四小件第4章1.微生物生理学

1、微生物生理学Microbial physiology任课教师：: ni23502958:DNA有关的酶第四章第一节与一、E.coliDNA聚合酶I（全酶）（Pol1）是由一千个AA组成的一条肽链，分子量 109000D，可被胰蛋白酶切成一个大片段和一个小片段。大片段：具有5 3 聚合酶活性，和3 5 外切酶活性。小片段：有5 3 外切酶活性。1结构：有5个活性位点（Fig30）2功能及作用（Fig29）（1） 5 3 DNA聚合酶活性（）5 3 外切酶活性（修复作用）3 5 外切酶活性（核对作用）3酶I的作用底物（图3-2）聚合酶II、III二、酶II、III只能利用较短的“间隙”DNA作为模

2、板，两者都不能利用单链DNA作模板，酶II缺少5 3 外切酶活性DNA中， pol III是pol I的15倍，是pol II的300倍，所以 pol III主要负责DNA。三、真核生物DNA聚合酶高等真核细胞中存在四种：、（线粒体中），它们的作用与E.coli聚合酶相似，但不具备核酸外切酶。四、T4噬菌体DNA聚合酶它与DNApolIklenow大片段相似，具53 聚合酶活性及3 5 外切酶活性。五、Taq DNA聚合酶是一种耐高温的酶（75-80），主要用于DNA的体外扩增（PCR反应）。五、单链结合蛋白），又称双螺旋反稳定蛋白（HDP）SSB（特性：可降低DNA的溶解温度（Tm）和互补单

3、链 DNA的复性温度。和单链DNA结合后使之免受酶解和破坏。可以触发DNA结构的变化，使之有利于某种功能的进行等。六、解旋酶（Unwinding protein）or（Helicase）也叫螺旋酶特性：解开双链DNA，使之变成单链形式，能量ATP.有2类：（1）5 3方向链的解旋酶I、II、III。（2） 3 5方向链的解旋酶repprotein七、旋转酶也叫转环酶：（异构酶II）特性：可将共价闭合环状的超螺旋DNA分子变成松驰状态。它能产生负超螺旋并消除叉移动所产生的正超螺旋。八、DNA连接酶第二节引物与酶引物大多为一段RNA，由一种独特的RNA聚合酶，这种酶称为引物酶，现称编码。酶。E.c

4、oli的酶由dnaG酶与有关蛋白质相互结时，才有活性，这种复合体称为一个复合体体（体）。它由预体和酶组装而成。预引发体由组装成。、n 、n 、i结合体组装第三节 E.coli DNA过程（Fig22，）。1识别起始点，并由此起动，RNA引物。 DNA 解链，由解旋酶和单链结合蛋白与 DNA的两条链结合，使DNA的局部双链解开成单链。RNA引物生成，以DNA为模板，RNA聚合一段RNA引物，酶催化下5 3 。方向为4在RNA引物上DNA，5 3 方向为先导链，3 5 方向的为后续链。5 RNA引物切除。由DNA聚合酶I降解引物。6DN段连接。在DNA聚合酶I作用下，再DN段，填补去除引物后的空隙

5、，最后连接酶作用，形成与两条母链互补的DNA子链（半保留）在叉中进行。第四节、单链DNA噬菌体的（G4，M13，X174）由 SS RF形式（Fig32）SS：（Single-Strand）单链RF：（replicative form）双链DNA（+）（）双链第五节、由RFSS（X174）滚环模型形式1正链在原点被CisA蛋白切开，并结合于5 末端。2rep蛋白和SSB蛋白结合，需要ATP。3.以闭合的负链为模板，在polIII作用下，自正链3 OH端延伸，新的正链，同时负链随着正链的延长而定向转动。4完毕，特定的酶作用使之分离，CisA蛋白作用下连接成闭环状。X174滚环模型四、X174负链

6、1. 识别：SSB蛋白结合。过程原点有一小段发夹结构。n、n 2. 组装：由dnaB和dnaC结合，再与n、n 、n 、 i 装 配 成 一 个 复 合 体 （ 预体Preprimosome），它能识别预位点。3.移动:当预体形成之后，酶加入，成为体（primosome）,并引物.4.引物延伸:在引物之后，整个体在单链DNA上沿着5 3 方向移动.预位点只有一个，而位点有多个，多个引物。在DNA链。此基础上5.DNA链延伸。6.连接。X174负链质粒Col E1五、子1单向由特异的起点开始。（1）由一段RNA引物所引导，该引物的起点上游555bp处。启动子位于（ 2 ） RNA 引物与DNA 模板链形成杂交体，RNAaseH在起点处切断RNA链，产生3 OH作为DNA的引物，称为RNA II。E.coli质粒Col E1子2 RNA引物形成的调节系统(1)RNA的成熟由另一个不翻译的RNA小分子长108nt（称为RNA I）所控制。它可与RNA II序列互补，碱基配对而结合，并RNA用，从而II折叠，抑制了RNAaseH的作了引物的成熟（负调节）。(2).在Ori位点下游400-600bp之间编码产生一个63个氨基酸的小蛋白，称Rop蛋白，它可以增强RNA RNA I对I和R