小鼠乳腺癌模型的建立

1、小鼠乳腺癌模型的建立乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，目前，国内外乳腺 癌发病率均呈显著上升趋势，在西方发达国家和我国主要城市女性乳 腺癌发病率已居妇女恶性肿瘤的首位。与某些恶性肿瘤不同的是，及 时正确的诊断与干预能显著改善乳腺癌患者的生存率及生活质量，甚 至能获得终生治愈的效果。为了探索乳腺癌的生物学特征和探讨新的 治疗方法，国内外研究者借助乳腺癌动物模型，对乳腺癌的病因、发 病机制、早期诊断和治疗等方面开展研究。目前乳腺癌动物模型的建立可分为自发型、诱发型和移植型三 种，每种方法各有利弊，实验室使用最多的是移植型。自发型乳腺癌 模型多采用近交系小鼠，如C3H，其生长到一定年龄便自然发

2、生乳腺 肿瘤。这种模型最大的特点是实验动物未经任何有意识的人工处理， 其发生的条件比较自然，与人类患病过程更为相似。目前此种动物模 型是乳腺肿瘤多级预防、治疗和研究发病机制的良好模型。但自发型 乳腺癌模型生长缓慢，不易同时获得大批病程基本一致的动物，观察 时间长，实验耗费大。诱发型乳腺癌模型是通过经口、涂抹、注射和 埋藏等方法应用于实验动物，使之发生乳腺癌。用二甲基苯蒽为诱癌 剂诱发乳腺癌，是应用较多的一种方法。这种方法形成的肿瘤与人体 肿瘤增殖动力学基本类似，但诱癌过程较长，成功率不高，肿瘤发生 的潜伏期个体变异较大，不易同时获得病程或肿块大小均一的模型。 相比之下，移植型动物模型克服了上述

3、缺点。迄今，进入移植型动物 模型实验研究的人乳腺癌细胞系有20多种，其中较为常用的WMCF7.MDA. MB-231和MDA.MB-435等。采用移植法建立的乳腺癌模型周期短， 成本低，可使实验动物均带有同样的肿瘤，生长速度也较一致，个体 差异小，无自发缓解，成瘤率高，是目前实验室应用最多的模型。对此，重点查阅资料关于移植性乳腺癌动物模型制作的具体步骤。材料与方法实验材料动物及分组：取20只昆明鼠随机分成入组(10只)，B组(5只)，C 组对照组(5只)，编号饲养。试剂：无菌水，生理盐水，台酚蓝，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲 苯，石蜡等。仪器：离心机，显微镜，计数板，电子称，超净工作台，温箱，

4、切 片机等。实验方法模型建立：取H22肿瘤细胞，3000转离心分钟，再用无菌生理盐水 洗涤肿瘤细胞3次，并做适当稀释，取40微升细胞悬液加入10微升0.4% 台酚蓝染色并镜检计数，制成浓度为3*106个/ml的肿瘤细胞悬液，每 只小鼠右腋皮下接种肿瘤细胞悬液0.2毫升。细胞计数：细胞计数液2%冰醋酸溶液。取50微升细胞悬液加入450 微升的细胞计数液中计数。记录：接种完成后，逐日观察接种部位有无感染，肿瘤生长后有无自然消退，用游标卡尺，每周测量肿瘤长径&和短径b ,并计算平均直径,即r = (a+ b) /2，每天称量小鼠体重和肿瘤并记录，绘制曲线。制备组织切片：处死小鼠，将肿瘤组织切成1*1

5、*0.4cm的小块。将切块的组织置于螺口瓶中，加入40%甲醛固定，过夜。固定完成后，倒出固定液，立即换上新鲜的70%乙醇，洗脱两次， 室温放置20分钟，继而以75%，80%，85%，90%，95%，100%乙醇脱水 各两次，每次20分钟。从新鲜二甲苯除去乙醇，放置2次，每次10分钟。将样品置于60C温箱中融化石蜡4次，每次1.5小时。将准备好的包埋工具，用一热玻璃吸管加入融化的石蜡，再用热镊 子快速将样品移至充满石蜡的模具中，置于室温，使起完全凝结。从包埋模具中取出石蜡块，放于室温干燥处，切片。讨论：实验肿瘤学的需要导致肿瘤动物模型的产生，借以研究人类肿 瘤的病因、发生、发展以及治疗和预防。肿

6、瘤动物模型可来自于动物 的自发肿瘤、诱发肿瘤和移植性肿瘤。一前两者由于对动物品系要 求严格、实验周期较长或缺少实验一致性而较少使用。移植性肿瘤动 物模型具有特性明确、生长一致性好、实验周期短、瘤株分布广泛、 可反复复制等优点,在肿瘤研究中占有重要地位。可移植性肿瘤，是把 动物或人的肿瘤移植到同系、同种或异种动物，经传代后，组织类型和 生长特性已趋稳定，并能在受体动物中继续传代,又称为可移植性肿瘤细胞。可移植性肿瘤移植于同系或同种动物，称为同种移植,是国内 外最常用的肿瘤动物模型复制方法之一。同种移植的优点是，可供选 择使用的细胞系或细胞株多，许多细胞系在世界范围分布广泛，并且 这些细胞的生物学特性已经比较明确，一般都有明确的背景资料，使 一群动物同时接种同样量的瘤细胞,生长速度一致、个体差异较小， 成活率高，易于对照观察,这些都是便于科研成果相互比较和交流的 有利因素。在接种过程中，应把握注射深度，否则易造成内脏损伤。接种 后三天即开始观察有无肿瘤形成。本实验具有周期短、制作方便、成 功率比较高、较好重复性和稳定性的明显优势，是一种较为理想的肿 瘤实验动物模型，值得推广。参考文献：王蘅文.实验肿瘤学基础M.北京: