抗原多肽的设计、偶联策略

1、抗原多肽肽的设计计、偶联联策略抗体是生生命科学学研究中不不可或缺缺的工具具之一，应用范围围包括蛋蛋白质表达检检测和鉴定、蛋白质质加工、蛋白质质在细胞胞内的定定位、免免疫中和和反应、蛋白质质同源结结构域研研究、蛋蛋白质纯纯化以及及疾病的的免疫诊诊断和治治疗。尽尽管抗体体的制备备过程不不存在技技术难点点，但是是抗原的的选择以及及所制备备抗体的的用途对对能否获获得一个个优质高高效的抗抗体至关关重要。以下将将对抗原原多肽的的设计、偶偶联策略略等逐一一介绍.抗原设计计 首先选择择合适的的多肽序序列，明明确最终终产物的的用途对对选择序序列非常常重要。如果仅仅仅需要要生产针针对蛋白白质某个个区域的的特异抗抗

2、体，比比如研究究蛋白质质N端的的前提物物，我们们就需要要设计NN末端的的多肽抗抗原。如如果抗体体的使用用目的是识识别修饰饰的氨基基酸，如如磷酸化化的丝氨氨酸、苏苏氨酸或或者酪氨氨酸，乙乙酰化赖赖氨酸等等，就必必须对多多肽进行行相应的的修饰。如果抗抗体最终终用来识识别自然然状态下下的蛋白白质，对对抗原的的设计就就要求更更高。一一般情况况下抗血血清能够够识别用用来免疫疫的多肽肽序列，但是不不一定识识别蛋白白质的折折叠结构构。蛋白白质的抗抗原决定定簇一般般由612个个氨基酸酸构成，呈连续续性或者者非连续续性序列列。连续续性抗原原决定簇簇由连续续的氨基基酸序列列构成，而非连连续抗原原决定簇簇包括一一组

3、非连连续氨基基酸，这这些氨基基酸由于于蛋白质质的折叠叠而形成成在空间间上相互互毗邻。针对连连续性抗抗原决定定簇的抗抗体能够够识别没没有被埋埋藏在蛋蛋白质内内部的序序列，而而非连续续性抗原原的抗体体能否识识别抗原原决定簇簇取决于于用于抗抗体生产产的多肽肽是否存存在二级级结构。氨基酸序序列的亲亲水性、表露性性、柔韧韧性决定定了多肽肽的抗原原性。许许多水融融性的自自然状态态下的蛋蛋白质其其亲水序序列暴露露在外测测，而疏疏水性氨氨基酸序序列包埋埋在内部部。抗体体结合蛋蛋白质表表面的抗抗原决定定簇，另另外抗原原决定簇簇柔韧性性比较高高。蛋白白质的CC末端经经常暴露露在外测测并且有有较高的的柔韧性性，因此

4、此经常被被用来作作为抗体体生产的的抗原。但是如如果C末末端是跨跨膜蛋白白质的膜膜内部分分，该序序列可能能由于疏疏水性太太强而不不适合用用来作为为抗原。同C末末端序列列类似，蛋白质质的N末末端序列列也经常常暴露在在蛋白质质的表面面，同样样为首选选抗原序序列。预测蛋白白特性（例如亲亲水性、疏水性性）及二二级结构构（例如如螺螺旋，折叠叠，回旋）的一些些算法有有助于选选择表露露性较高高，有抗抗原性的的内部序序列以用用于抗体体生成。常见预预测性算算法有如如下三种种，Hoopp及及Wooods所所描述的的亲水性性曲线给给蛋白序序列中的的每一个个氨基分分配一个个平均亲亲水性值值，对于于一系列列的相邻邻氨基，

5、平均亲亲水性的的最高点点通常就就位于抗抗原决定定簇或在在其附近近。Kyyte 及 DDoollitttle 所提出出的另一一算法略略有不同同，它主主要是衡衡量蛋白白序列的的亲水性性及疏水水性趋势势，该算算法对于于预测某某蛋白的的外部及及内部区区域非常常有用。蛋白的的二级结结构则可可以通过过CHOOU/FFASMMAN 或 LLIM 所提出出的算法法来预测测。表露露性或易易接近区区常常和和螺旋区区或延展展的二级级结构区区相邻。并且，具有回旋旋或双性性螺旋特特性的序序列区也也具有较较好的抗抗原特性性。目前前有许多多商用软软件包都都使用了了这些不不同的算算法，例例如MaacVeectoorTMM，D

6、NNASttarTTM及PPC-GGeneeTM。要想预预测准确确，不能能只使用用一种算算法。结结合各种种不同的的预测方方法来预预测抗原原性区域域，可使使成功率率大大提提高。抗原性区区域确定定以后，接下来来要确定定多肽的的长度。关于选选定多肽肽长度有有两种不不同的观观点。一一种观点点认为长长的多肽肽（200400个氨基基酸）比比较好，因为长长的多肽肽无疑会会增加抗抗原基的的数量。另一种种观点则则认为小小的多肽肽更有效效，使用用小的多多肽能保保障所产产生抗体体的位点点特异性性。但有有一点是是明确的的，不管管长度如如何，所所选多肽肽必须能能够较容容易地通通过生化化合成得得到，并并且能溶溶解到水水溶

7、性缓缓冲剂进进行载体体蛋白的的耦联。由于受受副反应应的影响响较大，高于二二十个氨氨基酸的的多肽通通常很难难进行高高纯度合合成，并并且常常常会含有有缺失性性序列。另一方方面，太太短的多多肽（110kdd）进行行浓缩，以备测测试；利利用0.2M氨氨基乙酸酸（gllyciine）进行洗洗脱（ppH12），在pHH2.00时开始始洗脱，在吸光光度降到到基线以以下时收收集洗脱脱液。将将洗脱液液的pHH降低00.5-1，直直到已没没有可检检测到的的抗体从从柱上洗洗下来；收集从从纯化柱柱上收集集的各个个部分，收集后后通过加加入1/10体体积1 M TTriss-HCCl（ppH=88.0） 或ppH 88.

8、0 的洗脱脱液将其其中和；将纯化化的多肽肽进行EELISSA分析析，以决决定具有有最高亲亲和性的的洗液部部分。将将适当的的抗体洗洗脱液浓浓缩至22-5mmg/mml，混混合500甘油油在220oCC下保存存，或混混合0.1% BSAA在4ooC下保保存。加加入0.01% NaaN3作作为防腐腐剂。3看起起来有些些浑浊的的血清是是否还可可以使用用？一般般来讲，这不会会是问题题。使用用前可以以用0.2m的的过滤器器去除血血清中的的小颗粒粒Antiigenn deesiggn & seera purrifiicattionnAntiiboddiess too smmalll peeptiidess

9、haave beccomee ann esssenntiaal ttooll inn liife sciiencce rreseearcch, witth aappllicaatioons inccluddingg geene prooducct ddeteectiion andd iddenttifiicattionn, pprotteinn prroceessiing stuudiees, diaagnoostiic ttestts, prooteiin llocaalizzatiion, acctivve ssitee deeterrminnatiion, prroteein hommo

10、loogy stuudiees aand prooteiin ppuriificcatiion. Whhilee itt iss quuitee eaasy to genneraate antti-ppepttidee anntibbodiies, itt iss immporrtannt tto ccareefullly connsidder thee ulltimmatee usse ffor thee anntibbodyy annd tthe seqquennce useed tto eensuure succcesss. Thiis ttechh shheett wiill brii

11、eflly eexplloree peeptiide sellecttionn annd ddesiign, cooupllingg sttrattegyy, aand carrrieer pprotteinns wwhicch aare impporttantt faactoors in antti-ppepttidee anntisseraa geenerratiion. Seerumm puurifficaatioon wwilll allso be disscusssedd. FFor morre ccompplette ccoveeragge oof aantiigenn deesi

12、ggn, pleeasee reeferr too thhe RRefeerenncess1,22. Pepttidee Seelecctioon aand DessignnThe firrst steep iin tthe proocesss iis tthe sellecttionn off thhe aapprroprriatte ppepttidee seequeencee. AAt tthiss sttep thee ulltimmatee usse ffor thee anntibbodyy muust be connsiddereed. If thee anntibbodyy i

13、ss neeedeed tto pprobbe aa sppeciificc prroteein dommainn thhen thee chhoicce iis ssimpple. Foor eexammplee, iif oone is stuudyiing prooteoolyttic proocesssinng oof aan NN-teermiinall prrecuursoor, anttiboodiees aagaiinstt thhe NN-teermiinall reegioon oof iinteeresst wwoulld bbe rraissed. Liikewwise

14、e iff thhe ggoall iss too moonittor thee phhospphorrylaatioon sstatte oof aa sppeciificc seequeencee, aantiiboddiess too thhe pphossphooryllateed ssequuencce ccan be useed. If tthe goaal iis tto rraisse aantiiboddiess thhat willl rrecoogniize thee prroteein in itss naativve sstatte, thee prrobllem b

15、eccomees mmoree coompllex. Annti-pepptidde aantiiboddiess wiill alwwayss reecoggnizze tthe pepptidde. Howweveer, thee saame anttiboody mayy noot rrecoogniize thee seequeencee wiithiin tthe folldedd inntacct pprotteinn. SSequuencce eepittopees iin pprotteinns ggeneerallly connsisst oof 66-122 amminoo

16、 accidss annd ccan be claassiifieed aas cconttinuuouss annd ddiscconttinuuouss. CConttinuuouss eppitoopess arre ccompposeed oof aa coontiiguoous seqquennce of amiino aciids in a pprotteinn. AAntii-peeptiide anttiboodiees wwilll biind to theese typpes of epiitoppes in thee naativve pprotteinn prrovii

17、dedd thhe ssequuencce iis nnot burriedd inn thhe iinteerioor oof tthe prooteiin. Dissconntinnuouus eepittopees cconssistt off a grooup of amiino aciids thaat aare nott coontiiguoous butt arre bbrouughtt toogettherr byy fooldiing of thee peeptiide chaain or by thee juuxtaapossitiion of twoo seeparrat

18、ee poolyppepttidee chhainns. Antti-ppepttidee anntibbodiies mayy orr maay nnot reccognnizee thhis claass of epiitoppe ddepeendiing on wheetheer tthe pepptidde uusedd foor aantiiserra ggeneerattionn haas ssecoondaary strructturee siimillar to thee eppitoope andd/orr iff thhe pprotteinn eppitoope hass

19、 ennouggh cconttinuuouss seequeencee foor tthe anttiboody to binnd wwithh a lowwer afffiniity. Whenn exxamiininng aa prroteein seqquennce forr pootenntiaal aantiigennic epiitoppes, itt iss immporrtannt tto cchooose seqquenncess whhichh arre hhydrrophhiliic, surrfacce-oorieenteed, andd fllexiiblee3.

20、MMostt naaturrallly ooccuurriing prooteiins in aquueouus ssoluutioons havve ttheiir hhydrrophhiliic rresiiduees oon tthe surrfacce aand theeir hyddropphobbic ressiduues burriedd inn thhe iinteerioor. Anttiboodiees bbindd too eppitoopess onn thhe ssurffacee off prroteeinss. AAddiitioonallly, itt haas

21、 bbeenn shhownn thhat epiitoppes havve aa hiigh deggreee off moobillityy4. Becaausee thhe CC-teermiini of prooteiins aree offtenn exxpossed andd haave a hhighh deegreee oof fflexxibiilitty ttheyy arre uusuaallyy a goood cchoiice forr geenerratiing antti-ppepttidee anntibbodiies dirrectted agaainsst

22、tthe inttactt prroteein. Iff thhe pprotteinn iss ann innteggrall meembrranee prroteein andd thhe CC-teermiinuss iss paart of thee trranssmemmbraane seggmennt, thiis ssequuencce wwilll bee tooo hhydrrophhobiic aand nott a goood cchoiice. Likee thhe CC-teermiinuss, tthe N-ttermminuus iis aalsoo frrequ

23、uenttly expposeed aand on thee suurfaace of thee prroteein makkingg itt ann iddeall caandiidatte ffor anttiboody genneraatioon. If a pprotteinn seequeencee iss deerivved froom tthe cDNNA ssequuencce, thee leeadeer ssequuencce sshouuld nott bee inncluudedd inn thhe ssequuencce sseleecteed ffor anttib

24、oody genneraatioon. Algooritthmss foor ppreddicttingg prroteein chaaraccterristticss suuch as hyddropphilliciity/hyddropphobbiciity andd seeconndarry sstruuctuure reggionns ssuchh ass allphaa-heelixx, bbetaa-shheett annd bbetaa-tuurn aidd seelecctioon oof aa pootenntiaallyy exxpossed, immmunnogeenic

25、c innterrnall seequeencee foor aantiiboddy ggeneerattionn. Hydrrophhiliicitty pplotts aas ddesccribbed by Hoppp aand Wooods55 asssiggn aan aaverragee hyydroophiiliccityy vaaluee foor eeachh reesiddue in thee seequeencee. TThe higghesst ppoinnt oof aaverragee hyydroophiiliccityy foor aa seeriees oof

26、cconttiguuouss reesidduess iss ussuallly at or neaar aan aantiigennic dettermminaant. A sliighttly diffferrentt allgorrithhm ddesccribbed by Kytte aand Dooolitttlee6 evvaluuatees tthe hyddropphillic andd hyydroophoobicc teendeenciies of thee seequeencee. TThiss prrofiile is useefull foor ppreddictti

27、ngg exxterriorr vss. iinteerioor rregiionss off thhe nnatiive prooteiin. Secconddaryy sttruccturre ccan be ideentiifieed bby tthe usee off allgorrithhms devveloopedd byy Chhou andd Faasmaan7 orr Liim8. SSurffacee reegioons or reggionns oof hhighh acccesssibbiliity oftten borrderr heeliccal or extten

28、dded secconddaryy sttruccturre rregiionss. IIn aaddiitioon, seqquennce reggionns wwithh beeta-turrn oor aamphhiptthicc heelixx chharaacteer hhavee beeen fouund to be anttigeenicc9. Manyy coommeerciial sofftwaare pacckagges succh aas MMacVVecttorTTM, DNAAStaarTMM, aand PC-GenneTMM inncorrporratee thh

29、esee allgorrithhms. Too bee suucesssfuul, nonne oof tthe alggoriithmms sshouuld be useed aalonne. Commbinned usee off thhe ppreddicttivee meethoods mayy reesullt iin aa suucceess ratte aas hhighh ass 866% iin ppreddicttingg anntiggeniic ddeteermiinannts99,100. Oncee thhe pprotteinn reegioon oof iint

30、eeresst hhas beeen iidenntiffiedd, tthe lenngthh off thhe ppepttidee muust be sellectted. Thheree arre ttwo diffferringg thhougghtss onn thhe ttopiic oof ppepttidee leengtth. Onee suuggeestss thhat lonng ppepttidees (20-40 amiino aciids in lenngthh) aare opttimaal bbecaausee itt inncreeasees tthe nu

31、mmberr off poossiiblee eppitoopess. TThe othher sugggessts thaat ssmalllerr peeptiidess arre ssuffficiientt, aand theeir usee ennsurres thaat tthe sitte-sspeccifiic ccharractter of antti-ppepttidee anntibbodiies is rettainned. Cllearrly, anny ppepttidee seelecctedd muust be cheemiccallly ssyntthessi

32、zaablee annd sshouuld be sollublle iin aaqueeouss buuffeer ffor connjuggatiion to thee caarriier prooteiin. Pepptiddes lonngerr thhan 20 ressiduues in lenngthh arre oofteen mmoree diiffiicullt tto ssyntthessizee wiith higgh ppuriity beccausse ttherre iis ggreaaterr pootenntiaal ffor sidde rreacctioo

33、ns, annd ttheyy arre llikeely to conntaiin ddeleetioon ssequuencces. Onn thhe ootheer hhandd, sshorrt ppepttidees (10 amiino aciids) maay ggeneeratte aantiiboddiess thhat aree soo sppeciificc inn thheirr reecoggnittionn thhat theey ccannnot reccognnizee thhe nnatiive prooteiin oor ddo sso wwithh loo

34、w aaffiinitty. Thee tyypiccal lenngthh foor ggeneerattingg annti-pepptidde aantiiboddiess iss inn thhe rrangge oof 110-220 rresiiduees. Pepptidde ssequuencces of thiis llenggth minnimiize synntheesiss prrobllemss, aare reaasonnablly ssoluublee inn aqqueoous sollutiion andd maay hhavee soome deggreee

35、 off seeconndarry sstruuctuure. Coupplinng SStraateggyA faactoor tthatt iss offtenn ovver-loookedd whhen dessignningg a synntheeticc peeptiide is thee meethood oof ccoupplinng tthe pepptidde tto tthe carrrieer pprotteinn. FFor exaamplle, N-ttermminaal ssequuencces shoouldd bee coouplled thrrouggh tt

36、he C-ttermminaal aaminno aacidd annd vvicee veersaa foor CC-teermiinall seequeencees. Intternnal seqquenncess caan bbe ccouppledd att eiitheer eend. Annothher connsidderaatioon ffor intternnal seqquenncess iss too accetllyatte oor aamiddatee thhe uuncoonjuugatted endd ass thhe ssequuencce iin tthe n

37、attivee prroteein mollecuule wouuld nott coontaain a ccharrgedd teermiinuss. The mosst ccommmon couupliing metthodds rrelyy onn thhe ppressencce oof ffreee amminoo (aalphh-amminoo orr Lyys), suufhyydryyl (Cyss), or carrboxxyliic aacidd grroupps (Aspp, GGlu, orr allphaa-caarbooxyll). Couupliing metth

38、odds sshouuld be useed tthatt liink thee peeptiide to thee caarriier prooteiin vvia thee caarbooxy- orr amminoo-teermiinall reesiddue. Thhe ssequuencce cchossen shoouldd noot hhavee muultiiplee reesidduess thhat mayy reeactt wiith thee chhoseen cchemmisttry. Iff muultiiplee reeacttivee siitess arre

39、ppressentt, ttry to shoorteen tthe pepptidde oor cchooose thee seequeencee soo thhey aree alll llocaalizzed at eittherr thhe aaminno oor tthe carrboxxyl terrminnus of thee peeptiide. Foor iinteernaal ssequuencces thee ennd ffurtthesst ffromm thhe ppreddictted epiitoppe iis nnormmallly ffavooredd ass

40、 thhis avooidss pootenntiaal mmaskkingg prrobllemss. The EDCC (11-etthyll-3-(3-dimmethhylaaminnoprropyyl) carrboddiimmidee hyydroochlloriide) orr caarboodiiimidde mmethhod is rouutinnelyy ussed in thee Siigmaa-Geenossys labboraatorry uunleess othherwwisee sttateed bby tthe ressearrcheer. Carrboddiim

41、midees ccan acttivaate thee siide chaain carrboxxyliic ggrouups of aspparttic andd gllutaamicc accid as welll aas tthe carrboooxyll teermiinall grroupp too maake theem rreacctivve ssitees ffor couupliing witth pprimmaryy amminees. Thee acctivvateed ppepttidees aare mixxed witth tthe carrrieer pprott

42、einn too prroduuce thee fiinall coonjuugatte. If thee caarriier prooteiin iis aactiivatted firrst, thhe EEDC metthodd wiill couuplee thhe ccarrrierr prroteein thrrouggh tthe N-ttermminaal aalphha aaminne aand posssibbly thrrouggh tthe amiine in thee siide-chaain of Lyssinee, iif ppressentt inn thhe

43、ssequuencce. The m-MMaleeimiidobbenzzoyll-N-hyddroxxysuucciinimmidee essterr (MMBS) iss a hetteroobiffuncctioonall reeageent thaat ccan be useed tto llinkk peeptiidess too caarriier prooteiins viaa cyysteeinees. Thee cooupllingg taakess pllacee wiith thee thhioll grroupp off cyysteeinee reesidduess.

44、 IIf tthe choosenn seequeencee dooes nott coontaain Cyss itt iss coommoon tto pplacce aa Cyys rresiiduee att thhe NN- oor CC-teermiinuss too obbtaiin hhighhly conntroolleed llinkkingg off thhe ppepttidee too thhe ccarrrierr prroteein. Foor ssyntthessis purrposses we reccommmendd thhat thee pllaceeme

45、nnt oof ccystteinne bbe aat tthe N-ttermminuus oof tthe pepptidde iif pposssiblle. Gluttaraaldeehydde iis aa biifunnctiionaal ccoupplinng rreaggentt thhat linnks twoo coompooundds tthrooughh thheirr amminoo grroupps. Gluutarralddehyyde prooviddes a hhighhly fleexibble spaacerr beetweeen thee peeptii

46、de andd caarriier prooteiin ffor favvoraablee prreseentaatioon tto tthe immmunee syysteem. Unfforttunaatelly, gluutarralddehyyde is a vveryy reeacttivee coompooundd annd wwilll reeactt wiith Cyss, TTyr andd Hiis tto aa liimitted exttentt. TThe ressultt iss a pooorlyy deefinned connjuggatee. TThe glu

47、utarralddehyyde metthodd iss paartiicullarlly uusefful wheen aa peeptiide conntaiins onlly aa siinglle ffreee amminoo grroupp att itts aaminno ttermminuus. If thee peeptiide conntaiins morre tthann onne ffreee amminoo goorupp, llargge mmulttimeericc coompllexees ccan be forrmedd, wwhicch aare nott w

48、eell deffineed, butt arre hhighhly immmunoogennic. Seleectiing thee Prroteein CarrrieerConjjugaatioon tto aa caarriier prooteiin iis iimpoortaant beccausse ppepttidees aare smaall mollecuuless, tthatt allonee doo noot ttendd too bee immmunnogeenicc, tthuss poossiiblyy elliciitinng aa weeak immmunee

49、reespoonsee. TThe carrrieer pprotteinn coontaainss maany epiitoppes thaat sstimmulaate T-hhelpper cellls, whhichh heelp indducee thhe BB-ceell ressponnse. Maany diffferrentt caarriier prooteiins cann bee ussed forr cooupllingg too syynthhetiic ppepttidees. Thee moost commmonnly sellectted carrrieers

50、 aree keeyhoole limmpett heemaccyannin (KLLH) andd boovinne sseruum aalbuuminn (BBSA). TThe higgherr immmunnogeeniccityy off KLLH oofteen mmakees iit tthe preeferrredd chhoicce. Anootheer aadvaantaage of chooosiing KLHH ovver BSAA iss thhat BSAA iss ussed as a bblocckinng aagennt iin mmanyy exxperri

51、meentaal aassaays. Beecauuse anttiseera raiisedd aggainnst pepptiddes connjuggateed tto BBSA willl aalsoo coontaain anttiboodiees tto BBSA, faalsee poosittivees mmay ressultt. AAlthhouggh KKLH is larrge andd immmunnogeenicc, iit mmay preecippitaate durringg crrosss-liinkiing, maakinng iit ddiffficuu

52、lt to hanndlee inn soome casses. Ovallbummin (OVVA) is anootheer uusefful carrrieer pprotteinn. IIt iis aa goood chooicee ass a seccondd caarriier prooteiin wwhenn veeriffyinng wwhettherr anntibbodiies aree sppeciificc foor tthe pepptidde aalonne aand nott thhe ccarrrierr. RRabbbit Serrum Albbumiin

53、(RSAA) mmay be useed wwhenn thhe aantiiboddy rrespponsse tto tthe carrrieer pprotteinn muust be keppt tto aa miinimmum. Raabbiits immmuniizedd wiith RSAA coonjuugatte aare lesss llikeely to raiise anttiboodiees tto tthe carrrieer, as thee RSSA iis rrecoogniizedd ass sselff. If thee RSSA cconjjugaate

54、 werre iinjeecteed iintoo annothher hosst, thee prroteein wouuld nott bee reecoggnizzed as sellf. It iis iimpoortaant to reccognnizee thhat thee immmunne ssysttem reaactss too thhe ppepttidee-prroteein carrrieer aas aa whholee annd tthatt thheree wiill be a pporttionn off reespoonsee diirecctedd agg

55、ainnst thee coonjuugatted pepptidde aas wwelll ass thhe llinkker andd thhe ccarrrierr prroteein11. WWhenn sccreeeninng bby EELISSA iit iis aadviisabble to usee a pepptidde cconjjugaate preeparred usiing a ddifffereent carrrieer pprotteinn. TThiss iss noot nneceessaary if perrforrminng EELISSA aassaa

56、ys wheere thee pllatees aare coaatedd diirecctlyy wiith uncconjjugaatedd peeptiide. Multtiplle AAntiigennic Pepptiddes (MAAPs)The MAPP syysteem rreprreseentss a uniiquee appprooachh too annti-pepptidde aantiiboddy ggeneerattionn11. Thee syysteem iis bbaseed oon aa smmalll immmunnogeeniccallly iinerr

57、t bbranncheed llysiine corre oontoo whhichh muultiipe pepptiddes aree syynthhesiizedd inn paaralllell. TThe ressultt affterr syynthhesiis iis aa thhreee-diimennsioonall moolecculee, wwhicch hhas a hhighh moolarr raatioo off peeptiide anttigeen tto ccoree moolecculee annd ttherrefoore doees nnot reqq

58、uirre tthe usee off a carrrieer pprotteinn too innducce aan aantiiboddy rrespponsse. Eacch ccoree moolecculee maay cconttainn foour ideentiicall peeptiidess. IIn ttheoory, MAAP hhas an advvanttagee whhen commparred to itss moonommeriic ccounnterrparrt aattaacheed tto aa caarriier prooteiin iin tthat

59、t thhe llysiine corre oof aa MAAP iis ssmalll ccomppareed wwithh thhe ppepttidee anntiggen. Thhereeforre, thee coonceentrratiion of anttigeen iis aat aa maaximmum. Thhe rresuult is a hhighhly immmunoogennic MAPP, wwhicch eexhiibitts ssignnifiicanntlyy hiigheer ttiteers wheen ccomppareed tto iits mon

60、nomeericc coountterppartt atttacchedd too a carrrieer pprotteinn. It sshouuld be notted thaat ttherre aare somme ssyntthessis conncerrns wheen mmakiing a MMAP commpleex. Thee brrancchedd naaturre oof tthe lyssinee coore alllowss foor mmulttiplle ccopiies of thee peeptiide to be synntheesizzed; hoowe