DB1303-T188-2005牛冷冻胚胎移植技术规程

1、B43DB秦皇岛市地方标准DB1303/T10-31 实施牛冷冻胚胎移植技术规程2005-10-31 实施2005-10-31 发布秦皇岛市质量技术监督局 发布DB1303/T 1882005DB1303/T 188200511本标准由秦皇岛市畜牧局提出；本标准在秦皇岛市畜牧局归口 ；本标准起草单位：秦皇岛市畜牧工作站。 本标准起草人：郑庆丰、郭瑞芬、鲍淑琴、孙红梅。DBI3O3/T 1882003DBI3O3/T 188200322DBDB13 03/1 1882005牛冷冻胚胎移植技术规程1范围本规程规定了牛冷冻胚胎移植的受体牛的选择及饲养管理、受体牛的同期化发情

2、处理、受体牛的发 情鉴定、受体牛的胚胎移植、妊娠受体牛的饲养管理。本规程适用于秦皇岛市规模养牛场户的高产优质冷冻胚胎的移植。2受体牛的选择及饲养管理2.1受体牛的选择2.1.1选择肘间选择时间宜确定在实施胚胎移植以前2个丿左右(即2个发情周期)，以便于观察受体牛的发情周期。1.2品种受体牛的品种应以体型大小与供体牛相符的黄牛及其改良品种为宜。2. 1.3年龄一般耍求受体牛年龄在3岁6岁之间。1.4体躯结构体型外貌良好、丰满；长、宽、深发育充分；身体前、中、后躯，胸深、四肢比例协调；貝.有良好 的乳丿另;被毛要有光泽。2.1.5体况选择发育中等以上水平的个体，有较明显的品种特征，肢势端任，年龄与

3、体重相吻合，膘情在7成 以上，体格健壮、健康无病，具有很好的耐病力。2.1.6繁殖性能应充分了解该牛的繁殖性能及是否患有繁殖机能疾病。选择经产牛肘，应选择分娩在90天以上，产 犊性能和哺乳能力良好，无流产史的牛，同时应了解其发情周期是否正常、已产胎次、上一胎产犊时间 及数量、日前是否受孕等情况，对于繁殖性能差、有繁殖机能疾病、二次人工受精不受胎或已受孕的牛 坚决不能选用。2.2受体牛的饲养管理2.2.1受体牛的饲养受体牛在移植前6周8周开始补饲,根据首体牛的膘情日喂精料1. 5kg左右，保持日增重(0. 3-0.4) kg/日。在日粮组成中若不添加苜蓿，则豆饼等蛋白饲料应占20-25%,添加苜

4、蓿至粗饲料喂量的40%时, 盘饼给量可降到18-20%。玉米占45%左右，缺皮20%左右为宜。钙磷比例要合适，如添加磷酸氢钙可占精 料1T. 5%。食盐添加量0. 5-1%,同时保证微量元素及维生素足量供给。2.2.2受体牛的管理受休牛单独组群饲养，保持环境相对稳定，避免应激反应。3受体牛的同期化发情处理1同期化处理之前的准备对受体牛进行直肠触摸,检查卵巢是否处于活动状态。处丁活动状态的牛方可进行同期化发情处理。3.2同期化发情处理用药品及剂量药品：氯前列烯醇（PG, 0.2mg/2ml/支）；剂量；经产牛（0.3-0. 4） mg/次，育成牛（0.2（）.3） mg/次。缺乏n. d.，:的

5、季节，在注射PG时同时注射Va. . “针剂1（）2/头，但两种约品不能在同-位置注 射。3.3同期化发情处理的方法采用二次注射法（肌注）：第一次注射，在任意一大；第二.次注射，在第一次注射后11天。第二次 注射后24小时96小时观察发情。笫二次注射观察发情24小肘后，对发情受体牛注射促排3号12. 5u g/ 头移植效果更佳。受体牛发情之日讣为0天，6天8天内进行胚胎移植。4受体牛的发情鉴定应对受体牛跟群观察，以受体牛稳定站立接受其他牛爬跨为发情标准。并准确记录开始站立接受爬 跨的时间（以小时为单位记录）。5受体牛的胚胎移植5.1牛胚胎移植的适宜季节舍饲型牛避开最冷最热的季节，可在其他任何季

6、节进行移梢。一般以每年4月-6月和9月-10月比较 理想。5.2受体移植所需器械、药品移植枪、塑料便外套、近无曲一软外套、碘酊棉球、剪毛剪、2%利多K因、70%酒精棉球、5ml一次性 注射器、卫生纸5.3受体牛移植操作步骤5. 3. 1受体牛在发情后6大8天之间均可进行移植（发情之时定为0小时）。移植前X寸受体牛进行 宜肠触摸，检查黄体是否合格。合格者用于移植。5.3.2受体牛实行I2尾椎间硬膜外麻醉，擦拭外阴部。5. 3. 3对照冷冻胚胎细管外记录和合格受体的发情记录，合理的搭配受体牛和胚胎。5. 3.4解冻胚胎5. 3. 4.1胚胎解冻所需的仪器、器材。立体显微镜、温度计、解冻用水杯、0.

7、 25ml塑料细管、吸卵管、 细管推杆、装管器、2100mm塑料培养皿、0. 22 u m针头式细歯滤器。5. 3. 4. 2胚胎解冻所需溶液。保存液：含0.4%牛血清句蛋白的PBS液；解冻液：1M蔗糖/保存液。5. 3. 4. 3胚胎解冻方法。10%甘油/保存液冷冻胚胎的解冻：胚胎f空气浴（18C25C） 1（）秒-32C水浴1（）秒一揩干细管*剪去细管塞一推出胚胎*解冻液4 分钟f保存液，冲洗5次6次一镜检一装管一细管装入移植枪f移植（胚胎解冻后30分45分钟内移入 受体）。1.5M乙二醇/保存液（含0. 1M蔗糖）冷冻胚胎的解冻（直接辭冻移植法）：胚胎一32C水浴10秒一揩干细管一用70

8、%酒精棉球擦拭细管，晾干f剪去细管塞把细管装入移植 枪f移植（胚胎解冻后5分8分钟内移入受体）。5. 3. 4. 4胚胎发育期与受体移植时间的对应关系胚胎发育期受体移植时间（发情之肘为（）小时）紧缩桑篡胚（M）6.()天-*6. 5天一7. 0天早期囊胚（EB）7. 0天7. 25天囊胚（B）7. 25天f 7. 5天扩张囊胚（EXB）7. 5天。天5.3.5車新将胚胎装入0. 25ml塑料细管（直接解冻移植法不需要重新装管）。5. 3.6细管装入移植枪。DB13O3/T 1882005DB13O3/T 1882005335.3.7把装有细管的移植枪套上硬外套，用塑料环卡紧，再套上软外套。3.

9、 8将胚胎移植到受体有黄体一侧子宫角的上1/3-1/2处。5.3.9按附录A （规范性附录）做好受体移植记录。3. 10妊娠检查在移植后70天90天对受体牛进行妊娠检查，对已妊娠的受体应单独饲养，避免应激反应。6妊娠的受体牛的饲养管理1加强饲养妊娠受体在产前3个月应补充足量的维生素、微量元素，适当限制能量摄入，既要保证胎儿的正常 发育，乂要避免流产、难产。6.2注重免疫防疫根据当地的疾病发生情况，有目的地注射一些疫苗，以防胎儿流产或传染病发生。.同时，平肘应做 好疫病防制，保持环境卫生。DB1303/T 1882003DB1303/T 188200344附录A（规范性附录）受体牛胚胎移植记录表

10、序 号牛号胎 次产犊 日期营养补 充及注 射日期氯前列烯 醇注射日 期、剂量发情 时间移植 时间黄体 状况 左右胚胎数 量及质 量胚胎 谱系 父母技 术 员备 注牛冷冻胚胎移植技术规程编制说明根据市技术监督局2005年农业地方标准制修订计划，由秦皇岛 市畜牧工作站承担了牛冷冻胚胎移植技术规程的起草工作。通 过深入细致的总结近年来我市牛冷冻胚胎移植技术的推广经验，并 在国内同行专家指导的基础上，.目前已完成了该标准的制定工作。 现将起草过程的有关情况说明如下：一、制定本标准的目的和意义牛胚胎移植技术是当今世界应用于畜牧生产的高新生物技术， 已被证明是一项引进优良品种、实现快速扩群的快捷、有效途径

11、。 近年来，我国为了满足奶业迅猛发展对优秀奶牛资源的需求，继牛 人工授精技术之后，牛胚胎移植技术在生产中已经得到广泛的应用。 生产实践证明，推广应用牛胚胎移植技术加快了我市奶牛业实现跨 越式发展的步伐，提高了全市奶牛的整体生产水平。但由于胚胎移植是一项高新生物技术，在实际生产过程中，虽 然进行了精心组织，但经常在受体牛选择利用率、同期发情率、药 物处理后可移植利用率、移植准胎率、流产及难产率五个方面里的 某个或多个环节出现问题，最后往往出现产犊率低的局面。为了促 进这一技术的推广，实现新技术向生产力的转化，特制定本规程。二、制定本标准的主要依据和原则自2000年以来，我站先后派专人到内蒙古大学

12、、河北大学等院 校学习高产奶牛的胚胎移植技术，并在北京相中公司、中国农科院 畜牧研究所等专家的指导下进行具体的生产实践。目前，体外冻胚 的移植已达到了国内先进水平，并摸索出了 一套适于在生产中大面 22积推广的实际操作经验。在本规程在制定过程中，我们在总结生产 经验的基础上，借鉴了内蒙古自治区家畜改良站制定的技术规程。该标准遵循可靠、先进、实用的原则设定项目与指标，对于不 适于或在当前生产中难以推广的指标均舍弃不列。三、与国内外标准比较现阶段我国部分省份制定了一些牛冷冻胚胎移植技术规程，但 在规程中试演成分居多，不适于在生产中大规模的推广应用。尤其 是近年来，随着在生产的不断深入开展，已远远满

13、足不了当前生产 的需要。本规程的制定，是经过多年的生产实践证明了的，适于在 生产中大规模推广，尤其是适于在我市推广的技术操作。通过该标准的执行，可有效地规范当前胚胎移植技术的推广， 进一步提高牛冷冻胚胎移植的成功率，为促进全市奶牛业的更快发 展起到积极的推动作用。牛冷冻胚胎移植技术规程审定会议纪要时间：2005年10月28日地点：秦皇岛市畜牧局会议室参加人员：郭永生闫胜.刘天健丛思茲李鹤飞 张志金郑庆丰李光宇常俊景编写人员：郑庆丰记录：常俊景结论：经过对牛冷冻胚胎移植技术规程的认真审议, 一致同意该技术规程作为秦皇岛市地方标准发布实施，认为 发布后能指导实践，提高畜牧生产水平。附：审定专家签字表牛冷冻胚胎移植技术规程地方标准审定委员会名单日期：2005年10月28日序号审定会职务姓名工作单位所学专业现从事专业职称j娈字1主任委员刘天健秦