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1、Word文档 琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测 一. 试验目的 1、把握琼脂糖凝胶电泳的原理;2、学习琼脂糖凝胶电泳的操作。二. 试验原理琼脂糖是一种自然聚合长链状分子，沸水中溶解，45开头形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小打算于琼脂糖的浓度。DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分别DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。溴化乙锭（EB）未扁平状分子，在紫外照耀下放射荧光。EB可与DNA分子形成EB

2、-DNA复合物，其放射的荧光强度较游离状态EB放射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA含量成正比。三、仪器和试剂仪器： 微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉试剂： 琼脂糖：1.0%；电泳缓冲液（50 TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g ，冰/醋酸5.7ml ， 0.25mol/L EDTA (pH8.0)20ml ，加蒸馏水至100ml ） EB：5 ?l / 100 ml TBE电泳材料：标准分子量核酸（DL2021）四. 操作步骤（1）制胶（以20 mL为例）a. 称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液（pH 8.0），摇匀；b. 微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（

3、要防止过热溢出三角瓶）；c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖（约50）加入2ul EB后，混匀称，倒入其中，直至厚度为46 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30 45 min)；d.当心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。（2）点样用微量移液器将5 ?l含蓝色染液的 DL2021 加入点样孔下部。（3）电泳打开电源开关，调整电压至35 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观看结果。（4）观看将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，依据条带粗细，可粗略估量该样品DNA的浓度。犹如时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估量样品的分子量。

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