草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选的研究

1、草珊瑚离体不定丛芽诱导因子筛选的研究作者：潘见欢潘超美陈良坚黄崇才赖珍珍【摘要】【目的】探讨影响草珊瑚不定芽诱导的培养因素，为建立草珊瑚初代离体培养体系提供依据。【方法】以草珊瑚下胚轴诱导获得的无菌再生苗茎段为外植体，考察6苄氨基嘌呤(6BA)和吲哚丁酸(IBA)不同浓度配比、光照时间和强度以及温度对草珊瑚离体不定芽高频诱导的影响。【结果】6BA和IBA组合能有效提高草珊瑚不定芽的诱导率，而高浓度的植物激素会抑制草珊瑚不定芽的生长;草珊瑚在散射光或弱直射光照射下生长势头好，暗培养或过强直射光会出现植株发黄、皱缩、甚至死亡的现象;在温度为25时，草珊瑚不定芽诱导率达到100%，低于25或高于30

2、均不利于其生长。【结论】以MS培养基为基本培养基，附加25mg/L6BA+01mg/LIBA，温度为25，采用柔弱自然散射光或低于2000lx直射光照射，时间少于8h能有效促进草珊瑚离体不定芽的诱导，诱导率达8298%。【关键词】草珊瑚/生长和发育;不定丛芽;培养基，条件性草珊瑚Sarcandraglabra(Thumb)Nakai，属金粟兰科Chloranthaceae草珊瑚属Sarcandra，又叫九节茶、肿节风、接骨木，为多年生草本或亚灌木。草珊瑚具消炎、清热、解毒和舒筋活血作用，临床用于治疗多种炎症。最新研究发现草珊瑚对肿瘤，尤其是急性白血病有一定治疗效果1。近年来草珊瑚已被开发成一系

3、列药品和日用品，如草珊瑚口服液2、草珊瑚清口香3和草珊瑚注射液4等。随着开发利用的不断扩展，忽视了对其资源的保护，致使野生资源遭受毁灭性的破坏，因此挽救草珊瑚种质资源的研究势在必行。目前对草珊瑚的研究主要集中在常规栽培、药材的组织鉴别以及化学成分组成的分析上，在离体快速繁殖方面的研究甚少。本文在建立草珊瑚离体快速繁殖培养体系研究的基础上，对草珊瑚的离体丛芽诱导培养进行了多方面考察，旨在为肿节风药材生产的源头草珊瑚优质种苗(试管苗)繁育的规模化、产业化生产奠定基础。现报道如下。1材料与方法11药材试验药材采自广州帽峰山野生草珊瑚，经广州中医药大学药用植物学教研室潘超美教授鉴定，确认为金粟兰科植物

4、草珊瑚Sarcandraglabra(Thumb)Nakai。取其种子，经消毒后在无菌条件下诱导萌发，切取胚和下胚轴诱导获得无菌丛芽和再生植株，以无菌再生苗的茎段作为诱导不定芽的材料(图1)。12主要仪器与试剂6苄氨基嘌呤(6BA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号：20060718);吲哚丁酸(IBA)由上海求精生化试剂仪器有限公司生产(批号：20070310);琼脂粉由湛江新台兴海洋生物制品有限公司生产(批号：2007818);其他试剂均为化学纯;DLCJ1F型单人双面超净工作台由哈尔滨东联电子技术有限公司提供;YXQSGD型全自动高压灭菌锅由广东医疗器械厂提供;XS125A型电子分析天平由瑞士Sartorius公司提供。LRH300G型生物光照培养箱由广东医疗器械厂提供。表1丛芽诱导培养基的L16(45)正交试验设计13多种影响因子的筛选5采用MS培养基为基本培养基，培养基按照常规方法，根据表1正交试验设计的不同配方配制，添加30g/L的蔗糖、6g/L琼脂粉，pH5860，121124(11kg/cm2压力)灭菌15min。在无菌条件下，将草珊瑚无菌再生苗切成115cm长带节茎段，接种于培养基中，每瓶34个。培养温度(252)，光照用日光灯18002200lx，每天连续光照8h。28d后统计不定芽诱