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文档简介

1、基因编辑服务CRISPR/Cas9核酸酶可以形成特定序列的双链DNA断裂（DSB）。当细胞使用非同源末端连接（NHEJ）途径修复这些基因时，会产生小的插入或删除突变（indels）并扰乱基因。或者，DSB可以通过同源重组修复途径（HDR）特异性改变碱基，或者可以使用donorvector来形成基因插入。由于CRISPR/Cas9易于构建和在人细胞中的毒性较低，在基因编辑中备受青睐。然而，由于iPSC不像普通肿瘤细胞系那样具有总染色体异常和异常强烈的DNA损伤反应的特点，基因编辑在人类iPSC中成功率更低。CRISPR-U采用了最大化基因组编辑效率的策略，我们在人类iPSCs中获得的基因切割效率

2、和同源重组效率比传统方法提高10倍。基因敲除CRISPR-U基因敲除iPSC细胞通过核转染法将gRNA和Cas9转入iPSC细胞中，药筛完成后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序验证，筛选出基因敲除的阳性克隆。常见基因敲瞌iP5f近胞类型;变型小片版敲除移码敲除片废敲除方案个片段敲除方案，gRU白谧在夕卜显子上两瑞的内含于中，酸除外盅子编码碱基数为非彳倍数，散除后可造成移43.移吗敲除方案,gRN也设在外显于上，缺失的碱基数大北3倍匏，破除后可发生移码突变.大片段截除方案，将整个拉因的编码序列般除,达到大片段敲除的效卑.曲用通过热因失;舌研兖县因功成CRISPR-UKOStr

3、ategydiagramgRJMASDR%32基因触除的I目标序更L阳性克隆在指定婚的双等位基因RAG2中有诩突变.0RN*IkGGTTATGClHlACAlCCfcGATGG-IWT幻融、0*1g眄4_Jkoti蜀制IliiniEiriiHihiw礴十rnnTmnTiWTMi-ftmawpuiMMUii%*c*!yctayrrlAcctgcmiKl-nMiFL1irr.1:qtmbkM二二!|IIIIi贴=!工31I：iiI-ta：V*.*C）。参考文献：Pires,C.,Schmid,B.,Petr无us,C.,Poon,A.,Nimsanor,N.,Nielsen,T.T.,.&Freude,K.K.(2016).Generationofagene-correctedisogeniccontrolcelllinefromanAlzheimersdiseasepatientiPSClinecarryingaA79VmutationinPSEN1.Stemcellresearch,17(2),285-

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