发酵液溶磷含量测定

1、 编号共4页制订人制订日期审核人审核日期批准人批准日期颁发部门质量管理部实施日期一、目的：制订发酵液溶磷含量测定标准操作规程，确保发酵液中溶磷含量检测的准确。二、适用范围：适用于公司发酵液溶磷含量的检验。三、责任者：质量检验部QC操作人员四、内容：1、原理：正磷酸盐在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵，再用抗坏血酸使之还原成低价的钼蓝，此蓝色溶液符合比尔定律。2、仪器：电子分析天平分光光度计3、磷标准溶液配置取一定量KHPO(A.R)置于称量瓶内，在24解，加入ImL硫酸，于期10天。准确吸取上述磷标准溶液磷标准溶液。此标准溶液现配现用。4、定磷试剂配制：将下述溶液3mol/L硫酸、水、匀即得

2、。现配现用。5、绘制磷标准曲线取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，照分光光度计校准使用SOP在恒温水浴埚容量瓶105口干燥至恒重，精密称取100mL容量瓶中，用水定容至刻度，2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比45口水浴660nm波长下测量其100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mL于刻度吸管0.439克，加水溶1mg/mL磷标准溶液。有效摇匀，即得10ug/mL1:2:1:1的比例混20分钟，冷却至室温，按OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。管号012345610ug/mL磷标准溶液(mL)00.51.01.52.02.53.0溶液磷含皿u

3、g)051015202530水(mL)3.02.52.01.51.00.50定磷试皿mL)3.03.03.03.03.03.03.0线性回归系皿0.9996、样品磷含量检测取发酵液离心后上清液0.1mL，至试管中，加2.9mL水，再加入定磷试剂3mL,振摇，于45DOO20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照分光光度计校准使用SOP于660波长测OD值。5计算：根据磷标准曲线以及稀释倍数计算磷含量(ug/mL)。五、文件发放范围公司生物产业部质量管理部1份，质量检验部2份，产业部相关领导每人1份，存档2份。六、变更记录：上版文件编号上版文件实施日期本次变更原因、依据及详细变更内容SL-QAD-

4、248-002003.02.10采用新版格式和编号，增加文件修订内容SLB-QC-010-012006.08.19增加了定磷试剂的配制、标定方法、标定记录，规定了定磷试剂的有效期 磷标准曲线绘制记录批号：编号：SLB-QC-010-02R1磷标准溶液配制：（天平编号：）精密称取0.439克于105叮燥至恒重的磷酸二氢钾，加水溶解，加入于100mL容量瓶中定容至刻度，摇匀，即得1mg/mL磷标准溶液。有效期ImL硫酸，10天。准确吸取上述磷标准溶液10ug/mL磷标准溶液。现配现用。配制人：0000：1mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，即得00人：定磷试剂00：将下述溶液3mol/

5、L硫酸、水、1：2：1：1的比例混匀即得。现配现用。0000：2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸按体积比试剂取用数量3mol/L硫酸水2.5%钼酸铵10%抗坏血酸00人：0000：年月0磷标准曲线的绘0：（分光光度计编号：）取7支试管，分别按下表加入各试剂，充分摇匀，45D0020分钟，冷却至室温，于660nm波长处分别测溶液OD值。以溶液磷含量为纵坐标，OD值为横坐标，管号012345610ug/mL磷标准溶液（mL）00.51.01.52.02.53.0水（mLD3.02.52.01.51.00.50定磷试皿mLD3.03.03.03.03.03.03.0绘制标准曲线，得到回归方程。测得溶液OD值为：管号0123456溶液磷含皿ug）051015202530ODD线性回归方程（磷标准曲线）为：线性回归系数应口0.999线性回归系数为：符合规定口标定人：不符合规定标定00：年月0复核人：00：年月0 发酵液溶磷检验记录编号：SLB-QC-010-02R2品名：批号：操作步骤：取发酵液离心上清液0.1mL至试管中，加2.9mL水，加定磷试剂3mL,振摇，于45口水浴20分钟，冷却至室温，以空白做对照，按照分光光度计校准使用SOP于