胃癌细胞系MKN 中HLA

1、胃癌细胞系MKN 中HLA沈宇清,张建琼,夏梅,缪凤琴,单祥年,谢维摘要目的:探究胃癌细胞系KN中HLA类抗原表达程度非常的分子机制。要领：以胃癌细胞系BG823、G803和SG7901为比拟，使用流式细胞仪检测细胞外貌HLA类复合物的表达环境，esternblt检测HLA类分子重链及轻链表达环境，半定量RTPR检测HLA类分子重链、轻链和抗原加工分子RNA程度的表达环境，并使用HLA基因地区的微卫星序列检测KN细胞HLA基因在DNA程度的完备性。结果：胃癌细胞系KN外貌HLA类复合物表达低落，重链A及B/位点卵白无表达而轻链表达无非常。在RNA程度，胃癌细胞系KN存在重链A、B、列位点和抗原

2、加工分子TAP1、LP2、Tapasin、PA28的表达缺失。微卫星DNA扩增结果开端表现，KN细胞无HLA基因地区DNA的大片断丧失。结论：胃癌细胞系KNHLA类分子复合物表达低落大概是由HLA类分子重链及其加工分子在转录程度改变而引起的。关键词胃癌；HLA类分子；微卫星序列在很多人类肿瘤中创造人类白细胞抗原huanleukyteantigen，HLA类分子的表达下调和丧失，这是肿瘤细胞躲避机体免疫监视的紧张途径之一，也是临床T细胞依靠性免疫治疗的关键停滞1。HLA类分子抗原加工途径中的任何缺陷均可导致细胞外貌HLA类分子抗原肽复合物表达缺陷2。我们已证明胃癌构造标本有显着的HLA类分子表达

3、下调或缺失，说明胃癌是一类免疫原性较弱的肿瘤3。为进一步探究其机制，作者研究了4株胃癌细胞系HLA类及其相干分子的表达环境，探求导致表达下调和丧失的详细缘故原由。1质料与要领1.1质料1.2要领2结果A.PE标识表记标帜的无关一抗表现配景染色;B.胃癌细胞系外貌HLA类复合物表达环境图1流式细胞仪检测胃癌细胞系中HLA类复合物的表达略Fig1HLAlassplexexpressinngastrielllines.2.2胃癌细胞系中HLA类分子重链和轻链卵白表达环境如图2所示，esternblt检测表现4株胃癌细胞系HLA类分子轻链表达无非常，而KN细胞在重链A和B/位点均表达缺失。图2este

4、rnblt检测HLA类分子重链、轻链在卵白程度的表达略Fig2TheexpressinfHLAlassheavyhainandlighthainingastrielllines2.3胃癌细胞系中HLA类分子重链、轻链和抗原加工分子RNA程度的表达环境检测4株胃癌细胞系中HLA类分子重链、轻链及抗原加工分子RNA程度的表达环境创造，G803、BG823、SG79013株细胞系中各分子表达较同等，而KN细胞系存在多种分子的表达缺失，包罗重链A、B、列位点和抗原加工分子TAP1、LP2、Tapasin、PA28图3。图3半定量RTPR检测HLA类分子重链、轻链及抗原加工各分子RNA程度的表达略Fig

5、3TheexpressinfleulesinvlvedinHLAlassantigenpressingpathay2.4胃癌细胞系中HLA分子DNA程度的检测为进一步相识转录产物非常改变的机制，使用HLA基因地区确定的微卫星序列检测细胞系KNHLA基因地区DNA程度的完备性。如图4所示，与比拟细胞G803比拟力，细胞系KN中检测的5个微卫星位点都能看到相应的条带，开端证明无HLA基因地区DNA的大片断丧失，说明KN细胞HLA类抗原加工各分子表达缺失大概产生在转录程度。图4微卫星序列检测非常细胞系KN的DNA程度的完备性略Fig4DetetingfirsatelitearkerinHLAgene

6、regin3讨论胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发病率及殒命率居种种恶性肿瘤之首位。江苏省为胃癌发病的会合区，发病率以苏北地域的建湖、淮安、大丰及扬中最高7。胃癌的发病是多因素多环节作用的结果，机体免疫监视成效缺失在此中起紧张作用。HLA是免疫体系中的紧张分子，到场机体递呈抗原，决定免疫细胞对肿瘤的识别和杀伤，与肿瘤的干系不停受到存眷8。在对江苏省185例胃癌构造标本的免疫构造化学研究中，我们创造有显着的HLA类分子表达下调或缺失，这说明胃癌是一类免疫原性较弱的肿瘤3。本研究拟通过对胃癌细胞系HLA类分子表达环境及分子机制的研究来开端相识胃癌中HLA类分子表达下调的缘故原由。起首使用流式细胞仪

7、检测了4株胃癌细胞外貌HLA类分子复合物的表达环境，创造KN细胞系HLA类复合物表达较别的3株胃癌细胞系显着淘汰。细胞外貌完备的HLA类复合物是由重链、轻链及一系列抗原加工分子所到场递呈的抗原肽所组成的，该历程中任何一个环节的非常都市影响到HLA类复合物的正常表达。HLA类分子下调缘故原由在差异肿瘤中各不雷同，但都产生在到场抗原递呈各环节的分子中9。别的，HLA类分子非常表达可产生在基因程度、转录程度、翻译水同等多个程度上，但在转录程度调治基因表达是最经济和有用的，因此对付HLA分子表达调控的研究也多数会合在转录程度10。为相识胃癌细胞系KN细胞外貌HLA类复合物表达下调是抗原加工递呈历程的哪

8、种分子在哪一程度的改变所引起，我们进一步使用RTPR及esternBlt技能检测胃癌细胞系中到场抗原加工递呈各分子在转录程度的表达环境。3株胃癌细胞系BG823、G803和SG7901HLA类重链、轻链卵白表达，HLA类重链、轻链及相应的抗原加工分子RNA的表达程度无改变，而胃癌细胞系KN重链A及B/位点卵白无表达，但是轻链表达无非常。在RNA程度，胃癌细胞系KN存在重链A、B、列位点和抗原加工分子TAP1、LP2、Tapasin、PA28的表达缺失。为进一步相识转录产物非常的改变机制，我们使用HLA基因地区确定的微卫星序列检测KN细胞在HLA基因地区DNA程度的完备性，结果表现KN细胞无HL

9、A基因地区DNA的大片断丧失，因此我们开端断定胃癌细胞系KNHLA类分子复合物表达下调是由HLA类分子重链及抗原加工分子在转录程度的改变引起。由于所选择的微卫星序列位于非编码区，数量较少，漫衍地区较广，有大概忽略某些基因内部DNA序列的改变，因此这一结果还需进一步实行证明。胃癌在我国发病率高，预后差，殒命率高。在传统的手术治疗、化疗、放疗外，免疫治疗是一种新兴而有用的治疗要领11。很多年来，以玄色素瘤为代表的应用TL和肿瘤抗原肽治疗临床患者已获得很大希望12。然而，HLA类分子的表达非常每每是免疫治疗的停滞，以是我们必需相识在胃癌中HLA类分子表达环境及其分子机制，才气有用地增长HLA类分子的

10、表达，进步免疫治疗的结果及乐成率。本研究创造胃癌细胞系KN中存在重链及种种抗原加工分子在转录程度的非常，这一结论将在胃癌构造标本中得到进一步的验证，终极将为胃癌的产生气制及免疫治疗研究提供实行根据。参考文献1FERRNES,ARINLAF.LssfHLAlassantigenbyelanaell:leularehaniss,funtinalsignifianeandlinialrelevaneJ.IunlTday,1995,16(10):487494.2HIKLINDJ,ARINLAF,FERRNES.HLAlassantigendnregulatininhuananers:Telliunth

11、erapyrevivesanldstryJ.ledTday,1999,5(4):178186.3SHENYQ,ZHANGJQ,IAFQ,etal.RelatinshipbeteenthednregulatinfHLAlassIantigenandlinipathlgialsignifianeingastrianerJ.rldJGastrenterl,2022,11(23):36283631.4ATSUI,IKEDA,AKATSUKAT.HighexpressinfHLAA2nanralsquausellarinaithdnregulatedtransprterfrantigenpresenta

12、tinJ.BiheBiphysResun,2001,280(4):10081014.5VITALE，REZZANIR，RDELLAL,etal.HLAlassantigenandtransprterassiatedithantigenpressing(TAP1andTAP2)dnregulatininhighgradepriarybreastarinalesinsJ.anerRes,1998,58(4):737742.6RAALL,ALENI,ABRERAT,etal.leularstrategiestdefineHLAhapltypelssinirdissetedturellsJ.HuInl

13、,2000,61(10):10011012.7孙秀娣，牧人，周有尚,等.中国19901992年胃癌殒命观察阐发J.中华肿瘤杂志,2002,24(1):48.8SANDAG,RESTIFNP,ALSHJ,etal.leularharaterizatinfdefetiveantigenpressinginhuanprstateanerJ.JNatlanerInst,1995,87(4):280285.9URPHY,NIKDED,HRFTK,etal.AtiverepressinfajrhistpatibilityplexlassIgenesinahuanneurblastaelllineJ.JBilhe,1996,271(48):3099230999.10TATAKERJ,ZEFFRA.RegulatedexpressinftheajrhistpatibilityplexlassIgenesJ.PrSExpBiled,1993,203(4):405408.11SATY,SHURAH,AEDAY,etal.Iunlgialevaluatinfpepti