黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究

1、黄连解毒汤治疗大鼠急性肝损伤的实验研究【摘要】目的观察黄连解毒汤对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用及中药的量效关系。方法32只SD大鼠，雌雄各半，随机分为正常组，模型组，黄连解毒汤低剂组，高剂组；除空白组外，其余各组均以1000g/kgD-Galn腹腔注射造模，空白组那么以等量NS腹腔注射；造模后立即对中药组给予相应浓度中药10l/kg灌胃，每日一次，余组那么以等量NS灌胃。染毒24h后，股动脉取血，测血清ALT,AST,并解剖肝脏，光镜下观察其病理变化，操作同前。结果模型组与正常组相比，模型组ALT、AST活性明显增高；治疗组与模型组相比，治疗组转氨酶活性降低，差异有统计学意义均p

2、0.05；两治疗组间相比，转氨酶活性差异无统计学意义。肝脏病理组织学检查显示，治疗组肝细胞坏死及炎细胞浸润程度均较模型组减轻。结论对1000g/kgD-Galn诱导的大鼠急性肝损伤，黄连解毒汤干预24h后，有一定的治疗作用。【关键词】黄连解毒汤急性肝损伤D-氨基半乳糖胺量效关系黄连解毒汤方出自?肘后备急方?，名见?外台秘要?，由黄芩、黄连、黄柏、栀子四药组成，有清热燥湿、泻火解毒的成效，主治三焦火毒证，尤其对热毒炽盛证型的急性肝炎，有一定的临床效果1。有学者已对该复方进展了研究2，但为预防性研究，与临床实际应用有一定的差距。本实验重点观察该方对D-Galn诱导的大鼠急性肝损伤的治疗作用。1材料

3、与方法1.1材料1.1.1药物：D-氨基半乳糖D-galatsanine,D-Galn由siga公司提供，批号7499531，黄连解毒汤的四味药材为中药免煎剂型，购自成都中医药大学附属医院中药房，各药物的剂量比遵守?肘后备急方?原方比例，以蒸馏水煮沸冲为不同浓度的中药汤剂，其中低剂量组(T1组)浓度为0.49g/l，高剂量组T2组浓度为0.99g/l。1.1.2动物：清洁级SD大鼠32只，体重20020g，雌雄各半，由四川大学华西动物实验中心提供,饲养于成都中医药大学附属医院病理生理实验动物中心，自然明暗周期，室温2123。1.1.3主要试剂：肝功ALT、AST试剂盒购自中生北控生物科技股份，

4、批号080211，10%福尔马林缓冲液由华西医科大学药理实验室提供。1.1.4仪器：KD-2046低速冷冻离心机科大创新股份中佳分公司，Sartrius,R180-D电子分析天平，日立7170全自动生化分析仪，LEiaD4000型显微图像分析系统。1.2方法1.2.1动物分组及给药量清洁级SD大鼠32只，雌雄各半，适应性喂养3天后，称重编号。随机分为4组，每组8只，即正常组组、肝损伤模型组组，1000g/kgD-Galn黄连解毒汤低剂量组T1组，0.49g/l，临床等效剂量、黄连解毒汤高剂量组T2组，0.99g/l，2倍临床等效剂量。1.2.2操作过程：试验前一天对大鼠称重，禁食不禁水。实验前

5、D-Galn以无菌NS配制为10%的浓度，根据文献资料3及预试验提示，各组除组外以1000g/kgD-Galn腹腔注射，组以等量NS腹腔注射；治疗组造模后，立即以中药10l/kg灌胃，每日1次，组、组那么以等量NS灌胃，染毒24h后，对所有动物股动脉放血取血，置于-20冰箱待检，随后断颈处死，解剖，观察肝脏大体形态后，取肝脏右叶组织块置于10%甲醛溶液中固定。转贴于论文联盟.ll.离心取血清，全自动生化分析仪以连续监测法检测血清ALT,AST，肝脏病理那么送四川大学华西医学中心药理实验室常规方法制作HE切片，以LEia显微图像分析系统，以200的放大率观察。1.2.3统计方法据SPSS13.0

6、统计分析，数据以x-s表示，采用Dunnetts检验，0.05。2结果2.1对血清ALT、AST的影响：24h时，两治疗组均有降低血清转氨酶的作用，差异有统计学意义P0.05。2.2肝组织病理学影响光镜下观察，组：肝索排列整齐，小叶构造完好，肝细胞无变性坏死。组：肝索排列欠齐，肝细胞脂肪样变，点状坏死，血窦内充血，小叶内广泛炎性浸润。T1组:肝索排列整齐，肝细胞少量变性，血窦内少量充血，小叶内点灶状炎性浸润。T2组：肝索排列较齐，肝细胞脂肪变性明显，血窦内少量充血，散在炎症浸润，与T1组无明显差异。3讨论急性肝损伤是由多种病因引起并有多种因素参与的复杂过程，也是是所有肝病慢性化的始动因素。急性

7、肝损伤,特别是急性重型肝炎,发病急,进展迅速,现代医学对此尚无特效治疗。中医学认为其发病主要和热毒有关，热毒炽盛，加以湿邪秽浊之气，凝胶成痰，或热毒深化营血而导致诸种病症发生。黄连解毒汤便是清热解毒，清热除湿的代表方1。方中选用大苦大寒的黄连为君，清泻心火及中焦之火，臣以黄芩以清上焦之火，佐以黄柏清下焦之火，栀子清三焦之火，导热下行，引邪从小便出。四药合用，苦寒直折，清热解毒，泄浊退黄。D-Galn是一种间接肝毒剂，主要通过干扰肝细胞内UTP代谢，影响物质代谢而引起肝细胞变性，其诱导的急性肝损伤是公认的研究肝炎发病机制及保肝新药的模型4,5。ALT和AST是为最常见的诊断肝脏疾病的指标。正常时

8、主要见于细胞内，其中，ALT主要分布于肝脏和肾脏，AST主要分布于心脏和肝脏。当各种病因使细胞膜的通透性增高或者细胞被破坏时，转氨酶大量释放入血，使得血液中含量增高6，故血清转氨酶程度的上下与肝损伤程度相关。本实验结果说明，黄连解毒汤对D-Galn多种的大鼠血清ALT,AST的升高有明显降低作用，而且肝组织病理学也显示中药干预组有较好的保肝作用。两治疗组间药效无明显差异，说明黄连解毒汤的效果可能并非简单的线性关系，尚需进一步实验探究其量效关系。参考文献1刘学勤.肝胆病诊疗全书.北京：中国医药科技出版社，2001:191-192.2太田好次等.黄连解毒汤对进展性D-GALN肝损害的抑制作用J.国外医学中医中药学分册，2022，256：352.3黄正明，杨新波.抗肝炎中药现代研究与应用.郑州：郑州大学出版社，2022:318.4王福根，