浅析复方酸枣仁油栀子油对小鼠学习记忆的影响

1、浅析复方酸枣仁油栀子油对小鼠学习记忆的影响【摘要】目的观察酸枣仁油、栀子油组成的复方酸枣仁油栀子油促进学习记忆作用和二药的互相作用。方法采用避暗、跳台、水迷宫实验，分别利用东莨菪碱、环己酰亚胺、亚硝酸钠、4.282l/L乙醇造成小鼠的记忆获得、稳固、再现障碍，观察复方酸枣仁油栀子油对正常及记忆障碍小鼠的学习记忆作用。结果对正常和记忆损伤小鼠，复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油能缩短训练时入室埋伏期、减少入室错误次数;能延长训练后入室埋伏期、减少入室错误次数，减少跳台错误次数;也能缩短水迷宫实验小鼠的登台埋伏期，增加其穿越次数，复方中剂量缩短小鼠登台埋伏期较酸枣仁油、栀子油作用强。结论复方酸枣

2、仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油具有促进学习记忆作用;复方中酸枣仁油、栀子油起协同作用。【关键词】复方酸枣仁油栀子油;酸枣仁油;栀子油;学习记忆ABSTRAT:bjetiveTbservetheeffetsfpundjujubeseedilandgardeniailiniprvinglearninganderyinieasellastheinteratinbeteenjujubeseedilandgardeniail.ethdsSplaine,ylhexiide,sdiunitriteandethanlereutilizedtstudytheaquisitin,nslidatinandretrie

3、valpressesferyiniebythestep-thrughtest,step-dntestandrrisaterazetest,andtbservetheeffetsfjujubeseedilandgardeniailpundnlearninganderyinie.ResultsInnralieandery-daagedie,thejujubeseedil,gardeniailandthEirpundalluldshrtendeliteseneftraining,redueerrrnubertiesftrainingerrrs,extenddelitesenefpst-trainin

4、gbythestep-thrughtest,redueerrrnuberfpst-trainingbythestep-thrughandstep-dntests,shrtenthedelitesenefupperplatfrandinreasepassing-thrughnuberbyrrisaterazetest.Thepundshrtenedthedelitesenefupperplatfrbetterthaneitherfthetils.nlusinThepundjujubeseedilandgardeniailanprtelearninganderyinie,andthetilsinb

5、inatinshanbviussynergistieffet.KEYRDS:pundjujubeseedilandgardeniail;jujubeseedil;gardeniail;learningandery学习记忆是大脑最根本也是最重要的高级神经功能，既是认知活动的组成局部，也是重要的智力因素。学习主要是指人或动物通过神经系统承受外界环境信息而影响自身行为的过程;记忆是指获得的信息或经历在脑内贮存和提取(再现)的神经活动过程1。酸枣仁为鼠李科(Rhanaeae)植物酸枣Ziziphusjujubaill.var.Spinsa(Bunge)HuexH.F.h的枯燥成熟种子。甘酸性平，善养肝

6、血，益心阴而宁心安神。栀子为茜草科植物栀子(GardeniajasinidesEllis)的枯燥成熟果实。栀子苦寒，清热泻火，凉血解毒，擅入心经，长于清心透邪，除烦解郁而安神定志。二药合用，为治血虚阴亏、热扰神明而致心烦失眠之常用药对。对复方酸枣仁油栀子油的镇静催眠抗惊厥作用已有报道2。本文主要观察其促学习记忆作用。1材料与统计1.1药品与试剂超临界2萃取的酸枣仁油(jujubeseedil,JS)、栀子油3(gardeniail,G)由第四军医大学药物研究所制备，按214配伍成复方酸枣仁油栀子油(pundjujubeseedilandgardeniail,JG)，批号：260515;氢溴酸东

7、莨菪碱(splainehydrbride)，徐州莱恩药业产品，批号：0311181;环己米特(环己酰亚胺，ylhexiide)，Siga公司产品;亚硝酸钠(sdiunitrite)，上海之臻化工产品，批号：060104;乙醇(ethanl)，西安化学试剂厂，批号：051024。1.2仪器避暗、跳台两用仪为西安交通大学医学院设备科制造;T-200rris水迷宫视频跟踪系统为成都泰盟科技制造。1.3动物昆明种IR小鼠，陕医动字第08-004，二级合格动物，体重1822g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。1.4统计学处理实验数据以s表示。显著性检验采用SPSS16.0统计分析软件，计量资料的方

8、差分析采用Univariate组间LSD-t检验/Tahane-t检验的两两比拟;局部指标选用非参数Kindependentsaples(Kruskal-allisH)检验。对水迷宫重复测量数据进展一般线性模型(generallineardel,GL)的repeatedeasures和ultivariate，用repeatedeasures单变量方差分析LSD-t检验，实现每组在各时间点上的两两比拟;用ultivariate多元方差分析LSD-t检验，实现各时间点上组间的两两比拟5。P0.05断定为有显著性差异。2方法与结果实验分4批进展，每批随机分为复方大(5.4g/kg)、中(2.7g/k

9、g)、小(1.35g/kg)剂量组，酸枣仁油组1.8g/kg，栀子油组0.9g/kg，均用生理盐水稀释至6L/kg灌胃给药，模型组、正常组给予等容积生理盐水，每组10只。各组小鼠每天上午900给药1次，连续给药15d。第16天上午给药1h后开场避暗、跳台和水迷宫训练并测定6。2.1复方酸枣仁油栀子油对记忆获得障碍模型小鼠学习记忆的影响第16天上午给药1h后，除正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均依次腹腔注射1.5g/kg东莨菪碱溶液造成记忆获得障碍模型。10in后，开场训练并测定各组小鼠的入室埋伏期和5in内错误次数。15in后，测定5in内小鼠跳下平安台的错误次数。24h后，在与训练日一

10、样的时段再次测试，记录各组小鼠的入室埋伏期和5in内入室错误次数以及小鼠第一次跳下平安台的埋伏期和3in内错跳次数(表1、表2)。表1复方酸枣仁油栀子油对记忆获得障碍模型小鼠学习记忆(避暗法)的影响表2复方酸枣仁油栀子油对记忆获得障碍模型小鼠学习记忆(跳台法)的影响结果说明：对于记忆获得障碍模型小鼠，复方酸枣仁油栀子油能明显缩短训练时小鼠入暗室的埋伏期，并减少入室错误次数;也能明显延长训练后小鼠入暗室的埋伏期并减少入室错误次数;减少训练后跳台错误次数。酸枣仁油、栀子油也可减少训练时、训练后小鼠的入室错误次数;延长训练后入室埋伏期，减少跳台错误次数。说明复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油对记忆

11、获得障碍模型小鼠的学习记忆有促进作用。2.2复方酸枣仁油栀子油对记忆稳固障碍模型小鼠学习记忆的影响第16天上午给药1h后，于训练后除正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均立即腹腔注射120g/kg环己酰亚胺溶液造成记忆稳固障碍模型。24h后，在与训练日一样的时段再次测试，记录各组小鼠的入室埋伏期和5in内电击次数以及小鼠第一次跳下平安台的埋伏期和3in内错误次数。结果显示：复方酸枣仁油栀子油能明显减少训练时正常小鼠的入室错误次数;能延长训练后记忆稳固障碍模型小鼠的入室埋伏期，明显减少入室错误次数;减少训练后跳台错误次数。酸枣仁油、栀子油对训练时、训练后的正常和记忆障碍小鼠均可减少其入室错误次

12、数。说明复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油能改善正常和记忆稳固障碍小鼠的学习记忆才能(表3、表4)。表3复方酸枣仁油栀子油对记忆稳固障碍模型小鼠学习记忆(避暗法)的影响表4复方酸枣仁油栀子油对记忆稳固障碍模型小鼠学习记忆(跳台法)的影响2.3复方酸枣仁油栀子油对记忆再现障碍模型小鼠学习记忆的影响第16天上午给药1h后开场训练并测定。24h后，在与训练日一样的时段，除正常对照组灌胃给予生理盐水外，其余各组均灌胃给予4.282l/L乙醇溶液10L/kg造成记忆再现障碍模型。30in后，再次测试并记录各组小鼠的入室埋伏期和5in内电击次数以及小鼠第一次跳下平安台的埋伏期和3in内错误次数(表5、表

13、6)。表5复方酸枣仁油栀子油对记忆再现障碍模型小鼠学习记忆(避暗法)的影响表6复方酸枣仁油栀子油对记忆再现障碍模型小鼠学习记忆(跳台法)的影响结果显示：复方酸枣仁油栀子油能缩短训练时正常小鼠的入室埋伏期，减少入室错误次数，并能减少训练时跳台错误次数;可以明显延长训练后记忆再现障碍模型小鼠入室埋伏期及减少入室错误次数;减少训练后跳台错误次数。酸枣仁油、栀子油也可减少训练时正常小鼠的入室埋伏期及入室错误次数;减少训练后记忆障碍小鼠跳台错误次数。说明复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油能改善正常和记忆再现障碍小鼠的学习记忆才能。2.4复方酸枣仁油栀子油对记忆障碍模型小鼠学习记忆(水迷宫法)的影响第1

14、6天给药1h后开场rris水迷宫训练。将水池等分为4个象限，分别称为S、N、SE及NE象限,在S象限正中离池壁33处放一个直径10、高15的平台，平台顶低于水面1。迷宫上方安置带有显示系统的摄像机,同步记录小鼠的运动轨迹。每只动物每天训练4次，训练期间迷宫外参照物保持不变。每天将小鼠从不同入水点背对站台放入水池,并记录小鼠自入水到找到站台所需的时间，称为埋伏期。用于测量小鼠空间学习和记忆的才能。找到后在平台上保持15s，如1in内找不到，引导到平台上，保持15s。连续训练4d，最后1d训练后除正常对照组腹腔注射生理盐水外，其余各组均立即皮下注射亚硝酸钠120g/kg，第20天给药1h后进展行为

15、测试。实验开场将站台的位置转移到另一个象限中进展站台迁移试验。记录埋伏期，然后把站台去掉，记录2in内小鼠穿越站台位点的次数，记为穿越次数。用于测量小鼠学会寻找平台后，对平台位置的记忆才能。实验发现复方酸枣仁油栀子油于训练第2天(给药第17天)即可缩短正常小鼠的埋伏期，随着训练天数的增加缩短作用更加明显;而酸枣仁油于训练第3天(给药第18天)方可缩短正常小鼠的埋伏期，随着训练天数的增加缩短作用越加明显;用亚硝酸钠制备记忆稳固障碍后，仍可发现复方酸枣仁油栀子油缩短记忆障碍小鼠的埋伏期，增加其穿越次数;酸枣仁油、栀子油也可缩短记忆障碍小鼠的登台埋伏期;组方中以复方中剂量作用为佳，于给药第19、20

16、天复方中剂量缩短小鼠埋伏期较酸枣仁油、栀子油有显著性意义，即ABA，ABB。说明复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油有促进正常及记忆障碍小鼠的学习记忆才能;复方中酸枣仁油与栀子油在学习记忆方面有协同作用7(表7)。表7复方酸枣仁油栀子油对记忆障碍模型小鼠学习记忆(水迷宫法)的影响3讨论采用避暗、跳台、rris水迷宫实验法，给予东莨菪碱、环己米特(环己酰亚胺)、亚硝酸钠、乙醇等公认的记忆障碍工具药6，分别造成小鼠获得、稳固和再现性记忆缺损模型，发现复方酸枣仁油栀子油能减少正常小鼠入室错误次数。对记忆获得、稳固、再现障碍模型小鼠训练时的入暗室埋伏期都有缩短作用，减少入室错误次数及错误跳台次数;对训

17、练后的入暗室埋伏期有延长作用，也可减少训练后的入室错误次数及错误跳台次数。酸枣仁油、栀子油也可减少训练时、训练后记忆障碍模型小鼠的入室错误次数;延长训练后入室埋伏期，减少跳台错误次数。复方酸枣仁油栀子油、酸枣仁油、栀子油还可缩短水迷宫实验正常及记忆损伤小鼠的埋伏期，增加其穿越次数。因此，复方酸枣仁油栀子油对正常和记忆缺损小鼠的学习记忆功能均有改善和进步作用;酸枣仁油、栀子油对记忆缺损小鼠的学习记忆功能也有改善和进步作用;酸枣仁油与栀子油在学习记忆方面有相加或协同作用，说明该复方配伍合理。以上作用可能与酸枣仁油、栀子油含有多种植物脂肪酸有关。超临界2萃取的酸枣仁油、栀子油的组成较为单纯，主要含油

18、酸、亚油酸8-10。亚油酸在体内可转化成亚麻酸、花生四烯酸等。油酸可在体内酰化生成油酰胺，油酰胺具有影响学习记忆的作用11。花生四烯酸是人体中含量最高、分布最广的一种多不饱和脂肪酸。在维持膜的物理特性和功能方面起着非常重要的作用。花生四烯酸还参与神经内分泌，调节多种激素和神经肽如加压素的分泌。现已发现花生四烯酸的代谢产物加压素可进步长时学习记忆功能12-13。酸枣仁油、栀子油组成的复方产生促学习记忆作用，对于该复方的作用机制，目前尚不清楚，有待进一步研究。近年来，随着人们对植物脂肪酸越来越多地关注，对植物脂肪酸有效成分的提娶在生物体内的转化、生物学效应、作用靶点以及信号转导等纵深方面的研究，为植物脂肪酸的综合开发和利用，提供了非常广阔的应用前景。【参考文献】1张作记，冯学泉，戚厚兴，等.学习与记忆脑与行为研究的前沿J.中国行为医学科学,2022,14(1):7.2李宝莉，陈雅慧，胡锐，等.复方酸枣仁油栀子油对小鼠的镇静、催眠和抗惊厥作用J.南方医科大学学报,2022,(28)9:1636-1639.3李宝莉，陈雅慧，杨暄，等.栀子油的提取和对中枢神经系统的作用J.第四军医大学学报,2022,29(23):2152-2155.4李宝莉，