补骨脂汤对痴呆大鼠海马NR2B、BDNFTrkB表达的影响

1、补骨脂汤对痴呆大鼠海马NR2B、BDNF/TrkB表达的影响【摘要】目的为讨论补骨脂汤对改善血管性痴呆大鼠的空间学习记忆的机理。方法用双侧结扎颈动脉反复灌注，用rris试验测试大鼠的空间学习记忆，RT-PR测定与学习记忆亲密相关的NR2B、BDNF/TrkB基因表达产物。结果补骨脂汤高、低剂量组的逃避埋伏期都明显短于模型组P0.01，补骨脂汤高、低剂量，均可明显进步NR2B、BDNF/TrkBRNA表达P0.05。结论补骨脂汤能明显改善血管性痴呆大鼠的空间记忆，其可能的机制是通过进步NR2B、BDNF/TrkBRNA表达程度而发挥作用的。【关键词】补骨脂汤；血管性痴呆；NR2B；BDNF/Tr

2、kBRNAAbstrat：bjetiveTeluidatetheehanisfBuGuZhiDetinhtiprvevasulardeentiaratsnspatiallearningandery.ethdsExperientalVDdelratseresubjetedtthebilateralnartidarteriesligatinandreperfusin,theperfranefspatiallearninganderyfallratsereeasuredusingtherrisateraze.estudiedthelevelfNR2B、BDNF/TrkBRNAsinthehippap

3、usfratsbyRT-PRtehnique.ResultsBuGuZhiDetinuldsignifiantlyshrtentheesapelatenytieinplaenavigatintest，inreasethenuberfpassingthrughpriaryflatplaeinspatialprbetestP0.01.ThelevelfNR2B、BDNF/TrkBRNAsintheBuGuZhiDetingruperearkedlyhigherthanthsefthedelgrupandtheshaperatingrupP0.05rP0.01).nlusinBuGuZhiDetin

4、aniprvethespaiuslearning-ery.TheehanisayenhanetheexpressinlevelfNR2B、BDNF/TrkBRNAs.Keyrds：BuGuzhiDetin;Vasulardeentia;NR2B;BDNF/TrkB随着人类的寿命日趋延长,老年性痴呆的患病率也逐渐增加，该病严重影响老年人的生活质量，引起了医疗界的广泛关注。在我国常见的老年性痴呆主要是血管性痴呆(VaD)。血管性痴呆是由一系列脑血管因素导致脑组织损害所引起的痴呆的总称，为一种进展性疾病，预后不良,国内外学者一直进展研究以图改善病人病症，进步生活质量，延长寿命。西医治疗本病存在局限性

5、，而中医治疗本病疗效显著，可以明显改善生活质量，因此，得到广泛认可。根据该病的成因和临床表现，中医辨证认为病位在于脑，涉及肝、肾、心、脾，病因病机为本虚标实。本虚即气虚、肾虚；标实为气滞、血瘀、浊毒、火盛。往往因虚致使痰瘀浊毒留于脑窍，形成巢囊，脑气与脏气不相接续而致病13。故本实验以此病因病机为根据，初步研究发现补骨脂汤能明显改善血管性痴呆大鼠空间的学习记忆，但其作用机理目前尚不清楚，故本实验将从空间学习记忆亲密相关的的NDAR2、BDNF/TrkB基因表达产物入手，进一步说明作用处径，为其临床应用提供实验根据。1材料与仪器1.1动物实验动物选用SD大鼠60只(购于南昌大学医学院动物中心)，

6、雌雄各半，体质量160180g。1.2中药由江西中医学院附属医院药房提供。1.3仪器及试剂水迷宫实验装置，PR扩增仪,核酸电泳槽，DPG-900型凝胶图像分析系统，净化台，DYY-5型电泳仪。Trizl及Taq酶均自美国Invitrgen公司，其他化学试剂都是国产试剂。2方法2.1分组把60只大白鼠随机分成5组，每组雌雄各半，分别为假手术组，模型组，中成药组，补骨脂汤低剂量组，补骨脂汤高剂量组。2.2造模在造模前补骨脂汤高、低剂量组用补骨脂汤灌胃7d，第8天对5组进展手术造模，用2的戊巴比妥钠40g/kg腹腔注射麻醉，75酒精消毒颈前皮肤，颈正中切口别离双侧颈总动脉穿线备用，用无创动脉夹夹闭一

7、侧颈总动脉10in,去夹后立即关闭另一侧颈总动脉，每侧夹闭1次，每次10in，去动脉夹撤线缝合皮肤，在手术部位撒一层青霉素粉末。假手术组只进展颈总动脉的别离不夹闭血管，各组手术造模后待大鼠清醒然后放回笼中保温饲养。2.3给药方法术后第3天开场给药，中成药组剂量予银杏叶片7.2g/(kgd),补骨脂汤低剂量组剂量予9.82g/(kgd)，高剂量组剂量予19.64g/(kgd)，2次/d，连续25d。2.4rris实验将大鼠面向池壁置于象限1/2弧度处入水，经120s未找到站台的大鼠，将其引至站台停留10s,引导其学习记忆，各组大鼠每天训练2次，共训练6d，记录大鼠找到平台确实切时间。在整个实验中

8、，实验者要与动物视线隔开，室内要保持安静及周围环境的相对稳定。转贴于论文联盟.ll.2.5半定量的RT-PR按照TRIZL试剂说明书提取总RNA，在20l反转录反响体积中进展反转录，合成DNA。取上述逆转录产物PR扩增NR2B、BDNF、TrkB。NR2B：Frardprier:5GTAGGATGTATGG3，Reverseprier:5AGGGAGTTTTTTGTT3，产物长度331bp；BDNF：Frardprier:5TTATTTATATTGGTTG3，Reverseprier:5ATGGGATTAAATTGGTT3,产物长度547bp；TrkB：FrardPrie:5GGTTATGTT

9、GTGGT3,Reverseprier:5TGGGTAATGTGTTAGGT3,产物长度148bp。25lPR反响体系中进展PR反响NR2BRNA、BDNFRNA、TrkBRNA:955in,9430s,5320s,7230s,30个循环，72终延伸5in；GAP-43RNA：955in,9430s,5520s,7230s,30个循环，72终延伸5in。PR产物用2琼脂糖凝胶溴化乙锭电泳别离，用凝胶图形分析系统进展拍照，观察结果并测定灰度值，以扩增的目的条带和同时扩增的atin的灰度值比对各基因转录程度进展衡量。2.6统计学处理数据采用s表示，应用应用SPSS150统计软件，组间比拟采用方差分

10、析及q检验。3结果3.1补骨脂汤对血管性痴呆大鼠空间学习记忆的影响给药30d后，进展rris实验，结果见表1，从表1数据可以看出，各大鼠在游泳测试中，其逃避埋伏期都随游泳天数的增加逐渐下降，且前三天的的逃避埋伏期下降速度比拟快，后三天的埋伏期逐渐稳定下来。而且，与模型组相比，补骨脂汤的高、低剂量组和银杏叶片组的逃避埋伏期都有明显的缩短P0.01，说明补骨脂汤和银杏叶片对血管性痴呆大鼠的空间记忆都有明显的改善作用。且补骨脂汤的高、低剂量组的逃避埋伏期比银杏叶片组有明显的缩短P0.01，说明补骨脂汤改善血管痴呆大鼠的空间记忆的作用要优于银杏叶片。表1各大鼠在rris水迷宫实验中的空间区分记忆的逃避

11、埋伏期略3.2补骨脂汤对血管性痴呆海马内NR2B、BDNF/TrkBRNA表达的影响用RT-PR的方法对NR2B、BDNF/TrkBRNA表达程度进展分析，发现:与模型组比拟,补骨脂汤无论是高剂量，还是低剂量，均可明显进步NR2B、BDNF/TrkBRNA表达P0.05,而银杏片组只进步了BDNF/TrkBRNA表达程度(P0.05)；尽管补骨脂汤组与银杏片组无明显差异P0.05，但补骨脂汤促NR2B、BDNF/TrkBRNA表达程度要高于银杏片(表2)。表2补骨脂汤对血管性痴呆海马内NR2B、BDNF/TrkBRNA表达的影响略4讨论中医认为，VaD的发病病位在脑，属本虚标实之证，本虚即气虚

12、、肾虚；标实是指痰浊、瘀血、浊毒。本虚标实互相夹杂、影响、转化，复加饮食、情志、劳逸等因素，而致脏腑功能失调，气滞血瘀，浊毒内生，脑气脏气不相顺接，脑髓失养而本钱病4。根据该疾病的病机，本实验室选用补骨脂汤治疗血管性痴呆大鼠，发现：补骨脂汤的高、低剂量组的逃避埋伏期都有明显的短于模型组，说明补骨脂汤能明显改善血管性痴呆大鼠的空间记忆P0.01。这可能是补骨脂汤中的人参大补元气，使气旺精足，安神益智；补骨脂、益智仁、苁蓉、熟地具有补肾填精成效；远志能祛痰开窍；大枣、当归具有益气作用；丹参有活血行气祛瘀通络的作用。诸药合用，使其具有补肾精、益气血、活血化痰的作用，从而改善了大鼠的空间学习记忆2，3

13、。为进一步说明该方的作用机理，本实验对海马内影响空间学习记忆的NR2B、BDNF/TrkB基因表达产物进展分析，发现：补骨脂汤无论是高剂量，还是低剂量，均可明显进步NR2B、BDNF/TrkBRNA表达，提示：补骨脂汤改善痴呆大鼠的空间学习记忆可能与NR2B、BDNF/TrkB基因表达产物有关。因为在哺乳动物中枢神经系统中，由NDA受体介道的兴奋性神经传导在生理、病理过程中发挥重要作用，也是人类治疗神经疾病希望的靶点，通过NDA受体的激活作用调节基因表达，会影响神经发育、突触可塑性及学习记忆，含NR2B和NR2A的NDA受体互相藕联产生明确的细胞内的信号转导，导致了的BDNF的表达和细胞外信号

14、调节激酶1/2激活57。但方中的哪些成分是影响NR2B、BDNF/TrkBRNA表达，从而改善血管性痴呆大鼠空间学习记忆，目前尚不清楚，将是今后研究的重点，也是中药现代化研究的重要方面。【参考文献】1姚龙华.血管性痴呆辨治心法J.四川中医,2022，263：56.2郑里翔,汪敏,辛增平.补骨脂汤对实验性血管性痴呆大鼠学习记忆行为学的影响J.江西中医学院学报，2022，2：67.3郑里翔，汪敏，辛增平.补骨脂汤对血管性痴呆大鼠海马内-FS基因表达及学习记忆的影响J.中医药学刊,2022，245：278.4闫敬来,陈燕清.老年痴呆病机的中医学认识概述J.中华中医药杂志,2022，237：168.5JenniferJ.Brightell,laytnA.Sith,etal.Lng-tereryfrplaelearningisfailitatedbyexpressinfAPrespnseeleent-bindingprtEininthedrsalhippapusJ.Learn.e,202214:195.6DavidL,NishhalS,EdiB,