纤维素酶活力

1、纤维素酶活力的测定、目的学习和掌握3,事一肖罐水阙酸(DNS)由测定纤维素酶活力的愫理和方法，了解蚌舞素酶的作用特性口一、原理纤雄素能是一神多组分酹 包括G酶、Cx酣和|A-荷葡械昔酶三种主要组分“其中”酶的作用是将 天然纤维素水解成无定形纤维素.危酶的作用是将无定形纤维素蔬续水解成纤维慕替，IA-MOTSF 的作用是将纤维寡新水解成葡萄糖:纤维素酶水解纤维素产生的纤维二.勘、荷痢销等还原辅能将械性条 件下的&5-二硝基水杨酸(DNS)还原，生成棕红色的基基化剖虬 在540nm波长处有最火光吸收， 在一定范闱内还原糖的圣与反应液的.颜色强度呈比例关赢 利用比色法测定其还原槽生成的臣就可测定 虹

2、雄素醇的活土匚f 12加章液管或加洛群0.5mL; 2mL7C13&d丽 1O0mL瞄r lOOOrtiL曲址筒 50100 mLI ； SOO mLM貌杯 100 mLS： 5aOfnL*3r 1 OOOrnL*13.试剂r均为分析纯)(1)谊度为ImgFmL的苟茕赭掠准液将有蜘糖克恒温干燥箱中105T下干躁至恒重，推瓣弥取100rng T 100mL小烧杯皿 川少耐蒸慌水 辩解局 移入ItMmL容址值中用蒸锦水定客皇OOrrL,充分捆匀M瓯箱中保存【可用12-15天，(2二福基水岛酸CDNSJ溶推准确称取DN&.豹T- StWJmL大烧杯申.用小弘恭懦末藻解后.KASmol/L Ns OH

3、辩版队2mL,再 场到与MeL育专1fi5g活石楹钾削tCAKNaUO, MW=28222)的热水群液叫 再加知站 制SKCQHr MW=94.11)和5g无水亚磕瞄 (NSp MW= 126.04),搅外辩姑 者却后移入 1 OOOmL容讪械中用篱孺水定容至1 OOOmL.充分暮岑黔丁拣色瓶中室霞放置一周后仲用，0.05 incili- pH4.5的柠质酸媛抻液A (0.1 mWL柠康酸都能席准确滁取 5心、HjO (MW=21C.U) 21.014g 丁 5O0mL大烧杯中-用少址蒸佛水溶解后，移八1 MOmL容M曲用蒸俏水定容至1 OCOmL.充分濯匀4T旅箱中保存备用B 波 0.1 m

4、ol/L 籽微酸钠溶斜 帝确祢取 NasCeHECh -SHaO MW=29412) 29.412g T 50CmL 大 烧杯中用少h蒸惴水溶丽后，A1 000mL容地氐U 戡后山蒸儒成定容至1 OOCmL-充分泡匀.4诫箱申保存备XL氢氧化钠溶液，c (NaOH) =2mol/Lm=8g, V=100ml以上试剂配制均缩小10倍职上述A液27.12eL, B液22.38nL.充脊氾匀.日移入100mL容扯裾中即蒸懦水定容至1O0mLP充 分氾句，限为。.沥曲土呻寻曲栓段酿覆冲魂、4冰箱中保存备用，用丁祖定虑知酶活方 0.&5mnin_pH5.a的柠檬稻缓冲渔职上燃A眼2EeLB泳器.5m充分

5、翻匀后移入1OOmL容址低中用蒸惭水定容至何51L,充分 混乳即为A.05M pH50的忤媛晚受冲液4 41CM+保存备肌用T测定G响柄如（5） 0.61蠕殃叩基鼾维素钠CCMC?薛液精碑称0.519CMC 丁仲OmL小煽杯叫0.05 mol/LpH5.C的柠瞟砌圳热辩懈后 格入100mL容扭胞中并用0.05mol pH5.0的籽建酸蹬补液定容至100mL,用前充分挽凯耳冰箱 申保存番用.用于测定Ck醇活力。8）。.泌水物槌停溶液淮曲称取。一弛水扬酸背丁 1d0mL小燃杯电 kli0.05nlol/LpH4.5的柠檬曜冲波溶丽后，粉入 100面L容站席中并用0.05mMLfH4_5的符糠酸侵冲

6、被定窖至lOOmL充分漏匀。甲C冰籍中保存者 用.用于测定席葡柚融昔醇沽力=纤雅泰酷淹的配制乖函袜取鲜魏诉陞制剖5。附口 T 100mL小魂杯中，用小扯蒸孺水赣解后，暮入100mL.#）ffiq-f 用蒸增求定容至100吊此酿波的浪度为4幻冰箝中堤存备用=四.操作方法祁步骤四.操作方法科步骤葡勘笛（C）标脱曲绒的制作眠H支洗净烘干惘2加1L具塞刻度试管，蛹却后接衰1加入标推葡萄构潞蔽和蒸惘4C配削庆 一粟列不同浓度的苟糊新辩蔽.充丹摭句后，向试管中加入1.号011_口河陶能，48匀峪浇水潜Emin, 联出抻却启担蒸懦木定容至20mL,充分混匀，在54如m波长下，快1号试曾辟波作为空白对照，调

7、零总测为此各管科液的光密度值并记录结果。以荷苛糖告舟（叫）为横坐标，或对应的光醪度恨 为娜.坐标，在坐标城匕绘制出荷啪糖标准仙姓，表1篇袖密既曲践制作表一标准曲线的测定管号012345葡萄糖/mL0.00.020.040.060.080.1蒸馏水/mL0.10.080.060.040.020.0显色液/mL0.30.30.30.30.30.3沸水浴中煮沸显色10min,冷却蒸馏水/ml2.1以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，获得线性回归方程。线性回归系数应在0.9990 以上时方可使用（否则须重做）。表二样品的测定编号空白样品酶液/mL0.1 （煮沸 5-10min）0.1C

8、MC/mL0.30.350C恒温 30min显色液/mL0.30.3沸水浴中煮沸显色10min,冷却蒸馏水/ml1.8图一：标准葡萄糖光吸收曲线结果分析：拟合所得的标准曲线为：Y=7.439X10-4X-0.00243。拟合度为0.99917。由样品的A值，可得 三份溶液的葡萄糖含量分别为：652.5ug，648.5ug，653.9ug。所以平均含量：651.6ug。纤维素酶活力单位=651.6/0.01X30=2172 ug/mgXmin4.计算酶活力：在上述条件下，每分钟催化纤维素水解生成L微克葡萄糖的酶量定为一个活力单位，N X0D值封应的葡氧植量纤谁素酶活力单位=N液的稀释倍数30 精化所用时间1一反应酶液毫升数【思考与讨论】1、在测定时为使各样品和空白管处理一致，应同时加入试剂，同时放入水浴中，同时取出水浴，以使反应 得进行程度一致。2、在测溶液的OD值之前，应将溶液摇匀，摇匀的方法是用保鲜膜蒙住试管口，然后来回震荡试管。DNS溶液配制时，将含DNS的NaOH溶液加到含酒石酸钾钠的热水溶液中时，一定要慢倒，