864.8蒋文功,刘