b6相色谱仪(HPLC)设备验证方案和记录

1、高效液相色谱仪验证设备验证记录题目编号页数版本2000起草人及日期 审核人及日期批准人及日期一、方案（一）验证目的：证实 Echrom98 高效液相色谱系统的流速、梯度混合比例、每米理论 塔板数、重现性、分离度及噪声、漂移等确实能达到生产要求，为生产提供依据。（二）验证指标：1、高效液相系统的实际流速和设备显示的数值的偏差2、每米理论塔板数是否大于 100003、分离度是否大于 1.54、各组分重现性是否良好5、噪声、漂移试验是否达到要求（三）验证依据：1、药品生产验证指南2、高效液相色谱仪使用说明书（四）验证的必备条件：1、洁净容量瓶（ 100ml、 200ml、500ml ）2、d=0.1

2、 电子秤3、高效液相处于正常运行状态4、已脱气的流动相5、洁净厂房经过验证并合格设备验证记录题目编号页数版本2000设备概况：本高效液相色谱系统由双泵系统、进样系统、样品分离系统、检测系 统及色谱工作站和打印系统组成，双泵系统可由手动（面板控制）或电脑 控制任意设定流速、限压及梯度洗脱条件。其限压设定对仪器提供过压保 护，样品分离系统主要由色谱柱及其保护柱组成，可按不同柱填料的功能 和样品组分性质将样品中各组分分离，在流动相的作用下进入检测器，检 测系统为紫外可变波长检测器， 波长在 190870nm连续可调， 衰减输出信 号方便，检测灵敏，对紫外、可见区有吸收的物质均可产生信号且和浓度 成正

3、比。色谱工作站可控制操作，记录运行信号，数据处理，保存并打印 记录文件。使该系统可用于混合组分的分离和纯化，安装在本岗位的主要 作用是用于白介素 2 的最终纯化，以除去其中的杂蛋白及其它组分并保 持其生物活性。设备验证记录题目编号页数版本2000设备资料档案：高效液相色谱仪A泵泵紫外可变波长检测器Echrom98 色 谱工作站出厂日期2001.11.022001.11.022001.05.102001.10.10设备出厂编号P2600406P2600407U208157D200230S00本公司设备编号FD-jx-01-01FD-jx-01-01FD-jx-01-02FD-jx-01-03生产

4、厂家大连依利特科学仪器有限公司电源22022V频率500.5Hz功耗200W流量范围0.5ml/min50.0ml/min工作温度535湿度85%相对湿度流量精确度 1.0%( 10ml/min); 2.0%(10ml/min)最高工作压力20MPa(流量 10ml/min)；10Mpa(流量 30ml/min)流量稳定度1.5%RSD噪声 2.010-4AU (254 nm)漂移 5.010-4AU/hr(254nm)安装位置基因工程车间纯化二室设备验证记录编号页码版本题目2000二、设备安装确认：1、电源 设计要求 安装情况 电 压220V频 率50Hz接地要求接地结 论：确 认 人： 日

5、 期： 2、振动源及稳定性：安放仪器的工作台应稳固且宽度大于 80cm，安装处没有 振动源。结 论：确 认 人： 日 期： 3、安装环境要求：安装场所应清洁无尘， 无易燃易爆及腐蚀性气体， 排风良好， 无较强的电场或磁场。温度 1530，相对湿度在 20%85%范围内。 结 论：确 认 人： 日 期： 4、资料整理存放地点操作说明书 维修手册 色谱工作站说明书 电脑系统说明书 打印机说明书设备验证记录题目编号页码版本2000三、设备运行确认：1、泵的运行确认：1、1、打开泵电源，泵电源指示灯亮；1、2、屏幕显示当前压力及前次设定的流速、限压；1、3、按功能键，设定流速及限压，屏幕上应显示和设定

6、数值一样的数字；1、4、将泵入口管放入装有注射用水的血清瓶中，设定流速为10.0ml/min，限压为 10.0MPa，让泵运行， 泵屏幕上显示流速为 10.0ml/min ，限压为 10.0MPa， 压力为 1.2MPa，泵出口处有水流出；1、5、关闭电源，电源指示灯灭。结 论：确认人： 日 期：2、检测仪的运行确认：2、1、打开检测仪电源，屏幕上显示数字；2、2、调节输出衰减，不同衰减，屏幕上显示数字不同；2、3、调节衰减，屏幕上显示所调的结果；2、4、关闭检测仪电源，屏幕上数字消失。结 论：确认人： 日 期：3、电脑系统的运行确认：3、1、打开电脑主机及显示器电源，电源指示灯亮；3、2、将

7、电脑进入工作站系统，电脑立即进入工作站系统；3、3、设定梯度，以注射用水为流动相，让泵运行，泵按设定的梯度运行并记录 结果。3、4、按工作站的程序保存运行结果，退出工作站；3、5、关闭电脑电源 , 电源指示灯灭。结 论：确认人： 日 期：设备验证记录编号页码版本题目2000四、设备性能确认：1、预试验验证： 检查泵连接管路是否畅通，确认系统密封性是否良好及限压保护是否正常。1、1系统密封性试验： 严格按该仪器使用说明书 连接泵、过滤网、进样器、 色谱柱、保护柱、检测器及其废液排出管路，检查电源连接符合要求后开 启电源，以 100%甲醇为流动相， 按功能选择设定流速为 20ml/min，限压为

8、10.0MPa。按说明书启动仪器，观察泵的声音正常。气泡排尽后，废液出口 流出液体，证明管路畅通，待压力平稳后保持 10 min，用滤纸检查各管路 接口处应无湿迹。卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下） ，使压力 达到 9.0MPa， 系统仍无泄露及运行管路无气泡产生。结 论：确认人： 日期：1、2限压保护实验：以 HPLC 级水为流动相，选择功能设定一限压为 2.0MPa。再 逐渐加大流速使实际压力逐渐达到 2.0MPa。在实际压力达到限定压力（ 2.0MPa）的一 秒钟内，泵自动停止，证明限压保护（ 2.0MPa）合格，再于保护柱前端增加一 0.22um 滤膜，目前限压为 5.0MPa

9、，逐渐加大流速 （流速为 35ml/min），至柱压实际达到 5.0MPa 时泵自动停止，限压为 5.0MPa 合格。同法设定为 10.0MPa，泵自动停止。结 论：确认人： 日期：1、3 流速及梯度混合实验：1、3、1 流速各设定单泵流速分别为 5ml/min, 10ml/min, 15ml/min, 20ml/min, 30ml/min, 以注射用 水为流动相，于废液出口用洁净并已称重的容量瓶（ 100 ml，200 ml，500 ml）分别收 集各流速 10分钟流动相流出液的重量， 用 d=0.1g电子秤称重，计算其实际流速， 结果 见下表，测三次：设备验证方案编号页码版本题目2000第

10、一次运行结果：设定流 (ml/min)10 分钟流出液 重量( g)水温()水密度(g)实际流速(ml/min)偏差%5A1015泵20305B1015泵2030操作人： 复核人： 日 期： 第二次运行结果：设定流 (ml/min)10 分钟流出液 重量( g)水温()水密度(g)实际流速(ml/min)偏差%A泵510152030B泵510152030操作人： 复核人： 日 期：设备验证记录题目编号页码版本2000第三次运行结果：设定流 (ml/min)10 分钟流出液 重量（ g）水温（）水密度（g）实际流速（ml/min）偏差%A 泵510152030B 泵510152030操作人： 复

11、核人： 日 期：验证结果：验证人员：日 期：1、3、2 梯度混合试验：由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序。设定溶剂 A 为注射用水， B 为 0.1% 丙酮水溶液， B 经由 5 个阶梯从 0%变到 100%，设定梯度见 下表。开机后先以 A 溶剂冲洗系统，待基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化 曲线。求出各溶剂配比时的输出信号值或记录仪读数。重复测量三次，计算平均值。 从 B 溶剂的含量及相对应的输出信号值或记录仪读数 ?i（第 i 段梯度准确度，%）和 ?m（ 第 i 段输出信号值或记录仪读数平均值 ）计算梯度准确度 Gci（各段输出信号值或记录仪读 数平均值 ），取 Gci最大者

12、作为仪器梯度准确度误差。运行结果见附图。计算公式： Gci=（?i-?m）/? m100%设备验证记录编号页码版本题目2000设定梯度如下：时间 （min）流速 （ml/min ）A%B%梯度状态0201000130201000150208020180208020110020604011302060401150204060118020406012002020801230202080125020010012802001001计算结果如下：B 溶液梯度0%20%40%60%80%100%记录仪读数（电信号）123?i-?m123Gci123设备验证记录编号页码版本题目2000运行结果见附图：第一次

13、运行结果图：操作人： 复核人： 日 期： 第二次运行结果图：操作人：复核人：日 期：第三次运行结果图：操作人：复核人：日 期：验证结果：验证人员：日 期：设备验证记录题目编号页码版本20002、系统适应性试验2、1 每米理论塔板数测定：严格按该仪器使用说明书操作，条件为：ODSC18柱，规格为 225cm,粒径 20m,孔径300?,紫外检测器检测波长为 280nm，输出 衰减为 0.005,流动相 A 为 0.1%TFA 水溶液，流动相 B 为 0.1%TFA 乙腈溶液 ,流速为 10ml/min 。样品为硝基苯，浓度为 10%，进样量 100ul。在 50%B 状态下洗脱，测三次， 运行结

14、果见附图：第一次每米塔板数： N=5.54(tR/W 1/2)21000/250= 操作人：复核人：日 期：第二次每米塔板数： N=5.54(tR/W 1/2)21000/250= 操作人：复核人：日 期：第三次每米塔板数： N=5.54(tR/W 1/2)21000/250= 操作人： 复核人： 日 期： 验证结果： 验证人员： 日 期：2、2 分离度测定：严格按该仪器使用说明书操作，条件为： ODSC18 柱， 规格为 225cm, 粒径 20m,孔径 300?, 紫外检测器检测波长为 280nm，输出衰减为 0.005,流动相 A 为注射用水，流动相 B 为纯甲醇，流速为 10ml/mi

15、n。样品为 8 ul/ ml 硝 基苯、 2.04mg/ml萘的溶液， 进样量为 50ul。在 70%B状态下洗脱，测三次，结果见 附图：设备验证记录题目编号页码版本2000第一次分离度 R=（tR2-tR1）/（W1+W2）= 操作人： 复核人： 日 期： 第二次分离度 R=（tR2-tR1）/（W1+W2）= 操作人：复核人：日 期：第三次分离度 R=（tR2-tR1）/（W1+W2）= 操作人：复核人：日 期：验证结果： 验证人员： 日 期：2、3 重现性测定：严格按该仪器使用说明书操作，条件为： ODSC18柱， 规格为 225cm, 粒径 20m,孔径 300?, 紫外检测器检测波长

16、为 280nm，输出衰减为 0.005,流动相 A 为注射用水，流动相 B 为纯甲醇，流速为 10ml/min。样品为 8 ul/ ml 硝 基苯、 2.04mg/ml 萘的溶液， 进样量为 50ul。在 70%B 状态下洗脱。系统于前次运行 结束后充分洗脱，经流动相平衡 1 小时以上，重新进样，在相同条件下运行，见附图： 操作人： 复核人： 日 期： 验证结果： 验证人员： 日 期：设备验证记录题目编号页码版本20002、4 噪声、漂移测试：选用 C18色谱柱， 100%甲醇为流动相，流速为 10ml/min, 紫外检测仪的波长为 254nm，衰减器调到最灵敏档（即 0.005）,开机预热，待仪器稳 定后记录基线 60 min，计算基线噪声和漂移。峰形图：第一次：基线噪声：漂 移：操作人： 复核人： 日 期：第二次：基线噪声：漂 移：操作人： 复核人： 日 期：第三次：基线噪声：漂 移：操作人： 复核人： 日 期：设备验证记录题目编号页码版本2000验证结果：验证人员：日 期：2、5 色谱工作站功能的确认：电脑系