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1、实验四电泳技术及详解演示文稿第一页,共四十五页。(优选)实验四电泳技术及第二页,共四十五页。+-1.许多生物分子带有电荷,在电场中可以发生 移动。2.每种分子迁移率不同,一定时间内在电场中 的迁移距离不同。在一定pH条件下,每一种分子都具有特定的电荷(种类和数量)、大小和形状,在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同,各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。原理第三页,共四十五页。二、电泳迁移率设一带电粒子在电场中所受的力为F,则 F = QE(Q为粒子所带电荷,E为电场强度)根据Stoke定律,一球形分子在溶液中运动 所受的阻力f
2、为: f = 6rv(v为分子移动速度;r为分子半径;为介质 黏度)第四页,共四十五页。当分子达到动态平衡时, F = f 即 QE= 6rv 移项得 v/E=Q/ 6r v/E:表示单位电场强度时粒子运动速度,称 为迁移率,也称电泳速度,以表示。 因此上式也可表示为: = Q / 6r从上式可推知,带电粒子在电场中的移动与: 粒子大小有关,颗粒愈小愈快 粒子的电荷有关,电荷愈多愈快 粒子的形状有关,愈接近球形愈快第五页,共四十五页。三、影响迁移率的因素1.电场强度(E) 电场强度是指每厘米的电位降。电泳速度与电场 强度成正比。电场强度越高电泳速度越快。 根据电场强度大小,电泳可分为: 常压电泳:210V/cm 高压电泳:20200V/cm2.溶液的pH值 pH值决定带电颗粒的解离程度,决定物质所带净电荷的多少。选择合适pH,使混合物中各成分所带电量差别较大。 pHpI带负电 pHpI时从阴极向阳极依次排列为LDH5、LDH4、LDH3、LDH2、LDH1 。血清LDH同工酶检测的临床意义:血清LDH同工酶的正常值为LDH1 32.7%、LDH2 45.1%、LDH3 18.5%、LDH4 2.9%、LDH5 0.8% 不
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