ELISA2-乙肝两对半-课件

1、ELISA2-乙肝两对半-PPT课件ELISA2-乙肝两对半-PPT课件【目的要求】1.进一步熟悉酶标仪及洗板机；2.掌握乙肝两对半的检测。【目的要求】1.进一步熟悉酶标仪及洗板机；【原理】项 目检 测 原 理表面抗原HBsAg双抗体夹心法表面抗体抗-HBs双抗原夹心法e抗原HBeAg双抗体夹心法抗e抗体抗-HBe竞争抑制法核心抗体抗-HBc竞争抑制法【原理】项 目检 测 原 理表面抗原HBsAg双抗【器材】BIORAD680型自动化酶免分析仪、BIORAD全自动酶标洗板机、微量加样器、吸头等 【器材】BIORAD680型自动化酶免分析仪、BIORAD全【试剂】HBsAgELISA试剂盒HBs

2、AbELISA试剂盒HBeAgELISA试剂盒HBeAbELISA试剂盒HbcAbELISA试剂盒【试剂】HBsAgELISA试剂盒【标本】待测血清 【操作步骤】【标本】待测血清 【操作步骤】准备：试剂盒各组份在37平衡30min；配洗涤液：按1：20将20洗液稀释；加样品：加入待测样品或阳性、阴性对照75ul/孔，轻轻振荡混匀；孵育：贴上封膜，37 反应60min;加酶结合物： 每孔加入50ul/孔表面抗原检测(夹心法)准备：试剂盒各组份在37平衡30min；表面抗原检测(夹心孵育：贴上封膜，37 反应30min;洗板：洗板机5次，最后一次尽量扣干；显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B

3、50ul，混匀，贴上封膜，37反应30min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时终止：加终止液50ul；判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)孵育：贴上封膜，37 反应30min;结果判断及解释： COV=2.1N阴性对照A0.10，阳性对照A1.0，否则实验无效。SCOV 阳性SCOV 阴性结果判断及解释： 准备：试剂盒各组份在37平衡30min；配洗涤液：按1：20将20洗液稀释；加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴性孵育：贴上封膜，37 反应30min;洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；表面抗体检测(夹心法)准备：

4、试剂盒各组份在37平衡30min；表面抗体检测(夹心显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时终止：加终止液50ul；判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜结果判断及解释：COV=2.1N阴性对照A0.10，阳性对照A1.0，否则实验无效。 SCOV 阳性SCOV 阴性结果判断及解释：准备：试剂盒各组份在37平衡30min；配洗涤液：按1：20将20洗液稀释；加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴性孵育：贴上封膜，37 反应3

5、0min;洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；e抗原检测(夹心法)准备：试剂盒各组份在37平衡30min；e抗原检测(夹心法显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时终止：加终止液50ul；判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜结果判断及解释：COV=2.1N阴性对照A0.10，阳性对照A1.0，否则实验无效。 SCOV 阳性SCOV 阴性结果判断及解释：e抗体检测(竞争抑制法)准备：试剂盒各组

6、份在37平衡30min；配洗涤液：按1：20将20洗液稀释；加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴性孵育：贴上封膜，37 反应30min;洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；e抗体检测(竞争抑制法)准备：试剂盒各组份在37平衡30m显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时终止：加终止液50ul；判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜结果判断：COV=0.5N阴性对照A1.0 ，阳性对照A0.

7、5 ，否则实验无效。 SCOV 阳性SCOV 阴性结果判断：准备：试剂盒各组份在37平衡30min；配洗涤液：按1：20将20洗液稀释；加样品及酶标：各50ul，同时设阳性、阴性（样品作1：30稀释）孵育：贴上封膜，37 反应30min;洗板：洗板机5次，每次洗液在孔中滞留时间10-15s，并注满反应微孔；c抗体检测(竞争抑制法)准备：试剂盒各组份在37平衡30min；c抗体检测(竞争抑显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜，37反应15min(避光)； 注：显色从加入第一滴显色液B开始计时终止：加终止液50ul；判读：终止反应后10min内完成。(450nm处测定吸光度)显色：先加显色液A50ul，再加入显色液B50ul，贴上封膜结果判断：COV=0.5N阴性对照A 1。0 ，阳性对照A 0.50 ，否则实验无效。SCOV 阳性SCOV 阴性结果判断：1.不同品种及批号试剂组份请勿混用；2.试剂从2-8条件下取出，先在室温平衡1h；3.最好用微量移液器加各种组份；4.每次手工加样，应更换吸头；5.加样时尽量避免反应微孔中产生气泡；6.封板膜不能重复使用；【注意事项】1.不同品种及批号试剂组份请勿混用；【注意事项】7.洗液如有结晶形成建议放置37充分溶解，再稀释； 8.洗板：(洗板机)1)每次使用前、