体外诊断试剂临床试验资料- 唾液酸化糖链抗原测定试剂盒（胶乳凝集法）-临床试验方案（第一版）

1、唾液酸化糖链抗原测定试剂盒（胶乳凝集法）临床试验方案 2015年12月4日 第二版申办单位：XX医疗科技（中国）有限公司体外诊断试剂临床试验方案产品名称：唾液酸化糖链抗原测定试剂盒（胶乳凝集法） 型号规格： KL-6缓冲液：24mL2 KL-6胶乳液：8mL2 申请人（盖章）： XX医疗科技（中国）有限公司 承担临床试验医疗机构（盖章）：上海交通大学医学院附属仁济医院 临床试验类别： 临床验证 临床试验开展时间： 2015年10月2015年12月 临床试验负责人（签字）： 统计学负责人（签字）： 2015年12月4日说 明1、医疗器械产品在临床试验前，必须制定临床试验方案。2、临床试验方案由医

2、疗机构和实施者共同设计、制定。实施者与医疗机构签署双方同意的临床试验方案，并签订临床试验合同。3、市场上尚未出现的第三类植入体内或借用中医理论制成的医疗器械，临床试验方案应当向医疗器械技术审评机构备案。4、医疗机构和实施者应当共同制定每病种的临床试验例数及持续时间，以确保达到试验预期目的。5、临床试验类别分临床试用和临床验证。目录 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc427938739 一、临床试验的背景 申办单位：XX医疗科技（中国）有限公司一、临床试验的背景间质性肺疾病（ILD）是一组主要累及肺间质、肺泡和（或）细支气管的肺部弥漫性疾病。ILD并不是一种独立的疾

3、病，包括了病因不明的特发性间质性肺炎和病因明确的药物性肺炎、放射性肺炎等，多达150多个病种。ILD的组织病理学的形态和临床的病情是极其多样的。IPF（特发性肺纤维化）就是ILD中的一种，这是一种治疗效果不佳，肺泡纤维化呈进行性，直至呼吸衰竭的预后不良疾病，然而，包括IPF在内的ILD的诊断及活动期的判定，仅凭胸部X光片，即使对于呼吸科医生，也比较困难。近年来，HRCT的使用，为ILD的临床诊断提供了重要的手段，但对于ILD的病情分析、疾病活动性及预后判断，仍不能作为可靠的指标1。唾液酸化糖链抗原KL-6是河野洋平等人发现的人体血清中可溶性循环抗原，表达于型肺泡上皮细胞表面，被定义为Clust

4、er9的MUC-1大分子粘蛋白，分子量超过1000kDa2。据报道，相较于健康人和其他呼吸疾病患者，KL-6在间质性肺病患者血清中的含量显著升高3。根据ROC的分析，确认血清中KL-6值是具有实用性的诊断指标4。在日本，特发性间质性肺炎已被厚生劳动省定为特定性疾病，符合诊断标准的部分患者可接受公费治疗。KL-6的上升作为血清学检查指标，收载于诊断标准中5。在日本国内开发时的临床试验中，以175名健康体检受试者为对象，检测其KL-6测定值的分布，采用平均值2SD法，获得123370U/mL的结果；而患有特发性间质性肺炎患者检测值的分布情况是，其测定值的平均值1SD，获得1237 1905 U/m

5、L的结果。结果显示，ILD以外的疾病，很少超过临界值500U/mL6。二、产品的检测原理和方法2.1 介绍XX医疗株式会社生产的KL-6测定试剂盒（胶乳凝集法）为液体双试剂，采用胶乳凝集比浊法定量检测血清或血浆中的KL-6浓度。 2.2 主要成分KL-6缓冲液： KL-6胶乳液：鼠抗人KL-6单克隆抗体致敏胶乳颗粒2.3 检测原理 标本中的KL-6与鼠抗人KL-6单克隆抗体致敏胶乳颗粒发生抗原抗体反应，形成凝集。对此凝集物质的吸光度进行测定，通过测定吸光度的变化可以求出标本中KL-6的浓度。2.4 特征 本品为无需调制的液态试剂，采用胶乳凝集比浊法，不需要调制试剂或样本稀释等检测前准备，可以在

6、全自动生化分析装置上直接使用，测定仅需10min左右；试剂稳定性良好，有效期26个月，210保存。2.5 试验参考范围正常参考范围：105.3401.2U/mL Cutoff值：500 U/mL2.6 适用机型本产品应用于定量检测血清或血浆中KL-6的浓度，适用于各种全自动生化分析装置：包括日立高新科学系统 7700、7180、7170S、7170、LABOSPECT008型（罗氏模块）、东芝医疗系统 TBA-120FR型（雅培ARCHITECT C8000）、贝克曼库尔特 AU-640型、JEOL BM6070、BM6050、BM9130、BM1650(BM9030)型全自动生化分析仪。三.

7、 临床试验内容和目的3.1 临床研究内容本次试验为已有同品种批准上市产品的临床研究。以参比试剂富士瑞必欧株式会社的涎液化糖链抗原KL-6检测试剂盒（化学发光法）为相对标准，验证考核试剂唾液酸化糖链抗原KL-6测定试剂盒（胶乳凝集法）与参比试剂针对统一临床标本的试验结果是否具有较高的符合率（一致率）。3.2 临床研究目的按照国家食品药品监督管理局相关规定的要求，为产品注册申请的需要，进行体外诊断试剂的临床研究。使用XX医疗株式会社生产的KL-6测定试剂盒，以中国受试者为对象，验证预申报产品KL-6测定试剂盒（胶乳凝集法）临床应用的可行性及检测结果的可靠性，并具备一定的临床应用价值。四. 试验总体

8、设计4.1 样本选择4.1.1样本量及样本选择依据按照体外诊断试剂临床研究技术指导原则的要求，对所选数量的样本进行分析，具备一定的统计学意义，使临床试验结果合理可靠，同时也可对考核试剂做出科学的评价，节约社会成本。本产品在该院的临床试验总数不低于100例，其中ILD患者样本数不少于总数的30%，并包括105.3401.2U/mL范围内不同水平分布的样本。本产品是检测血清或血浆中KL-6的诊断试剂，为验证血清与血浆检测的等效性，因此安排医院另留存50例以上的同一病人的血清、血浆的样本进行检测。4.1.2 样本要求 本试验样本要求使用血清或者血浆（肝磷脂血浆、EDTA血浆、NaF-EDTA血浆）。

9、血清（血浆）分离后，尽可能于当日进行测定。若当日不能完成测定，按以下方法保存：1周内检测保存于28冰箱，需长期保存则存放于-80冰箱，避免反复冻融。测定冻存样本时，将样本先恢复至室温（1530）后，再进行检测。以保证可以分批测定或同批检测。 本试验使用医院已经确诊的ILD患者及非ILD患者的样本，并具有确切临床诊断信息，同时样本对象需要本人自愿签署参加本实验的同意书，且年龄在18岁以上的男性或女性。本试验需要剔除严重溶血、脂血、黄疸及患者信息不全等样本。试验后如有样本因不符合要求被剔除，应予以说明；如剔除样本后样本数量不能满足试验要求，应予以补充样本，以达到数量要求。4.2试剂系统考核系统为日

10、本XX医疗株式会社生产的KL-6测定试剂盒（胶乳凝集法），使用配套的校准品与质控品，检测仪器为日立7600全自动生化仪。参比系统为富士瑞必欧株式会社的涎液化糖链抗原KL-6检测试剂盒（化学发光法），使用配套的校准品和质控品，检测仪器为Lumipulse G1200全自动化学发光免疫分析仪。在对比试验研究中，考核系统与参比系统中重复测定结果仍不符的样本，应采用第三方试剂进行进一步验证试验。第三方试剂采用由EIDIA株式会社生产的Picolumoi KL-6检测试剂盒，该检测试剂需要使用专用仪器Picolumi 8220、Picolumi、Picolumi。本临床试验所需要的考核试剂、参比试剂和第

11、三方试剂由申请人提供。按照厂家提供的试剂盒的说明书及相应上机参数进行操作，分别绘制校准曲线后，将各自质控品作为标本在两个系统上进行测定。待质控结果符合预期值后，再进行试验标本的上机测定。4.3 临床样本分组样本采用盲法分组，研究者使用考核试剂检测血清样本，不知结果及样本任何临床信息（临床背景、诊断等），避免受到临床提示。具体方法如下：每家临床单位按照样本的入选、排除标准选择合适的样本入组后，打乱原有顺序，重新进行样本随机编号并记录。此记录应和样本信息一一对应，编组者不参与实验操作以及结果分析。临床试验的操作者应仅仅能够看到样本编号，无法得知样本的原有信息。在全自动生化分析仪上使用考核试剂检测血

12、清样本。收集结果，结合临床信息汇总统计。全部样本信息以及试验编号、试验结果、原始试验数据应一一对应，并在临床试验单位存留备查。4.4 样本检测本试验样本检测前要求质控结果符合要求。检测时将临床已经确诊的同一样本在考核系统上进行测定，记录检测结果，填写临床信息或其他相关原本信息，并打印原始数据。所采集的样本的临床信息包括但不限于以下内容：身高、体重、年龄、性别疾病及诊断日期职业史、治疗药物（时间）、有无吸烟史影像检查结果五临床试验流程临床试验报告样本选择样本收集记录样本信息考核试剂检测结果参比试剂检测结果考核试剂与参比试剂符合样本考核试剂与参比试剂不符样本两试剂最终结果不符的进行第三方验证数据统

13、计5.1 临床研究流程图图1 临床试验流程图根据入选标准和排除标准进行临床样本选择使用少量参比试剂和考核试剂进行预实验，熟悉试剂操作过程和参数用考核试剂和参比试剂对样本进行检测计算结果差异，相差较大的样本进行第三方验证。以第三方验证试剂检测结果作为真实值看看参比试剂和考核试剂的结果哪个与真实值更接近所有检测结果记录在案临床单位完成分报告，申请单位完成最终的临床实验总结报告同一患者血清样本血浆样本考核试剂检测结果考核试剂检测结果考察血清样本与血浆样本的相关性比较5.2 血清与血浆样本对比图2 血清血浆对比试验流程图六. 数据处理与记录保存6.1 统计学分析统计学的分析方法是以参比试剂的检测结果为

14、相对标准，对同一样本的两种检测结果进行回归方程分析，并计算相关系数。6.2 成功和失败的可能性分析6.2.1 成功可能性分析本试验使用患者的血清样本进行测定，试验的样本量充足，由经验丰富的技师进行操作。公司有技术支持人员，保证应用的仪器设备在医院正常运行使用。6.2.2 失败可能性分析1）试验中出现断电、断水等，导致仪器不能正常运行，出现试验失败。但医院备有电源、辅助供水设施，不致出现上述情况。2）人员操作不当，导致试验失败。但本试验选择操作人员为具有多年临床操作经验的人员，将出现操作不当的现象的可能性极小。3）如果试验中样本没有达到要求，则会导致试验结果的不可信，导致试验的失败。6.3 样本

15、相关信息记录按照试验记录表格的要求记录样本相关信息，包括：样本编号、患者姓名（用拼音简写代替）、年龄、性别、检验单号（或者住院号等样本在院内的识别代码）、临床诊断结果、样本类型、样本备注。以上信息尽量完整。6.4 研究中发生的问题及其处理措施如试验中出现差异较大的样本测定结果,应做如下分析:1）操作是否有误2）仪器状态是否正常3）样品状态是否符合检测标准4）试剂状态是否符合检测标准5）实验室环境是否符合要求经过上述分析,若是以上错误原因,应修正后重新进行试验。七. 统计方法和评价方法7.1 考核系统与参比系统结果的统计分析和评价用两种试剂盒（考核试剂和参比试剂）分别检测同一个样本，再分别对检测

16、结果作如下统计：7.1.1 需要第三方验证的样本判断：1）差值：XX的数据EIDIA的数据差值，然后计算所有的差值的均值和标准偏差SD，再计算均值2SD；这个计算，主要是针对较高浓度的样本的差值；2）差值比例：（XX的数据EIDIA的数据）/ EIDIA的数据，然后计算所有比值的均值和标准偏差SD，在计算均值2SD；这个计算，主要是针对较低浓度的样本的差值。7.1.2 统计描述：包括例数、全距、极值、总和、均值、标准差、方差、偏度、峰度等。7.1.3 定量结果分析：1）双变量相关性；以两种试剂检测结果作为变量，双变量分析目标是确定两个变量之间的相关性，测定它们之间的预测或解释的能力。双变量统计

17、分析技术包括：相关分析和回归分析。在0.01水平上的相关性。2）以参比试剂检测结果为自变量Xi，以考核试剂结果为因变量Yi，以Yi对Xi作散点图，并检测两种方法的线性相关性。3）做偏倚图（bland-altman），检验两种试验结果的偏差。7.1.4 临床评价标准双变量相关性大于0.95。两种试剂检测的结果做散点图，分析其线性相关系数，r0.95。Bland-Altman偏倚图用来比较两组结果的差值是否在1.96个SD范围内，若95%以上的差值在1.96SD范围内，可视为结果具有一致性。7.1.5 统计处理的一般公式本次临床试验结果使用SPSS20.0中文版软件进行统计学处理。相关性计算：将考

18、核试剂与参比试剂的测定数值进行相关分析，计算相关系数r，应得r0.95，P0.001，两组测试数值具有显著性正线性相关关系。r值计算公式如下：r=i=1nXi-XYi-Y i=1nXi-X2Yi-Y2通过两种试剂的检测结果做散点图，并计算其线性相关系数，从而判断两种产品的检测一致性。Bland-Altman偏倚图绘制：以参比试剂结果为Xi，考核试剂结果为Yi，计算均值(Yi+Xi)/2和差值Yi-Xi，以均值(Yi+Xi)/2为横轴，Yi-Xi为纵轴，做散点图。计算差值的均数d和标准差Sd，确定一致性界限为d1.96 Sd。若有95%的差值位于该一致性界限以内，则视结果具有一致性。7.2 血浆

19、与血清样本比对结果统计分析及评判血浆与血清样本相关性：同一患者的血浆和血清样本，用考核试剂进行KL-6检测，以这两个检测结果作为双变量，分析目标是确定两个变量之间的相关性，双变量统计分析包括：相关分析和回归分析。以同一患者的血浆检测结果为自变量Xi，血清检测结果为因变量Yi，以Yi对Xi作散点图，通过计算相关系数，确定两种样本的线性相关性。r值计算公式如下：r=i=1nXi-XYi-Y i=1nXi-X2Yi-Y2评判标准为：两种样本检测的结果做散点图，分析其线性相关系数，若r0.95，两种样本具有显著性正线性相关关系。八. 临床试验涉及的伦理问题和病人知情同意书的说明本临床试验必须遵循赫尔辛

20、基宣言和中国有关临床试验研究规范、法规进行。根据体外诊断试剂注册临床试验技术指导原则（国食药监械2007240号）中临床研究的基本原则中“该临床研究对受试者几乎没有风险，可不提交伦理委员会的审评意见及受试者的知情同意书，但临床研究者应提供有关伦理事宜的说明。” 由于本次临床研究的KL-6检测试剂盒（胶乳凝集比浊法）产品为体外诊断试剂，在临床试验中不需要与患者直接接触，不向病人提供检测报告，且试验结果只用于对比研究，不涉及个人隐私，不作为辅助诊断依据，不会给受试者带来任何风险，因此可不提交受试者的知情同意书。九其他需要说明的内容9.1 有关安全性方面的说明按全国临床检验操作规程。9.2 风险的预

21、测及事先应采取的措施临床试验开始时，临床试验单位应做好充分的准备，掌握本试剂及参比试剂的使用方法和相关技术，确保有充分的人力、时间保障试验的进行，预测能采集到足够的样本。申请者对本试剂的使用及相关技术对临床试验人员进行充分的培训，并提供足够的试验试剂。在没有做好充分的准备前，不开展临床试验。本产品为体外诊断试剂、本身不会对受试者造成直接的伤害。但临床试验的诊断结果不能作为医疗机构的诊断结果。临床试验负责人应时刻进行监督。本产品的缓冲液及胶乳液中含有作为防腐剂的Proclin300，对皮肤有刺激。若误接触到皮肤或衣物时，请迅速用水充分冲洗，如遇皮肤发炎时请接受医生治疗。9.3 各方承担职责9.3

22、.1 申办者职责与医疗机构共同设计、制定医疗试验方案，签署双方同意的临床试验方案及合同；向医疗机构免费提供检测合格的受试产品及相关消耗品；试验前对临床试验人员进行相关培训；负担与试验相关的费用，承担试验单位的劳务费。申办者中止医疗器械临床试验前，应当通知医疗机构。9.3.2 承担临床试验的医疗机构职责应当熟悉申办者提供的有关资料，并熟悉受试产品的使用；与申办者共同设计、制定临床试验方案，双方签署临床试验方案及合同。严格按操作要求进行试验，并如实记录结果。提供临床试验报告，并对报告的正确性及可靠性负责；对申办者提供的资料负有保密义务。9.4 参加临床试验人员主要研究人员研究单位职称/职称李敏上海

23、仁济医院研究员徐晓萍上海仁济医院副主任技师参考文献1 河野修兴等；间质性肺炎血清标记KL-6，SP-D，SP-A的诊断意义最新医学,56:2521-2528, 20012 Stahel RA et al；Third international workshop on lung tumor and differentiation antigens : Overview of the results of the central data anaiysis. Int J Cancer 8(Suppl):6-26, 19943 Kohno N；Serum marker KL-6/MUC1 for the diagnosis and management of interstitial pneumonitis. J Med Invest 46:151-158, 19994 Kobayashi J et al；KL-6: A Serum Marker for Interstitial Peumonia. Chest 108:311-315, 19955 日本呼吸器学会弥漫性肺疾患的诊断治疗指南编制委员会编辑；特发性间质性肺病诊断和治疗手册改订第2版, 20116 高松久美子等；根据乳胶凝集比浊法探讨Nano