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文档简介
1、.-专题1 传统发酵技术的应用课题1 果酒和果醋的制作代类型:同化合成代自养、异养异化分解代需氧、厌氧、兼性厌氧酵母菌:单细胞真菌;乳白色;表面光滑;含糖较高;偏酸环境4.0-5.8;无性生殖出芽;20最适合其繁殖;酒精发酵时温度控制在18-25发酵:通过微生物或动植物细胞的培养大量生产各种代产物的过程有氧发酵&无氧发酵醋酸菌:原核细菌;分裂生殖;异养好氧型当氧气和糖源都充足时醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛;醋酸菌的最适生长温度为30-35充气口:醋酸发酵时连接充气泵,充入无菌空气,制酒时关闭酿酒前期可通入少量空气排气口:酒精发酵时排出CO2,平衡容器外压力
2、长导管:防止微生物污染出料口:用来取样,监测菌体数量或酒精、醋酸浓度,排放废料材料的选择与处理:选择新鲜的葡萄,榨汁前先将葡萄冲洗洗去浮尘,不能反复冲洗,并除去枝梗条件:葡萄汁装入后要留有1/3的空间;葡萄酒:温度18-25;时间10-12d;果醋:30-35,7-8d充气应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗?为什么?先冲洗葡萄,避免除去枝梗时葡萄破损增加被杂菌污染的几率制葡萄酒时,为什么要将温度控制在18-25?制葡萄醋时,为什么要将温度控制在30-35?温度是酵母菌与醋酸菌生长和发酵的重要条件,以上是生长的最适温度制葡萄醋时,为什么要适时通过充气口充气?醋酸菌是好氧菌,将酒精变为醋酸时需要醋酸菌的
3、参与,因此需要充气课题2腐乳的制作多种微生物参与了腐乳的发酵,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中其主要作用的是毛霉。毛霉:丝状真菌,异养需氧,分布广泛,常见于土壤,适宜发酵温度:15-18;孢子生殖;产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸菌丝:直立菌丝气生菌丝、产生孢子生殖;匍匐菌丝基菌丝:吸收营养实验设计:常温一般6个月;15-18不适于细菌、酵母菌和曲霉生长而适于毛霉生长;豆腐块上的毛霉来自空气中的毛霉孢子加盐目的:析出豆腐中的水分,使豆腐块变硬,在后期制作过程中不会过早酥烂;抑制微生物生长,避免豆腐块腐败变质。接近瓶口表面的盐要铺厚一些,否
4、那么容易被杂菌污染卤汤:由酒以及各种香辛料配制而成;加酒可以抑制微生物的生长,并且使腐乳具有独特的香味;香辛料可以调制腐乳的风味,也具有防腐杀菌的作用影响腐乳品质的主要因素:菌种和杂菌;温度过低或过高会影响毛霉的生长和酶的作用,从而影响发酵进程和发酵质量;发酵时间过短发酵不充分;过长豆腐软化不宜成型,影响腐乳口味;调味品用盐量:调味、杀菌、脱水防止杂菌污染的方法:玻璃瓶洗刷干净后要用沸水消毒;装瓶时操作小心,整齐的摆放好豆腐、加入卤汤后要用胶条将瓶口密封最好在封瓶时将瓶口通过酒精灯的火焰防止污染;加盐腌制、卤汤中加酒精、香辛料豆腐长白毛是怎么回事?毛霉的直立菌丝为什么要撒很多盐将长毛的豆腐腌起
5、来?高浓度盐水中细菌脱水死亡平常吃的豆腐哪种适合用来做腐乳,为什么?含水量适中70%左右;过高不宜成型;过低不适宜毛霉生存豆腐口感不好,豆腐较硬的原因是什么?含水量不当,影响毛霉菌丝深入程度;发酵时间短,蛋白质未完全水解,加盐后脱水蛋白质变性;菌种不纯,变异,老化、调味品加入量不足专题2微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养微生物:病毒、原核生物界细菌、放线菌、真菌、原生生物;特点:结构简单、个体微小、分类水平低细菌:基本结构:细胞壁、细胞膜、细胞质、拟核;特殊结构:荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢放线菌:单细胞原核;分立状菌丝;孢子生殖;大多数抗生素由放线菌产生菌落:由单个或多个细胞在固体培养基
6、上繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体鉴定菌种的必要一句研究和应用微生物的前提:防止杂菌入侵,获得纯净的培养物为培养的微生物提供合适的营养和环境条件;确保无处不在的其他微生物无法混入琼脂:从红藻中提取的多糖,在98以上熔化,在44一下凝固,在常规培养条件下呈现固态培养基一般成分:水、碳源提供C、氮源提供N、无机盐培养基条件:营养物质、pH、特殊营养物质、氧气培养基用途:液体:增菌不能形成菌落;固体:分离纯化、鉴定;半固体:动力检测、保种消毒:用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或部的部分微生物不包括芽孢和孢子;煮沸消毒法、巴氏消毒法、用化学药剂进行消毒、紫外线消毒灭菌:使用强烈的理化因素杀死物体外
7、所有的微生物,包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌实验程序:器具的灭菌、培养基的配置、培养基的灭菌、倒平板、微生物的接种、恒温箱中培养、菌种的保存制备牛肉膏蛋白胨固体培养基:计算、称量、熔化、灭菌、倒平板、无菌检查37温室中培养24-48h纯化大肠杆菌常用方法:平板划线法、稀释涂布平板法;核心:防止杂菌污染、保证培养物纯度平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面,在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的菌落稀释涂布平板法:将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养在稀释度足
8、够高的菌液里,聚集在一起的微生物被分散成单个细胞从而能在培养基表面形成单个菌落菌种的保存:频繁使用的菌种临时保藏,4斜面培养基:增大接种面积;长期保存甘油管藏,-20低温、干燥、隔绝空气无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来生物污染外,还有什么目的?还能有效避免操作者自身被微生物感染培养基灭菌后,需要冷却到50左右才能用来倒平板,用什么办法来估计培养基的温度?用手触摸,不烫手即可为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?灼烧灭菌,防止瓶口微生物污染培养基平板冷凝后,为什么要将平板倒置?避免培养基表面的水过快的挥发;防止皿盖上水珠落入培养基造成污染在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖和皿底
9、的部位,这个平板还能用来培养微生物么?为什么?不能,因为空气中微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生在灼烧接种环后,为什么要等其冷却后再进行划线?避免接种环温度太高,杀死菌种在做第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?划线后,线条上末端细菌数目比线条起始处少,每次从上次末端划线能使细菌的数目随着划线次数增加而逐步减少,最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落涂布平板时取菌液应如何进行无菌操作?酒精灯与培养皿的距离要合适;吸管头不要接触任何其他物体;吸管要在酒精灯火焰周围比较无土栽培技术、植物组织培养技术、微生物培养技术的异同相同:都需要为培养物提供充足的营养不同:无土栽培
10、不需要无菌条件,而其他两个需要课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数筛选菌株原理:在寻找目的菌株时,要根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找;微生物的筛选,要人为提供有利于目的菌株生长的条件营养、温度、pH等,同时抑制或阻止其他微生物生长选择培养基:允许特定的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基稀释涂布平板法统计数目:通过统计平板上的菌落数推测出样品约有多少活菌;一般选择菌落数30-300的平板进行计数;统计的菌落数往往比实际活菌数少原因:当多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落显微镜直接计数缺点:不能区分死活;不适于对运动细菌的计数;需要相对高的细菌浓度;个体
11、小的细菌在显微镜下难以观察公式:每克样品中的菌株数=某一稀释度下平板上生长的平均菌落数涂布平板时所用的稀释液体积默认0.1mL稀释倍数设置对照目的:排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度土壤取样:土壤有“微生物的天然培养基之称,微生物数量最大,种类最多,微生物70-90%为细菌;细菌适宜在接近中性的潮湿土壤中生长,绝大多数分布在距地表3-8cm的土壤层取样操作:从肥沃、湿润的土壤中取样,先铲去表层土3cm左右再取样,将样品装入事先准备好的信封中样品的稀释:通常保证获得菌落数为30-300,适于计数的平板;不同微生物在土壤中含量不同,因此要采用不同的稀释度细菌:104、10
12、5、106;放线菌:103、104、105;真菌:102、103、104微生物的培养与观察:不同微生物需要不同的培养温度和时间细菌:30-37、1-2d;放线菌:25-28、5-7d;霉菌:25-28、3-4d;每隔24h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目菌落特征:形状、大小、隆起程度、颜色无菌操作:取土样用的小铁铲和盛土样用的信封在使用前都需要灭菌;应在火焰旁称取土壤,在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中,塞好棉塞;在喜事土壤溶液的过程中,每一步都需要在火焰旁边操作做好标记:注明培养基种类、培养日期、平板上培养样品的稀释度进一步鉴
13、定分离菌种:细菌合成脲酶将尿素分解成氨,使pH升高;加入酚红指示剂,培养某种细菌后如pH升高指示剂将变红课题3 分解纤维素的微生物的分离纤维素:是地球上含量最丰富的多糖类物质,植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物;木材、作物秸秆等也富含纤维素;水溶性:羧甲基纤维素;不溶于水:微晶纤维素纤维素酶:复合酶,C1酶、Cx酶纤维素纤维二糖;葡萄糖苷酶纤维二糖葡萄糖纤维素分解酶的筛选:刚果红染色法刚果红可以和像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应;培养基中加入刚果红,会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,这样就可以通过
14、是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌选择培养的目的:增加纤维素分解菌的浓度,以确保能够从样品中分离得到所需微生物实验流程:土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解酶的培养基上挑选产生透明圈的菌落本实验流程与课题2中的实验流程有那些异同?多了“选择培养为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌?生物与环境存在互相依存关系,在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对更高,因此在这种土壤中获得目的微生物的几率高于普通环境将滤纸埋在土壤中有什么作用?滤纸应该埋进多深?滤纸能使纤维素分解菌相对聚集,实际是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境;10cm左右的土壤先培养微生物再加入刚果红与在倒平板时就
15、加入刚果红的优缺点?方法一:优点:显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用缺点:操作繁琐;加入CR溶液会使菌落之间发生混杂方法二:优点:操作简便,不存在菌落混杂问题缺点:培养基中含有淀粉类物质,可能使产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应;有些微生物具有降解色素的能力,它们在长时间培养过程中会降解刚果红,形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分为什么选择培养基能够“浓缩所需的微生物?可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖,那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制菌种分解尿素的细菌纤维素分解菌条件尿素作唯一氮源纤维素作碳源鉴定方法现象培养基中加入酚红指示剂变红培养基中应用CR染色法出现
16、透明圈鉴定原理能合成脲酶,把尿素分解声称氨使pH升高,加入酚红指示剂变红色能产生纤维素酶,将纤维素分解成二糖或葡萄糖,使纤维素-刚果红复合物降解而出现透明圈步骤土壤取样制备培养基梯度稀释涂布平板培养观察土壤取样选择培养梯度稀释CR染色挑取菌落进一步培养专题3植物的组织培养技术课题1 菊花的组织培养植物的繁殖:种子繁殖、营养繁殖扦插、嫁接、压条、植物组织培养容易进行无性繁殖的职务一般也容易进行组织培养植物细胞表现全能性的条件:离体,无菌,营养,激素细胞分化:在植物的个体发育过程中,细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异,形成这些差异的过程叫做细胞分化愈伤组织:愈伤组织的细胞排列疏松而无
17、规那么,是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞脱分化:由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程也叫去分化再分化:脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或者芽等器官,这个过程叫再分化再分化形成的试管苗,移植到地里,可以发育成完整的植物体影响植物组织培养的因素:植物材料的选择,适宜的培养基,植物激素,pH,温度,光照,无菌技术材料:植物材料的选择直接关系到实验的成败;同一种植物材料的年龄、保存时间长短等也会影响实验结果;菊花的组织培养一般选择未开花植株茎上部新萌生的侧枝MS培养基成分:20多种大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg;微量元素:Zn、Fe、B、Cu、Mo、Mn、Co
18、、I;有机物:甘氨酸、维生素、蔗糖等;植物激素常需要培养基作用:大量元素、微量元素:提供植物细胞生活所必需的无机盐;蔗糖:提供碳源同时能够维持细胞渗透压;甘氨酸、维生素等:主要是为了满足离体植物细胞在正常代途径收到影响后所产生的特殊营养需求与微生物培养基的区别:微生物培养基以有机营养为主;MS培养基提供大量无机营养,无机盐混合物包括大量元素和微量元素两大类植物激素:浓度具有两重性顺序:先生后分:有利于细胞分裂、不分化;先分后生:既分裂也分化;同时:分化频率提高;比例:生根分芽其他条件:pH=5.8;T=18-22;每日用日光灯照射12h;制备MS固体培养基:配置各种母液将各种成分按照配方比例配
19、制成浓缩液,计算用量加水稀释;配置培养基加入琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物、植物激素的母液;菊花茎段组织培养可以不必添加植物激素;灭菌培养基连同其他器械高压蒸汽灭菌外植体的消毒:生长旺盛的嫩枝流水冲洗刷洗,冲洗20min左右无菌吸水纸吸干表面水分70%酒精中摇动2-3次,持续6-7s无菌水清洗无菌吸水纸吸干表面水分0.1%HgCl2aq浸泡1-2min无菌水清洗至少3次接种:插入外植体时形态学上端朝上,每个锥形瓶接种6-8个外植体培养:无菌箱中,定期消毒;18-22,每日用日光灯照射12h移栽:移栽前先打开培养瓶的封口膜,让其在培养间生长几日,然后用流水清洗根部培养基,将幼苗移植到消过
20、毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间,长壮后再移栽到土壤中实验中的无菌技术:培养基及接种用具彻底灭菌;外植体的消毒;接种的无菌操作;无菌箱中的培养;移栽到消过毒的环境中一段时间在植物组织培养的过程中,为什么要进行一系列的消毒,灭菌,并且要求无菌操作?植物材料体积小,抗性差,对培养条件要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于微生物的生长,而培养物一旦受到微生物的污染就会导致实验前功尽弃。因此要进行严格的无菌操作选取菊花茎段为什么要选取生长旺盛的嫩枝?外植体的生殖状态是进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好,容易诱导脱分化和再分化课题2月季的花药培养单倍体育种:采用花药培养的方法
21、,使花粉粒发育为单倍体植株,再经过人工诱导使染色体数目加倍,重新恢复到正常植株的染色体数目。这样的植株不仅能够正常生殖,而且每对染色体上的成对的基因都是纯合的,自交产生的后代不会产生性状分离;单倍体育种不仅缩短了育种周期,也为新品种的培育开辟了新途径被子植物的花粉发育:1个花粉母细胞减数分裂4个小孢子四分体时期单核期双核期有丝分裂4个营养细胞+4个生殖细胞有丝分裂8个精子花粉粒:二核花粉粒:成熟时只含花粉管细胞核、生殖细胞核,精子在花粉管中形成;三核花粉粒:成熟前形成镜子,成熟时含有一个营养核和两个精子产生花粉植株的途径:花药中的花粉脱分化愈伤组织/胚状体再分化丛芽诱导生根移栽;这两种途径之间
22、没有绝对的界限,主要取决于培养基中激素的种类与浓度配比影响花药培养的因素:主要因素:材料的选择、培养基的组成;其他因素:亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度材料的选择:花期早期初花期诱导成功率高;单核期对离体刺激敏感,诱导成功率高单核期前质地幼嫩,极易破碎;单核期以后花瓣松动,微生物可能入侵花药,消毒困难;花蕾完全未开放;通过镜检确定划分是否处于适宜发育期最常用醋酸洋红法,但某些花粉的细胞核不易着色;焙花青铬钒法能将花粉细胞染成蓝黑色材料的消毒:花蕾用70%酒精浸泡30s取出,无菌水清洗无菌吸水纸吸干0.1%HgCl2溶液或1%Ca(CL0)2或饱和漂白粉溶液2-4min取出,无菌水
23、清洗接种和培养:无菌条件下去除萼片和花瓣,立即将花药接种到培养基上剥离花药时要尽量不损伤花药,否那么接种后容易从受伤部位产生愈伤组织;彻底去除花丝与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成;每瓶接种7-10个,培养温度25左右,不需要光照幼小植株形成后需要光照;20-30d后花药开裂楚愈伤组织或胚状体愈伤组织:及时转移到分化培养基;胚状体:及时将幼小植株分开,分别移植到新的培养基上;由于营养和生殖核融合,染色体数目常会发生变化,需要对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难?花瓣松动,微生物就可能侵入到花药,给材料的消毒带来困难完全未开放的花蕾不含微生物植物组织
24、培养技术和花药培养技术有何异同?相同:培养基的配制方法、无菌技术、接种操作等不同:花药选材,裂开后释放的愈伤组织、胚状体;更换培养基;培养基的配方等专题4酶的研究与应用课题1 果胶酶在果汁生产中的作用果胶:是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一,是由半乳糖醛酸聚合而成的一种高分子化合物,不溶于水影响出汁率,使果汁浑浊果胶酶:能分解果胶、瓦解细胞壁与胞间层,使榨取果汁变得容易;果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸,使浑浊的果汁变得澄清;果胶酶并不特指某一种酶,而是分解果胶的一类酶的总称包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等;来源于植物、霉菌、细菌、酵母菌酶的活性:酶催化一定化学反应的能力可以用一
25、定条件下催化反应的反应速度表示,即单位时间单位体积中反应物减少量或产物的增加量;影响因素:温度、pH、酶的抑制剂等为什么混合苹果泥和果胶酶之前,要将果泥和果胶酶分别装在不同的试管中恒温处理?可以保证底物和酶在混合时温度相同,避免了果泥和果胶酶混合时影响混合物温度,从而影响果胶酶活性的问题在探究温度或pH对酶活性的影响时,是否需要设置对照?应该如何设置?为什么?需要。不同温度、pH梯度之间可作为对照,称为相互对照为什么要将温度或pH作为自变量?有什么不变量?苹果泥用量、果胶酶用量、反应时间、过滤时间等;只有保证一个自变量,才能说明问题为什么能够通过测定滤出的苹果汁的体积大小来判断果胶酶活性的高低
26、?果胶酶将果胶分解为小分子物质,小分子物质可以通过滤纸,因此苹果汁的体积大小反映了果胶酶的催化分解果胶的能力,不同温度、pH下,果胶酶活性越大,苹果汁的体积会越大当探究温度对果胶酶活性的影响时,哪个因素是自变量,哪些因素应该保持不变?自变量:温度;不变量:pH、苹果泥的量、反应时间、过滤时间、果胶酶的浓度与用量大规模生产与实验室制备有什么不同点?工业制法有两次瞬间高温灭菌;酶处理的时间相对较长;有离心分离步骤和浓缩步骤课题3 酵母细胞的固定化葡萄糖异构酶:能将葡萄糖转化为果糖,稳定性好,可持续发挥作用可用于高果糖浆的生产反应柱:将酶固定在颗粒状载体上,再将这些酶颗粒装到一个反应柱;柱子底端装着
27、分布着许多小孔的筛板酶颗粒无法通过筛板上的小孔,而反映溶液却可以自由出入;原理:反应物溶液从上端流入,使反应物溶液通过反应柱,与固定化酶接触,得到产物,从反应柱的下端流出;能大大降低生产成本与提高果糖的质量和产量固定方法:固定化酶:化学结合法、物理吸附法;固定化细胞:包埋法原因:体积大的细胞难以被吸附或结合,体积小的酶容易从包埋材料中漏出固定化酶与固定化细胞的联系与区别:联系:应用相同,都能催化某些反应;区别:固定化细胞技术操作容易,成本低,容易回收;固定化细胞对酶活性影响更小;固定化细胞固定的是一系列酶,可以连续催化酶反应;由于大分子难以通过细胞膜,因此固定化细胞的应用有一些限制包埋法:将微
28、生物细胞均匀的包埋在不溶于水的多孔性载体中常用载体:明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺酵母细胞的活化:缺水状态下,微生物处于休眠状态;活化就是处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态固定酵母细胞步骤:酵母细胞的活化;配置0.05mol/LCaCl2溶液使胶体聚沉;配置海藻酸钠溶液影响实验成败的关键步骤;小火间断加热;海藻酸钠溶液与酵母细胞混合先将海藻酸钠溶液冷却至室温;固定化酵母细胞海藻酸钠浓度对实验的影响:浓度过高将很难形成凝胶珠;浓度过低形成的凝胶珠包埋酵母细胞数目少颜色过浅;影响实验效果用固定化酵母细胞发酵:将凝胶珠用蒸馏水冲洗2-3次;向葡萄糖溶液中加入固定酵母细胞,置于
29、25下发酵24h类型优点不足直接使用酶催化效率高,低能耗低污染对环境条件非常敏感,容易失活;溶液中的酶很难回收,不能被再次利用,生产成本高;反应后酶混在产物中可能影响产品质量固定化酶酶既可以与反应物接触又能与产物分离,同时固定在载体上的酶还可以被反复利用一种酶只能催化一种化学反应,而在生产实践中很多产物的形是通过一系列酶促反应才能得到的固定化细胞成本低,操作容易固定后的细胞与反应物不容易接触,可能导致反应效果下降专题5DNA和蛋白质技术课题1 DNA的粗提取与鉴定DNA粗提取原理:利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分DNA的溶解性:当NaCl溶
30、液浓度为2mol/L时DNA溶解度最大,浓度为0.14mol/L时DNA溶解度最小,利用这一原理可以使DNA在盐溶液中溶解或析出;DNA不溶于酒精,但细胞中某些蛋白质溶于酒精,利用这一原理可以将DNA与蛋白质进一步分离DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性:蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没有影响;大多数蛋白质不能忍受60-80的高温,但DNA在80以上才会变性;洗涤剂能瓦解细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响选取实验材料:菜花、鸡血、洋葱细胞DNA含量较高DNA的溶解和释放:动物细胞:向鸡血细胞中加入蒸馏水血液中加入柠檬酸钠防止凝固,同时用玻璃棒交办,过滤后收集滤液搅拌应快速,加速血细胞破裂
31、;植物细胞:切碎,加入洗涤剂和实验,进行充分搅拌和研磨,过滤收集研磨液DNA的纯化:加入NaCl调节浓度为2mol/L,过滤除去不溶的杂质,加蒸馏水调节NaCl溶液溶解DNA;在滤液中加入嫩肉粉,反应10-15min;将滤液放在60-75恒温水浴箱中保温10-15minDNA的析出:加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液,静置2-3min;用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水分加入酒精和搅拌时的动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀DNA的鉴定:沸水浴条件下,DNA与二苯胺反应呈现蓝色;取2支20mL试管各加入2mol/L Na
32、Cl溶液5mL,将丝状物放入其中一个试管中,搅拌使其溶解,各加入4mL二苯胺试剂,混匀后将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后,比较溶液颜色变化二苯胺试剂要现配先用,否那么会影响鉴定效果为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞排列?蒸馏水对于鸡血细胞来说市一中低渗液体,水分可以大量进入血细胞中使血细胞账裂,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂,从而释放出DNA加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?洗涤剂是离子去污剂,溶解细胞膜,有利于DNA的释放;食盐主要成分NaCl有利于DNA的溶解如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响? DNA释放不完全,提取的DNA少,影响结果,看不到丝状物,鉴定不显蓝
33、色滤液中可能含有那些细胞成分?RNA、核蛋白、多糖等为什么反复溶解与析出DNA,能够去除杂质?高浓度盐溶液溶解DNA,除去某些不溶性杂质;低浓度盐溶液能使DNA析出,能除去在低盐溶液中溶解的杂质;反复溶解析出能够除去与DNA溶解度不同的杂质加入嫩肉粉与恒温加热去除杂质的原理有什么不同?前者是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNA与蛋白质分开后者利用DNA与蛋白质对高温的耐受性不同,使蛋白质变性与DNA分离DNA实验操作中的主要步骤都有什么目的?材料选取:选取DNA含量较高的生物材料,否那么会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测困难DNA的释放与溶解:尽量使细胞DNA全部溶解DNA纯化:对DNA溶解性,对酶及高温的耐受性与其他杂质不同,最大限度将DNA与杂质分开DNA的鉴定:对整个实验结果的监测从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易么?为什么?不一样,蛋白质难度大。蛋白质对温度、盐浓度、pH条件敏感得多,容易失活;而且蛋白质空间结构多种多样,理化性质各不相同。蛋白质的提取没有统一方法,只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件,
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