水质-五日生化需氧量BOD5的测定稀释与接种法培训讲学

1、精品文档水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ505-2009.适用范围本方法适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（ BOD5）的测定。本方法的检出限为0.5mg/L,方法的测定下限为2 mg/L ,非稀释法和非稀释接种法的测 定上限为6mg/L ,稀释与接种法的测定上限为 6000mg/L。.术语和定义五日生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是分解有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。条件为（201） C培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，两者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升表示。.方法原理将水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，

2、在（20+） C的暗处培养5d4h或（2+5） d4 先在04 c的暗处培养2d,接着在（20+） C的暗处培养5d,即培养（2+5） d,分别测定培养 前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量。若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L,样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化出力等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质 是，应将驯化后的微生物引入水样中进

3、行接种。 4.试剂和材料分析时，只采用公认的分析纯试剂和蒸储水或同等纯度的水（在全玻璃装置中蒸储的水或去离子水），水中含铜不应高于0.01mg/L,并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。接种液取POLYSEED胶囊1粒溶于装有250ml稀释水的烧杯中。将烧杯置于磁力搅拌器上搅 拌曝气1h。曝气结束，放置0.5h后倾出全部清液，将该清液置于磁力搅拌器上搅拌，此接种 液最多能放置二天。其它获得接种液的途径见如下。未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300mg/L ,总有机碳不大于100 mg/L;含有城镇污水的河水或湖水；污水处理厂的出水；分析含有难降解物质的工业废水时，在其排污口下游适

4、当处取水样作为废水的驯化接 种液。也可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入少量生活污水，使适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量的絮状物时，表明微生物已繁殖，可用作接种液。一般驯化过程需38天。盐溶液磷酸盐缓冲溶液将8.5g磷酸二氢钾（KH 2PO4）、16.6g磷酸氢二钾（K2HP04 3H 2O）、17.7g七水合磷 酸氢二钠（Na2HPO4）和1.7g氯化镂（NH4Cl）溶于约500ml水中，稀释至1000ml并混合均 匀。此缓冲溶液的pH应为7.2。 4.2.2七水合硫酸镁将22.5g的七水合硫酸镁（MgS04 7H2。）溶于水中，稀释至1000

5、ml并混合均匀。氯化钙将27.5g的无水氯化钙（CaCl2）溶于水，稀释至1000ml并混合均匀。六水合氯化铁将0.25g六水合氯化铁（FeC13 6H2O）溶解于水中，稀释至 1000ml并混合均匀。精品文档精品文档以上四种盐溶液在04c可稳定保存6个月。如有沉淀应弃去。稀释水取上述四种盐溶液（4.2.1、4.2.2、4.2.3和4.2.4）各1 ml,加入约1L水中，然后曝气2小时以 上，混合均匀，将此溶液置于 20c下恒温，确保溶解氧浓度不低于 8mg/L。稀释水的BOD 5 值不得超过0.5mg/L。接种稀释水：根据接种液的来源不同，每升稀释水（4.3）中加入适量接种液（4.1）:城市

6、污水和污水处理厂出水加110ml,河水或湖水加10700ml ,将接种液稀释水存放在 （201） C的环境中，当天配置当天使用。接种的稀释水pH值为7.2, BOD5应小于1.5mg/L。盐酸溶液，c（HCL）=0.5mg/L :将40ml浓盐酸溶于水中，稀释至 1000ml。氢氧化钠溶液，c（NaOH）=0.5mol/L :将20克氢氧化钠溶于水中，稀释至 1000ml。亚硫酸钠溶液（0.025mol/L）：将1.575g亚硫酸钠溶于水中，稀释至1000ml。此溶液需现用现配。葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12。6）和谷氨酸（HOOCH-CH 2-CH2-CHNH 2-COOH ,

7、优级纯）在130c干燥1h,各称取150mg溶于水中，在 1000ml容量瓶中稀释至标线。此溶液的BOD5为（210 20） mg/L ,现用现配。该溶液也可少量冷冻保存，融化后立即使用。丙烯基硫月尿硝化抑制剂（1.0g/L）溶解0.2g丙烯基硫月尿于200ml水中，4c保存，可稳定保存14天。乙酸溶液，1 + 1碘化钾溶液（100g/L）,将10g碘化钾溶于水中，稀释至 100ml。淀粉溶液（5g/L）:将0.5g淀粉溶于水中，稀释至 100ml。.仪器和设备培养瓶细口瓶的容量在200ml之间，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口，最好是直 肩的。培养箱：控制20 C。3溶解氧测定仪：YS

8、I-58。.干扰水样的pH若超出6.57.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节pH近于7,但不要超过水木体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的酸或碱进行中和。水样中含有重金属等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或 提高稀释倍数以减少毒物的浓度。含有少量游离氯的水样，一般放置1 2h,游离氯即可消失。对在短时间内不能消失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯，加入的亚硫酸钠溶液的量由下述方法确定。取已中和的水样100ml,加入乙酸溶液10ml、碘化钾溶液1ml,混匀，暗处静置 5分钟。用亚硫酸钠溶液滴定析出的碘至淡黄色，加入 1ml淀粉

9、溶液呈蓝色。再继续滴定至蓝色刚 刚褪去，即为终点，记录所用亚硫酸钠溶液体积，由亚硫酸钠溶液消耗的体积，计算出水样中应加亚硫酸钠溶液的体积。一般污水处理厂的水样，应经过硝化池，含有大量硝化菌，可在每升稀释样品中加入 2ml浓度为1.0g/L的烯丙基硫月尿（ATU） （ C4H8N2S）溶液以去除。从水温较低的水域或富营养的湖泊忠采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将 水样迅速升温至20 c左右，在不使满瓶的情况下，充分振摇，并时时开塞放气，以赶出过饱和的溶解氧。从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20c左右，精品文档精品文档 并充分振摇，使与空气中氧分压近平衡。一些气

10、体和蒸汽如氯、二氧化硫、硫化氢、氨、氟、澳、碘能影响氧电极的测定，从而 使测定含该类物质的水样的 BOD会形成五天前、后溶解氧倒大，此类干扰无法克服。.样品采集与保存样品需充满并密封于瓶中，置于25c保存到进行分析时。一般应在采样后6h之内进行检验。若需远距离转运，在任何情况下贮存皆不得超过24ho试样的制备 7.2.1 pH值调节若样品或稀释后样品pH值不在6-8范围内，应用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节其pH值至6-8。余氯和结合氯的去除若样品中含有少量余氯，一般在采样后放置1-2h,游离氯即可消失。对在短时间内不能消失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯。样品均质化含有

11、大量颗粒物、需要较大稀释信数的样品或经冷冻保存的样品，测定前均需将样品搅拌均匀。样品中有藻类若样品中有大量藻类存在，BOD:的测定结果会偏高。当分析结果精度要求较高时，测定前应用滤孔为1.6科血勺滤膜过滤，检测报告中注明滤膜滤孔的大小。6.2.5含盐量低的样品若样品含盐量低，非稀释样品的电导率小于125忘/cm时，需加入适量相同体积的四种盐溶液，使样品白电导率大于125立/cm。.分析步骤样品的测定取样不经稀释水样（不接种）如遇到溶解氧含量较高，有机物含量较少的地表水时，可直接将其装满于培养瓶中待测。 取样时注意不可摇动水样，取上层清液。稀释水样稀释倍数的确定：根据实践经验，提出下述计算方法，

12、供稀释时参考。地表水（不接种）：由测得的高镒酸盐指数与一定的系数相乘，即求得稀释倍数，见下表。高镒酸盐指数（mg/L ）系数200.5, 0.7, 1.0工业废水：由重铭酸钾法测得的 COD值来确定。稀释倍数见下表。当不能正确的选择稀释 倍数时，一个样品做23个/、同的稀释倍数。BOD5的预估值mg/L稀释倍数6122103052060104012020精品文档精品文档10030050200600100400120020010003000500200060001000若试样中有微生物毒性物质， 应配制几个不同稀释倍数的试样， 选择与稀释倍数无关的结果, 并取其平均值。试样测定结果与稀释倍数的关

13、系确定如下：当分析结果精度要求较高或存在微生物毒性物质时，一个样品要做2个以上不同的稀释倍数，每个试样每个稀释倍数做平行双样同时进行培养。测定培养过程中每瓶试样氧的消耗量，并画出氧消耗量对每一稀释倍数试样中原样品的体积曲线。若此曲线呈线性，则此试样中不含有任何抑制微生物的物质，即样品的测定结果与稀释倍数无关；若曲线仅在低浓度内呈线性，取线性范围内稀释比的试样测定结果计算平均 BOD5 值。将水样振摇均匀，根据稀释倍数确定取样体积。每个样品中加入2ml接种液，用虹吸法加稀释水至瓶颈处待测。测定(待测样品应尽快测定)将电极置于加满稀释水的培养瓶中。开启电极上的搅拌开关，即可测定水样中溶解氧。测定顺

14、序为：空白 一标准样品一样品。待显示的读数稳定后，该读数为水样中的溶解氧值。 测定完毕，旋紧培养瓶塞，确保瓶口有封瓶水，盖上瓶盖。培养将培养瓶放于培养箱中， 并在暗中放置5天。达到需要培养的5天时间时，取出培养瓶。5天后溶解氧测定测定剩余溶解氧值，测定顺序同8.1.2空白试验在培养瓶中加入2ml接种液，加稀释水满瓶后待测。本试验同样品同时进行，其 BOD5 不能大于1.5mg/L。.结果计算被测定溶液若满足以下条件，则能获得可靠的测定结果。培养5天后：剩余 DO 2mg/L ;消耗 DO2mg/L。若不能满足以上条件，一般应舍掉该组结果。9.2计算不经稀释接种直接培养的水样BOD5 ( mg/

15、L) =6162式中：C-水样在培养前的溶解氧浓度，mg/L ;精品文档精品文档 TOC o 1-5 h z C2-水样经5天培养后，剩余溶解氧浓度，mg/Lo经稀释接种后培养的水样式中：Bi-稀释水在培养前的溶解氧，mg/L;B2-稀释水在培养后的溶解氧，mg/L;fi-稀释水在培养液中所占比例；f2-水样在培养液中所占比例。若有几种稀释比所得数据皆符合9.1所要求的条件，则几种稀释比所得结果皆有效，以其平均值表示检测结果。.质量保证和质量控制仪器设备测定要在仪器的有效鉴定周期内进行，以保证检出限、灵敏度、定量测定范围满足方法要求。定期进行期间核查报告，以保证测量结果的准确度、精密度等指标符

16、合计量部门要求。实验环境以上过程须在恒温状态下完成，实验室室内温度应控制在201C范围内。方法检出限在方法正式应用前要按照 环境监测分析方法标准制订技术导则（HJ/T168）中8.2.1的规定进行方法捡出限的测定，测定值不能大于方法给定的值。空白实验空白样品分试剂空白和全程空白，全程空白样品的浓度测定值不能大于方法检出限，而且平行双份测定值的相对差值不应大于50%,每批样品最少要有2个空白样。平行样每批样品要有10%的平行样测定结果， 其相对偏差的计算参照 地表水和污水监测技术 规范（HJ/T91-2002） 10.5.2的公式，控制指标式样品含量和基体不同一般为10%30%。标准样品在两个取

17、好标准样品白培养瓶中各加入2ml接种液，加稀释水满瓶后测定。得到 BOD5应在该标准样品批号范围之内，否则，应检查接种稀释水是否适用以及并应检查分析人员的技术。本试验空白与试验样品同时进行。数据处理数据的整理和修约及异常值的判断和处理等按照水和废水监测分析方法（第四版） 的相关内容进行。.精密度和准确度非稀释法实验室间的重现性标准偏差为0.100.22mg/L ,再现性标准偏差为0.260.85mg/L。稀释法和稀释接种法的对比测定结果重现性标准偏差为11mg/L ,再现性标准偏差为3.722mg/L。.注意事项水中有机物的生物氧化过程，可分为二个阶段。第一阶段为有机物中的碳和氢氧化生 成二氧化碳和水，此阶段称为碳化阶段。第二阶段为含氮物质及部分氨氧化为亚硝酸盐及硝 酸盐，称为硝化阶段。一般测定水样BOD5时，硝化作用很不显著或根本不发生硝化作用。玻璃器皿（培养瓶）应彻底洗净。先用自来水和蒸储水清洗三遍，再将其放入超声波 清洗器中彻底清洗1h。精品文档精品文档在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于2mg/L时,计算结果时，应取其平均值。若剩余的溶解氧小于1 mg/L,甚至为零时，应加大稀释比。溶解氧消耗量