药用藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用

1、药用藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用关键字:多糖双歧杆菌促增殖摘要:目的：探究藻类中药中多糖对双歧杆菌的促增殖作用。方法：在恒温条件下，以时间和多糖浓度为影响因素，理解不同藻类中多糖对双歧杆菌的促增殖作用，对其量效关系进展分析结果：实验结果说明在37多糖浓度在0到2范围内，双歧杆菌数随多糖浓度的增加而上升；多糖浓度继续升高，那么反而下降。结论：海藻中多糖在一定浓度下能很好地促双歧杆菌生长。二、海藻多糖促双歧杆菌生长实验一实验材料1样品羊栖菜多糖：利用乙醇沉淀法从羊栖菜中提龋海带多糖：利用乙醇沉淀法从海带中提龋海藻为马尾藻科植物海蒿子或羊栖菜的藻体。咸寒，归肝肾经，有消痰软坚，利水消肿之作用。?

2、本草纲目?中记载：海藻，现咸能润下，寒能泄热引水，故能消瘿瘤，结核之坚聚，而除浮肿、脚气、痰气之湿热，使邪气自小便出也。昆布为海带科植物海带或翅藻科植物昆布的叶状体。咸寒，归肝肾经，有消痰软坚，利水消肿之作用。?别录?记载昆布，主十二种水肿，瘿瘤聚结气。本实验中将用羊栖菜和海带羊栖菜Sargassufusifre(Harv.)Seth：藻体黄褐色，肥厚多汁，高1540。固着器为是北太平洋西部特有的暖温带植物，属褐藻类马尾藻科。是一种营养丰富的藻类，干品每百克含蛋白质10.6克，糖类47克，灰分18.3克，脂肪1.3克，钙1400毫克，磷100毫克，钾4400毫克，铁5.5毫克，胡萝卜素550毫

3、克；还有多种维生素和微量元素。海带LainariajapniaAresh属褐藻门海带科，是一种大型食用海藻，有丰富的营养。每100克海带中含有蛋白质8克，甘露醇14克，钾4.36克、铁150毫克，超过菠菜，油菜几倍至几十倍。更为突出的是，海带富含微量元素碘，每100克海带含碘高达24000微克。多糖提取工艺取海藻置于托盘放入恒温培养箱低温烘干，用电磨机打碎，使之成粉末状。用天平称取海藻粉50g放入500l锥形瓶中加蒸馏水250l放置于95水浴锅中，并隔10in晃一次，4h后取出，冷却到室温。离心取上清液，在离心管中加无水乙醇，得到沉淀再次离心，取沉淀(多糖)，用蒸馏水冲洗数遍，于37度烘箱中烘

4、干所得沉淀为粗多糖。2培养基：RS肉汤培养基：蛋白胨10g、肉浸膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、吐温801l、K2HP42g、醋酸钠5g、柠檬酸铵2g、gS47H20.2g、nS44H20.05g、蒸馏水1000l。pH值6.4。20肉汤：蛋白胨1g、肉浸膏1g、蒸馏水1000l。pH值6.4。3菌株：取自丽珠肠乐胶囊由双歧杆菌制成的干粉胶囊，珠海丽珠医药集团股份，批号20220404。4实验仪器NbxJar7.0L，法国生物梅里埃公司S.303型隔水式电热恒温培养与试剂厌氧培养盒GE箱，嘉兴新睦电器厂除氧剂，法国生物梅里埃公司LD42高速离心机，北京医用离心机厂754型紫外可见分光光度计

5、，上海第三分析仪器厂TG328B电光分析天平THZ82型恒温振荡器，江苏太仓医疗器械厂二实验方法与结果1菌液与溶液制备菌液制备：无菌条件下，从丽珠肠乐胶囊中取出内容物，溶解于10l浓度为0.9的无菌生理盐水，搅拌均匀后用接种针蘸取少许溶液，涂布于无菌RS固体培养基平板上，37下，于厌氧培养盒培养3d。再从平板中挑取色泽淡黄、圆滑突起的单菌落，接入40lRS液体培养基，37厌氧培养2d。取少量培养液，测得菌液浓度为2.7108个/l。使用前稀释至1.0108个/l备用。多糖溶液制备：利用蒽酮硫酸法测得醇沉淀中多糖含量：羊栖菜：25.2；海带：24.7；将2种粗多糖分别配制成一定浓度的溶液，并按实

6、验需要稀释为8.0、4.0、2.0、1.0、0.5的水溶液，每管各10l，分别参加浓度为20的肉汤培养基10l混匀，同时制备作为对照的10肉汤，115湿热灭菌15in后备用。附.蒽酮硫酸法测定多糖含量原理：糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生有色物质，反响后溶液呈蓝绿色，于620n处有最大吸收，显色与多糖含量呈线性关系。标准曲线的制作：分别取0.1g/L的葡聚糖溶液0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.60，0.80l，用蒸馏水补到1.00l；分别参加4.00l蒽酮试剂，迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完一起进入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸

7、起，准确煮沸10分钟取出，用自来水冷却，室温放置10分钟左右，于620n比色。以同样处理的重蒸馏水为空白，进展比色。以光密度(D值)为纵坐标，糖的含量微克数为横坐标，得标准曲线。样品含量测定：取相当于糖浓度50g/l左右的样品溶液1.00l，参加蒽酮试剂，同标准曲线制作之操作，比色测定。根据标准曲线和样品浓度计算含量。标准曲线的制作表为标准曲线相应数据1234567含糖量ug5102030406080D值0.0000.0310.0580.1120.2040.2850.3940.526曲线Y=A+BX得：A=-4.8910-3B=6.71X10-3r=0.998依数据绘曲线表1培养时间对双歧杆菌

8、株的影响lg10n/l多糖浓度时间1.0%2.0%对照12h7.9868.2456.02324h8.3018.5686.17648h8.1218.3026.094图1培养时间对双歧杆菌的影响注：图中纵坐标为菌液浓度对数值；横坐标为培养时间二浓度因素根据表1选择最正确的多糖溶液培养时间24h。取两组海藻多糖浓度为4.0、2.0、1.0、0.5、的多糖肉汤溶液管以及作为对照的10肉汤管各9l，分别参加浓度为106个/l的双歧杆菌菌液1l，37厌氧培养24h，取样用无菌生理盐水稀释后，接种于RS琼脂平板上，37厌氧培养4d，计算出每l培养液中所含的活菌数。表2即为各浓度多糖培养液中双歧杆菌的活菌数。

9、将实验结果换算成以10为底的对数值，进展统计比较，结果见表3。以双歧杆菌活菌数对数为纵坐标，多糖浓度为横坐标，绘得图2。表2不同浓度海藻多糖对双歧杆菌增殖作用的影响单位：个/l多糖来源多糖浓度羊栖菜海带0.07.41077.41070.58.71072.01081.01.01083.01082.02.01084.21084.01.51082.9108表3各项增殖菌数的对数值及其统计分析多糖来源多糖浓度羊栖菜海带试验组与空白组方差分析0.07.8697.8690.57.9408.301P0.051.08.0008.477P0.052.08.3018.623P0.054.08.1768.462P0

10、.05图2不同浓度海藻多糖对双歧杆菌增殖作用的影响注：图中纵坐标为菌液浓度对数值；横坐标为多糖浓度三、分析与讨论从表2可以看到，在试验浓度下，各类海藻多糖对双歧杆菌均有显著的促生长作用。参加不同浓度多糖的各试管双歧杆菌活菌数明显高于对照组P0.05。图2显示，多糖在0.52.0的范围内，随着浓度的增加，双歧杆菌的活菌数呈上升趋势，增长较为平缓，当浓度为2.0的时候到达顶峰。说明在这一范围内，羊栖菜多糖对双歧杆菌的促生长作用与浓度呈正相关。然而在多糖浓度为4.0的时候，双歧杆菌活菌数出现下降。推测其原因，随着多糖浓度的增高，培养液浸透压也逐渐增大，使环境变得不利于双歧杆菌生长，从而造成菌数减少。

11、因此，本实验结果显示适宜双歧杆菌生长的羊栖菜多糖浓度在2.04.0之间。在不同的海藻多糖之间，双歧杆菌的活菌数也存在着差异，海带多糖的促生长作用较强，而羊栖菜促生长那么相对较弱，与前者相差一倍。在2.0多糖浓度下37培养24h，各类海藻多糖的促生长作用最强，海带多糖培养液可以使双歧杆菌的活菌数到达原来的6倍。实验结果说明海藻多糖是非常优良的双歧杆菌促生长因子，能有效增加肠道内的双歧杆菌数量。在服用海藻多糖时应控制好多糖的用量或者采用缓释技术，使得多糖在一个适宜的浓度到达肠道，并保持一定的时间，对双歧杆菌的生长起到促进作用，促进双歧杆菌在肠道内的增殖和定植，优化肠道的构造，维护机体的生态平衡，到达最正确的保健成效。根据表1，双歧杆菌在厌氧条件下37培养24h，活菌数到达顶峰，此时是获得双歧杆菌最高生物量的最正确时间，为双歧杆菌为主的微生态活菌制剂消费提供了有用的条件参数。本实验采用了10肉汤培养基为基质，使各种营养成分降低到仅能维持备试菌生长的浓度，目的是减少营养成分的影响，更能准确反响添加各类多糖的促进效果。目前增殖肠道内双歧杆菌有两种方法，一是通过摄取含双歧杆菌的食物，补充双歧杆菌的缺乏。二是服用促双歧杆