DB11-T1431-2017桃树根癌病综合防治技术规程

1、ICS 65.020B 16备案号：56065-2017DB11北京市地方标准DB11/T 14312017桃树根癌病综合防治技术规程Technical regulations for control of peach crown gall (Agrobacterium tumefaciens)2017 - 06 - 29 发布2017 - 10 - 01 实施北京市质量技术监督局发 布DB11/T 14312017目次前言II范围1规范性引用文件1术语和定义1病情分级1防治措施2育苗期预防措施2苗木选择与定植2田间管理2药剂防治2育苗期预防效果调查2附录A （资料性附录） 症状特征3附录B

2、（资料性附录） 发病规律4附录C （资料性附录） 检测方法5参考文献7I前言本标准按照 GB/T 1.12009 相关规则起草。本标准由北京市园林绿化局提出并归口。本标准由北京市园林绿化局组织实施。本标准起草单位：北京市林业保护站、中国农业大学。本标准参与起草单位：北京流村王园果园。本标准主要起草人：王合、米莹、郭岩彬、王建辉、周在豹、杜金萍、龚硕、张崇岭、卢绪利、吴有刚、王永明、王睿琦、赵连祥。IIDB11/T 14312017桃树根癌病综合防治技术规程范围本标准规定了桃树根癌病病情分级、防治措施和育苗期防治效果调查。本标准适用于北京地区桃树根癌病的防治，樱桃、樱花等植物根癌病的防治可参照执

3、行。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 8321.9 农药合理使用准则（九）NY/T 2725 氯化苦土壤消毒技术规程术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1桃树根癌病 peach crown gall又称桃树冠瘿病、桃树根瘤病，是一种细菌性病害，在根颈和根部产生肿瘤，导致树势衰弱，甚至死亡。3.2桃树根癌病病原菌 pathogenicbacterium of peach crown gall引起桃树根癌病的病原菌，为根癌土壤杆菌（Agrobac

4、terium tumefaciens）。3.3抗根癌菌剂 root carcinoma bacteria resistance agent对根癌病菌具有良好拮抗作用的微生物制剂。病情分级按肿瘤发生部位将病情分为 5 级，分级标准如下：级：植株无肿瘤；级：肿瘤发生在须根上；级：肿瘤发生在侧根上；级：肿瘤发生在侧根与主根的连接处；级：肿瘤发生在主根、根颈或枝干上。1DB11/T 14312017桃树根癌病症状特征参见附录A，发病规律参见附录B，检测方法参见附录C。防治措施育苗期预防措施苗圃地选择选择非发病地块作为育苗地，避免在前茬为豆类、蔬菜以及林地、林业苗圃等地块育苗；必要时可对育苗地进行土壤熏

5、蒸处理, 按 GB/T 8321.9 和 NY/T 2725 相关规定执行。砧木种子处理选择抗病的适宜砧木种子，播种前，用抗根癌菌剂拌种处理。苗木嫁接采用高位芽接法嫁接，避免接口与土壤接触；嫁接前，使用 75%酒精对嫁接工具进行消毒处理。苗木出圃对病情为 1 级、2 级的苗木剪除肿瘤，剪除的肿瘤及时销毁；对病情为 3 级、4 级的苗木及时销毁。苗木选择与定植对无症状苗木及剪除肿瘤的 1 级、2 级苗木进行蘸根处理并及时定植。定植前，将抗根癌菌剂放入陶瓷、塑料等非金属容器中，加水，按 1:1 调匀成糊状，将剪根后的桃苗浸入菌液中，浸入深度超过根颈上部 5cm，即可拿出栽植，随浸随栽。田间管理对于

6、碱性土壤的果园，适当增施酸性肥料、有机肥和果树专用肥料。减少果园土壤清耕等栽培管理措施以及蛴螬、蝼蛄等地下害虫对根系的伤害。将大水漫灌、串灌改为一树一畦的单株灌溉或滴灌。药剂防治对已发病株及时切下肿瘤，用抗根癌菌剂等药剂涂抹伤口，切下的病瘤随即销毁。育苗期预防效果调查苗木出圃时，调查使用抗根癌菌剂和其它处理的苗木发病等级，计算防治效果。病情指数与防治效果分别按式（1）、（2）计算：各级病株数 相对级数值病情指数=调查总株数 4100(1)对照的病情指数处理的病情指数防治效果=对照的病情指数100%(2)2DB11/T 14312017附录A（资料性附录） 症状特征地下部分症状桃树根癌病主要发生

7、在根颈部和根部，包括侧根和须根，树干上偶见。根部被害后通常形成球形、扁球形或不规则的肿瘤。初生瘤乳白色或略带红色，光滑，柔软，后逐渐变褐色乃至深褐色，木质化而坚硬，表面粗糙或凹凸不平，龟裂，表面细胞枯死，内部木质化，并在瘤的周围或表面产生一些细根。最后外皮脱落，露出许多突起状小木瘤，瘤的内部组织紊乱并混有薄壁组织及维管束，在较大的根瘤上还会出现许多小瘤。肿瘤的数目少的 12 个，多的达 10 余个，直径差异很大，小如豆粒，大如胡桃和拳头，甚至直径达数十厘米。地上部分症状苗木和新植幼龄桃树受害后，发育受阻，生长缓慢，植株矮小，严重时叶片黄化，早衰。成年果树受害后，生长不良，果实小，甚至全株死亡。

8、3DB11/T 14312017附录B（资料性附录） 发病规律病原菌的越冬病原菌在癌瘤组织的皮层内或在癌瘤破裂脱皮时进入土壤中越冬，细菌在土壤中能存活多年。病原菌的侵入途径病菌通过嫁接、昆虫或人为因素造成的伤口侵入植株。病原菌的传播雨水和灌溉水是自然传播的主要方式，苗木带菌是远距离传播的重要途径。发病条件温度湿度病菌侵染与发病需要一定的湿度和温度，太低太高均不利于病害发生。当旬气温达到2023.5， 地温1820以及土壤和水质偏碱时，均有利于该病菌的侵染为害。土壤理化性质碱性土壤有利于发病,土壤pH值在6.28时均能保持病菌的致病力。偏碱性的土壤和湿度大的沙壤土内发生重，酸性和粘重的土壤中很少

9、发病。嫁接方式嫁接口的部位、接口大小及愈合的快慢均能影响发病程度。在苗圃中，嫁接口与土壤接触时间长，染病机会多，发病率高。4DB11/T 14312017附录C（资料性附录）检测方法致病性检测致病菌分离取新鲜的冠瘿瘤，用2%的次氯酸钠表面消毒2min，再用70%乙醇表面消毒90s，无菌生理盐水清洗3 5遍，用无菌剪刀将冠瘿瘤剪切成0.5cm的小块，加入25倍体积的无菌生理盐水，匀浆后，取上清，涂板到土壤杆菌选择性培养基MW培养基上，28下培养48h72h。MW培养基：每升培养基中含有甘露醇，10.0 g；K2HPO4，0.3 g；生物素，100 g；NaNO3，5.0 g； NaCl，0.2

10、g；MgSO47H2O，0.1 g；0.1%结晶紫，2.0ml；0.1% Fe-EDTA，2.0 ml；琼脂，15g20g。pH，7.07.2；121高压灭菌30 min。致病性检测取分离的单菌落，接种到LB培养基上培养48h。将待测菌液配制成浓度为108 CFU/ml的菌悬液 (OD600 为0.6)。用灭菌接种针在生长7d10d的向日葵茎段上刺数下造成伤口，吸取5l10l 待测菌液滴到无菌棉球上后放置于伤口上，以封口膜包裹伤口，温室内培养15 d后观察结瘤情况，形成肿瘤的为发病。冠瘿碱的检测方法检测用试剂电泳检测缓冲液：按照甲酸:乙酸:水为5:15:80的比例配比。荧光染液：为菲醌-乙醇溶

11、液，由0.02%菲醌-无水乙醇和10%氢氧化钠/60%乙醇溶液按照1：1混合。检测用标准样品：胭脂碱、章鱼碱标准样品，精氨酸标准样品。检测方法取植物肿瘤组织1g2g放入离心管，用解剖针挤压出汁液，离心，用毛细管取上清，点到滤纸上， 同时点胭脂碱、章鱼碱和精氨酸标准样品。在甲酸:乙酸:水=5:15:80溶液中电泳1.5h，电泳电压为400V， 烘干滤纸，用菲醌-乙醇染液染色，在紫外灯下观测荧光斑点，与标准样品比较，含有胭脂碱或者章鱼碱的为发病。核酸检测选取待检测的病菌采用根癌土壤杆菌选择性培养基分离土壤细菌，选取单菌落利用PCR的方法快速检测致病性根癌土壤杆菌。聚合酶链式反应（PCR）检测致病性

12、特异性引物PCR的引物为iaaHF2（5ACATGCATGAGTTATCGTTTGGAAT3）/iaaHR1（5GCATCAAGGTCATCGTAAAAGTAGGT3）；iaaH-F10（5GGAAACATGCATGAGTTATCGTT3）/iaaH-R10（5CCACATCAGCATCAAGGTCATC3）。5DB11/T 14312017聚合酶链式反应（PCR）检测致病性反应体系PCR的反应体系为:10Buffer2.5 ldNTP (10mM)1.0 l菌液 (10ng/ml)1.0 liaaHF2 (10mM)或iaaH-F100.25 liaaHR1 (10mM)或iaaH-R100

13、.25 lTaqDNA酶 (5U/ml)0.2 lddH2O19.8 ltotal25.0 l聚合酶链式反应（PCR）检测致病性反应程序PCR反应程序如下：945 min9440 s5440 s7290 s7210 min4保存核酸检测的结果35 cycles配制1%浓度的琼脂糖凝胶，凝胶电泳检测，iaaHF2/iaaHR1引物能够扩增，电泳检测为 420 bp 的DNA条带为致病性阳性；iaaH-F10/iaaH-R10引物能够扩增，电泳检测为424 bp 的DNA条带可以进一步确定致病性为阳性；两条特异性引物菌无法扩增出条带的为致病性阴性。6DB11/T 14312017参考文献GB 83

14、701987 苹果苗木产地检疫规程.NY/T 51142002 无公害食品桃生产技术规程.马德钦，王慧敏. 果树根癌病及其生物防治J.中国果树,1995,(2):42-44.李健强，王慧敏，张桂火等. 一些杀菌剂和抗菌素对根癌菌和根癌抑制菌的作用J.中国农业大学学报,1996,(3):74-78.王慧敏.植物根癌病的发生特点与防治对策J.世界农业,2000,(7):28-30.刘焕芳，段成国，陈学森等. 核果类果树根癌病菌寄主范围及抗性研究初报J.北方果树,2002,(5):4-7.陶万强，邢彦峰，王合等. 桃树根癌病防治技术J.中国果树,2004,(2):46-47.罗维德，杨金兰，杨永启. 桃树根癌病防治技术探讨J.中国植保导刊,2004,(3):13-17.田国忠，李永，朱水芳等. 我国木本植物致病性土壤杆菌的分子检测和比较鉴定J.林业科学,2006,(2):63-72.罗正均，淮稳霞，赵文霞等. 我国木本植物根癌病检疫与防治问题思考J.林业科技开发树,2011,(4):6-11.付丽，范昆，曲健禄等.