无菌操作技术在微生物四项基本实验技术中的应用和意义

1、无菌操作技术主要是指在微生物试验工作中，把握或防止各类微生物 的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、 无菌试验器材及无菌操作方法等。微生物学四项根本试验技术是指显微镜技术、无菌操作技术、纯种分 离技术和纯种培育技术。微生物学试验技术所用玻璃器皿。不但要像化学试验那样要求清洁， 而且还要无菌玻璃器皿、接种工具、材料要灭菌 3工具吸管、塑料吸嘴、玻璃刮棒、染色涂片等3来苏尔 液中，消毒后再清洗。有微生物污染的废物要集中处理，不能污染环境。 无菌操作一般是在无菌环境条件下，使用无菌器材进展检验或试验过程中，防止微生物污染和干扰的一种常规操作方法。无菌操作的目的，一 是保持待

2、检物品不被环境中微生物所污染；二是防止被检微生物在操作中 污染环境和感染操作人员，因而无菌操作在肯定意义上讲又是安全操作。 无菌操作技术在微生物四项根本试验技术中的应用和意义从以下四个方面做简要的论述：一、在显微镜技术中的应用和意义微生物个体微小，必需借助显微镜才能观看到，因此在微生物学的各项试验技术中，显微镜就成为争辩者不行缺少的工具。显微镜的种类很多， 依据其构造，一般分为光学显微镜和非光学显微镜两大类，在试验室观看微生物形态常用的显微镜，以光学显微镜最为常见。在显微镜技术中必不行少的是涂片、染色等技术，无论是在制片还是染色等过程中，防止杂菌的污染即无菌操作都是格外重要的，一旦被观看的玻片

3、遭到杂菌污染，将使观看结果受到严峻偏差和影响。因此在操作过程中为保证无菌操作应留意：在试验室观看平板培育 物时，一般不宜开盖观看；检验结果，可以开盖检查。如取菌作涂片染色 或移植培育时。培育皿上下盖可适度开缝，但不准完全揭开；涂片染色 时应使用夹子夹持玻片，切勿用手直接拿玻片，以防感染细菌；用过的 玻片应放置消毒液中或直接煮沸消毒，冲洗液也应煮沸或消毒处理后再倒 掉以免污染环境。二、无菌操作技术在微生物试验中，菌种的移值、接种和分别工作等，都要排解杂菌的 污染，才能获得纯的符合要求的微生物纯培育体。为此，除严格按无菌操 作进展外，尚需要有一个无杂菌污染的工作环境。通常，可在酒精灯旁进 (接种箱

4、)或超净工作台；工作量 大的使用无菌室(接种室)；要求严格的可在无菌室内再结合使用超净工作台。无菌操作技术包括无菌环境、无菌器材和无菌操作三个方面。无菌环境只是相对而言的，是指人们利用物理的方法或化学的方法，在某一可把握空间内使微生物数量降低至最低限度，接近于无菌的一种空 间。而无菌室和无菌柜、超净工作台就可做到这样的空间。无菌室是最常 用的无菌环境之一。无菌室的建筑设计应考虑布局合理，使用便利，操作 安全以及造价适宜等条件。无菌柜的优点是简洁轻松体积小，易于灭菌消 毒，安全并可移动，但操作不便，适用于一般接种操作，尤其适用于致病 菌检验中阳性菌的接种、划线等操作。超净工作台目前较常用，它是通

5、过 通入经超细过滤的无菌空气以维持其无菌状态的。无菌器材是无菌技术的主要组成局部，微生物检验和试验用器材可分为两类：器材灭菌：但凡检验中使用的器材，能灭菌处理的必需灭菌， 如玻璃器皿包括注射器、吸管、滴管、三角瓶、试管等培育基、稀释剂、无菌衣、口罩、胶管、乳胶头。金属器材如外科刀、剪、镊子、针头等，凡能包裹的，应先用包装纸包裹后，再进展灭菌。器材消毒：凡检验用器材无法灭菌处理的，使用前必需经消毒处理，例如无菌室内的凳、 试管架、天平、工作服等，这些虽然无法灭菌，但是可以消毒。消毒可用化学药品熏蒸、喷洒或擦拭。上述的无菌环境条件只是相对而言，实际上不行能保持环境确实定无 菌。因此关键是要严格进展

6、正确的无菌操作。三、在纯种分别技术中的应用和意义在微生物学中，为了争辩某种微生物的特性，必需把它们从混杂的微 生物群体中分别出来，从而获得某一菌株的纯培育物，这种获得只含有某 一种或某一株微生物纯培育的过程，成为微生物的分别与纯化。为了获得某种微生物的纯培育物，一般是依据该微生物的特性，设计 适宜的培育基和培育条件，以利于该微生物的生长生殖，或参加某些抑制 因素，造成只利于此菌生长，而不利于其他菌生长的环境条件，从而淘汰 其他杂菌。然后再通过各种稀释法，使所需的菌在固体培育基上形成单菌 落。固然，从微生物群体中经分别后生长在平板上的单个菌落，并不能保 证肯定是纯培育，还要经过一系列的分别、纯化

7、和鉴定，才能获得所需要 的纯菌株。常用的微生物分别纯化的方法有：稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分别法、稀释摇管法、液体培育基分别法、单细胞分别法、 选择培育基法等。其中前三种方法最为常用，不需要特别的仪器设备，分 离纯化效果好。四、在纯种培育技术中的应用和意义在微生物学试验技术中，常需要用接种环把微生物纯培育物，由一个器皿移接到另一个培育容器中进展培育。由于四周环境主要是空气中， 存在着大量肉眼无法觉察的各种污染物，只要一翻开器皿，就可能会引起器皿内的培育基或培育物，被环境中其他微生物所污染。因此，微生物菌种移接的全部操作，均应在无菌环境下进展严格的无菌操作。将微生物的培育物或含有

8、微生物及可疑含有微生物的样品移植到培育基上的操作技术称之为接种。接种是微生物试验及争辩中的一项最根本的操作技术。无论微生物的分别、培育、纯化或鉴定以及有关微生物的形态、 生理的试验及观看争辩都必需进展接种，接种的关键要严格的无菌操作， 如操作不慎引起污染则试验结果就不行靠，影响下一步工作的进展。因此无菌区，即接种时，管口和瓶口始终保持在火焰如酒精灯焰旁边，进展娴熟地移接种操作，以便保证微生物的纯种培育。棉塞应当始终夹在手中，如掉落应更换无菌棉塞 如不慎使棉塞触及火焰着火，切勿用口吹， 应在刚着火时快速塞入试管，因管内氧气缺乏很快熄灭，假设棉塞外端着火， 则可用手捏灭，或废弃踩火后更换无菌棉塞。

9、接种液体培育物时应特别留意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染，如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净，凡吸过菌液的吸管或滴管应马上放入有消毒液的容器内。此外，挑取和移接微生物纯培育物用的接种环及接种针，应承受易于快速加热和冷却的镍铬合金等金属制备，使用时用火焰灼烧灭菌；转移液体纯培育物时，应承受无菌吸管或无菌移液枪。接种和培育过程中必需保证不被其他微生物污染，因此，除工作环境要求尽 必需随时留意保持微生物纯培育物的纯洁性，防止其他微生物杂菌的混入；在进展分别、转接及培育微生物纯培育物事，要承受严格的无菌操作技术，防止被其他微生物所污染。实际上，人工制造的无菌环境条件只是相对而言，不行能保证环境的 确定无菌。因此，在试验过程中必需