茅苍术药材高效液相色谱蒸发光散射检测指纹图谱的研究

1、茅苍术药材高效液相色谱-蒸发光散射检测指纹图谱的研究贾晓东赵兴增王鸣郭可跃赵交情冯煦【摘要】目的研究茅苍术的HPL-ELSD指纹图谱。要领高效液相色谱法，蒸发光散射检测器(ELSD)，水0.25%乙酸-乙腈梯度洗脱；流速0.6l/in；柱温30。ELSD条件：不分流；漂移管温度112.8；气氛流量3.1L/in。结果共有10个共有峰，接纳?中药色谱指纹图谱相似度评价体系2022A版?得出了茅苍术药材的比较指纹图谱。细密度、不变性、重复性实行中各共有峰相对保存时间和相对峰面积的RSD均3。结论该指纹图谱要领轻便、重复性好，为有用地操纵茅苍术药材的内涵质量提供了科学根据。【关键词】茅苍术指纹图谱高

2、效液相色谱蒸发光散射苍术为菊科植物茅苍术Atratyldeslanea(Thunb.)D.或北苍术Atratyldeshinensis(D.)KidZ.的枯燥根茎1。始载于?神农本草经?，苍术性辛、苦、温，归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目作用。主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒伤风等，中医临床利用汗青久长。此中尤以产于江苏茅山地域的茅苍术品格最好。茅山地域是茅苍术的道地产区。但比年来国际市场对苍术的需求量日益增长，茅苍术被打劫性采挖，加之对茅苍术生态环境的报酬粉碎，造成茅苍术资源的枯竭，使其濒于灭尽2。为了庇护这一贵重资源，需对其精良品格举行阐发。查阅相干文献创造对茅苍术传统

3、意义上的活性部位挥发油的研究，未创造与道地性的直接接洽，以是我们拔取了茅苍术的水溶性部门举行开端的指纹图谱的研究。由于茅苍术水溶性部位含有的重要身分为无紫外汲取单萜苷类，应选用蒸发光散射检测器，得到了精良而不变的结果。根据国度药品监视办理局2000年公布的“中药注射剂指纹图谱技能要求的有关划定3，对产于江苏茅山地域的差异网罗所在的10批茅苍术举行了HPLELSD指纹图谱要领的创立。创立其指纹图谱是为了反响其质量环境，为创立不变、可靠、全面的质量操纵要领提供科学根据。1质料与仪器1.2比较品苍术苷A，3，4，11，14-四羟基愈创-9-烯-11-D-吡喃葡糖苷，纯度98，本课题组分得。1.3试剂

4、及仪器乙腈：HPL级；乙酸：AR级；去离子水。Agilent1100液相色谱仪，HPhestatin色谱事情站，AlltehELSD2000ES蒸发光检测器，AgilentINTERFAE35900E数模转换器，XK-无油气氛泵，PhenxenexSynergiHydr-RP80A柱4.6250，4加18预柱。2要领2.1色谱条件经要领学研究确定色谱条件，活动相A：水含0.25%乙酸，B：乙腈。梯度洗脱步伐见表2。柱温30；流速0.6l/in；进样量：30l。ELSD接纳不分流形式，漂移管温度112.8，气氛流量：3.1L/in。表1植物样品的网罗环境略表2梯度洗脱步伐略2.2供试液制备取如上

5、枯燥植物样品，粉碎，过40目筛。细密称定2g，置索氏提取器中，加80l正己烷水浴加热回流脱脂8h。弃去正己烷液，取出样品纸包待正己烷挥发至干，再加80l甲醇提取8h。将甲醇提取液减压蒸至小体积，甲醇定容至10l，用0.45微孔滤膜滤事后备用。2.4不变性实行取茅苍术04号样品供试液，别离在0，4，8，12，24h检测指纹图谱。结果各色谱峰的相对保存时间和峰面积比值根本同等，RSD3，供试品溶液在24h内不变，切合指纹图谱技能要求。2.5细密度实行取茅苍术03号样品供试液，一连进样5次，检测指纹图。比力各共有指纹峰的相对保存时间和相对峰面积，结果表白各共有指纹峰的相对保存时间和相对峰面积根本同等

6、，RSD3，切合指纹图谱的检测要求。2.6重复性实行取茅苍术09号样品5份，按供试品溶液制备要领制备供试品，检测指纹图。并别离按上述液相条件测定，对共有峰的相对保存时间和相对峰面积举行统计，5份供试品溶液的RSD3，切合指纹图谱的要求。2.7样品测定细密汲取供试品溶液各30l，注入液相色谱仪，按“2.1中色谱条件测定，记载色谱图。以苍术苷AS峰的保存时间及峰面积为1，盘算各共有指纹峰的相对保存时间和峰面积比值。并按“中药注射剂指纹图谱研究的技能要求创立茅苍术药材的指纹图谱检测尺度。3结果3.1相对保存值指纹谱的创立接纳相对保存时间标定指纹峰，记载80in的色谱图，以图谱中苍术苷A3号峰为参照物

7、S，将各指纹峰保存时间与同一图谱中参照物的保存时间设定为1比力，其比值为各指纹峰的相对保存时间。盘算10批药材指纹图谱中各指纹峰的技能参数见表3，标定茅苍术的特性指纹峰为10个见图1。各特性指纹峰的保存时间为：峰-123.432in；峰-226.383in；峰-330.468in；峰-443.478in；峰-544.682in；峰-650.365in；峰-752.176in；峰-863.336in；峰-965.065in；峰-1070.435in。此中峰6为3，4，11，14-四羟基愈创-9-烯-11-D-吡喃葡糖苷。表3茅苍术指纹图谱的技能参数略3.2共有指纹峰面积的比值通过10批药材测定，

8、以图谱中苍术苷A为参照物S，将各特性指纹峰面积与同一图谱中参照物的峰面积比力，其比值为特性指纹峰的相对峰面积。据“中药注射剂指纹图谱研究的技能要求划定，各共有指纹峰的面积比值必需相对结实。峰-4单峰面积占总峰面积百分比20，其差值20；峰-3单峰面积占总峰面积百分比10，而20，其差值25；别的单峰面积比均10，峰面积比值不做要求。切合指纹图谱的要求。3.3非共有峰面积通过10批药材供试品的测定，统计非共有峰与总峰面积的百分比，其结果为非共有峰面积百分比7.07，切合指纹图谱研究的10的检测要求。3.4相似度接纳?中药色谱指纹图谱相似度评价体系2022A版?对百般品色谱图的原始文件输特别式为a

9、ia举行阐发，主动匹配并以10批样品天生的比较谱图中位数法作为比较模版，盘算各色谱图的团体相似度介于0.5640.887之间。见表4。表410批药材相似度略3.5别的药材和茅苍术HPL-ELSD尺度指纹图谱的比力在同样条件下别离测定了产于湖北和安徽的南苍术、北苍术、白术药材的色谱图，并与茅苍术HPL-ELSD尺度指纹图谱比力相似度。结果见表5。图1典范茅苍术HPL-ELSD色谱图略4讨论苍术为中医常用药，临床应用汗青久长，具有健脾燥湿、祛风散寒的成果，尤以产于江苏茅山地域的茅苍术品格最好，向来以为茅山是茅苍术的道地产区。对茅苍术道地性的研究会合在对其挥发油的研究。大量实行证实道地产区与非道地产

10、区茅苍术含油量有明显性差异，且道地产区低于非道地产区，这提示我们茅苍术的道地性大概不是表如今挥发油上，而是在水溶性身分中。日本学者在对茅苍术的研究中，从其水溶性部门分得了大量的单萜苷类身分，且表现具有较好的药理活性。基于这种缘故原由，我们对茅苍术的水溶性化学身分举行了体系的化学分散，并对其指纹图谱举行研究。实行创造，苍术水溶性部门身分多为没有紫外汲取的单萜苷类身分，接纳紫外检测器在图谱中根本看不到汲取峰，故本实行选用ELSD检测器并得到了满足的结果。表5与别的药材的比力结果略4.1提取条件探究比力了甲醇、95乙醇、50甲醇、50乙醇等对样品的提取结果，以甲醇提取的样品液出峰较多，应选定甲醇做为

11、提取溶剂。4.2液相条件探究本实行接纳ELSD检测方法，ELSD检测器能检测到任何挥发性低于活动相的化合物，因此溶剂中极微量的残留身分也能检测出来，造成峰的滋扰或基线不稳。在液相洗脱条件的探究中，实行了利用甲醇水，乙腈水两种溶剂体系。纵然在利用高纯度甲醇溶剂时，谱图中仍有含量较大的杂峰，而在选用乙腈时杂峰较少，应选择乙腈水做为梯度洗脱的溶剂体系。茅苍术所含身分较庞大，给液相分散带来了很大的困难，通过参加必然的缓冲溶液可以大大的改进峰形，进步分散度。对几种挥发性的缓冲溶液举行比力，选定参加0.25%的乙酸。所网罗的10批药材均为野生茅苍术药材，生常年限等因素大概会对药材的内涵质量产生必然的影响，

12、所研究的指纹图谱所表达的信息，仅代表茅苍术药材的团体环境，故而10批茅苍术药材的指纹图的相对峰面积值变异较大。10批茅苍术药材图谱与茅苍术尺度指纹图谱的相似度介于0.9650.855之间，产于湖北的南苍术与茅苍术尺度指纹图谱的相似度为0.867，表现两者有较靠近的化学身分构成。产于安徽的南苍术与茅苍术尺度指纹图谱的相似度为0.73，显着不如产于湖北的茅苍术近，这与别的实行证实的结论符合。茅苍术在茅山地域生长具有较好的道地性上风，引种于湖北地域的茅苍术道地性上风优于别的地域。产于北京的北苍术与茅苍术尺度指纹图谱的相似度为0.236，表现二者之间化学身分相差大，不克不及混用。白术与茅苍术尺度指纹图谱的相似度为0.062，相似度最低。本实行创立的HPL-ELSD指纹图谱为快速断定苍术类药材提供了根据。本实行在中药色谱指纹图谱相似度评价体系20