砷剂和维甲酸对NB4细胞组织因子和凝血酶调节蛋白mRNA及促凝活性

1、砷剂和维甲酸对NB4细胞构造因子和凝血酶调治卵白mRNA及促凝活性张晓辉胡豫洪梅夏凌辉郭涛沈体贴魏文宁宋善俊【关键词】三氧化二砷；全反式维甲酸；NB细胞;构造因子；凝血酶调治卵白EffetsfArseniTrixiderRetiniAidnRNAandPrtEinExpressinfTissueFatrandThrbdulinandPragulantativityinNB4ells质料和要领细胞造就NB4细胞促凝活性的检测按照文献1要领略作革新，用预冷GKN洗涤NB4细胞并调解细胞浓度1107/l;取其100l并参加等体积混和人正常血浆NHP，于37孵育2分钟,参加100l的25l/LaI2溶

2、液，用凝血仪检测其血液凝固时间。NB4细胞TF抗原和T抗原的检测NB4细胞活力及其分化抗原的检测2接纳台盼蓝拒染法，检测造就细胞在差异时间点的活性。用GKN离心洗涤造就细胞3次，调解细胞终浓度1106/l，别离加110D11b和D33Abs(Siga产物)50l,4孵育30分钟,GKN洗涤后加羊抗鼠FIT50l，4孵育30分钟，洗涤后用流式细胞仪BetnDikinsn公司产物检测分化抗原，同时设阴性和阳性比较。统计学处置惩罚均数比力接纳方差阐发；方差不齐时，接纳秩和查验。效果As23和ATRA对NB4细胞TF、T抗原表达的影响以1l/LAs23和1l/LATRA别离处置惩罚NB4细胞，在0、2

3、4、48、72、96、120小时差异时间点检测表现，给药组NB4细胞TF抗原的表达较比较组明显落落，且随着孵育时间延伸，呈渐进性低落；而ATRA对NB4细胞T抗原表达呈时间依靠方法明显增高P0.01(表1,2)。As23和ATRA对NB4细胞PA的影响As23和ATRA可下调NB4细胞PA的活性,随孵育时间的延伸，血液凝固时间渐进性延伸，由于血液凝固时间与PA活性成反比，故其PA活性渐进性落落P0.01表3。As23和ATRA对NB4细胞细胞活力的影响研究效果表白，在120小时As23组细胞活力的72.31.6%，而ATRA组的细胞活力为81.94.0%，两组无统计学差异P0.05，As23和

4、ATRA对NB4细胞的活力均无明显影响图1。As23对NB4细胞TF和TRNA转录的影响As23和ATRA均明显下调NB4细胞TFRNA转录；ATRA能明显上调NB4细胞TRNA转录,而As23对NB4细胞TRNA转录无明显调治作用。图2中1、2、3、4、5、6道别离代表在As23、ATRA的作用下0、24、48、72、96、120小时TFRNA的转录P0.01。讨论TF是一种含有糖基的单链跨膜卵白，分子量47kD，其基因位于染色体1p21-1p22,含有布局基因和调治序列两部门；TF作为凝血因子的辅因子和受体，是生理性凝血历程中最紧张的启动因子3，4。正常机体中TF普及而特异的表达组成一个庇

5、护层，与血液直接打仗的细胞都不产生TF，确保生理条件下血液不会因TF表达而触发凝血；APL的出血机制是早幼粒细胞促凝物质的开释，APL细胞含有至少2种颗粒，TF和肿瘤促凝物质P；P存在于恶性构造和胚胎构造，是半胱氨酸卵白酶，它可在凝血因子缺乏时直接激活因子5。本研究效果表白，给药组NB4细胞TF抗原表达较正常比较组明显低落，因TF与PA严密关联，故其PA相应低落，大概是APL患者临床易归并DI的重要机制之一；尚有研究表白，髓系白血病细胞的TF抗原、TF活性以及TF活性/TF抗原比率，较淋巴细胞性白血病细胞明显增高，白血病并发DI患者较无DI者亦明显增高6，7。NB4细胞在As23和ATRA处置

6、惩罚前，具有埋伏的高凝和纤溶亢进，在二者诱导NB4细胞向成熟分化同时，均可下调TFRNA转录和其卵白表达，说明As23和ATRA临床治疗APL期间，可早期减轻出血归并症的机制。T基因位于20号染色体P1220p12,RNA编码区序列1.7kb,它是一个多布局域的跨膜糖卵白，分子量为60.3kD,其卵白表达在内皮细胞外貌8。血液凝血历程是一系列酶促连锁反响历程，限速因素是凝血辅因子，包罗高分子激肽原、凝血因子和凝血因子。卵白体系是凝血因子和凝血因子的按捺物，包罗凝血酶调治卵白T、卵白、卵白S等,凝血酶和T的协同作用下卵白被激活，从而灭活凝血因子a和凝血因子a；在凝血酶和细胞外貌的T团结成复合物，此时凝血酶的成效产生改变，使凝血因子、血小板等成效丧失，成为卵白激活物,从而改变凝血酶的促凝活性，使其发挥抗凝作用2，9。同时T具有抗溶纤特性10-12。本实行效果表白，ATRA可明显上调TRNA及其卵白表达，同时下调TFRNA及卵白表达；As23不影响T的表达，与外洋文献报道根本同等3。研究效果表白，As23和ATRA团结应用使NB4细胞TF抗原表达及PA的低落具有协同作用13，14。综上所述，As23和ATRA在体外均可明显下调TF抗原表达及其RNA转录，ATRA可明显上调T抗原表达及其RNA转录，As23和A