柴胡疏肝散对夹尾应激大鼠脑和胃组织GASR mRNA和CCKAR mRNA表达

1、柴胡疏肝散对夹尾应激大鼠脑和胃组织GASR mRNA和CCK-AR mRNA表达【摘要】目的讨论柴胡疏肝散对夹尾应激大鼠脑和胃GASRRNA和K-ARRNA表达的影响。方法将30只大鼠随机分为3组，正常对照组、模型组和柴胡疏肝散组，每组10只，采用慢性夹尾刺激方法制作慢性应激模型，分别给予生理盐水、柴胡疏肝散水煎剂灌胃，共4周。观察其一般情况及胃组织学变化，并用原位杂交方法检测大鼠脑和胃组织胃泌素受体GASRRNA和胆囊收缩素受体AK-ARRNA的表达。结果模型组出现了抑郁和消化不良行为表现,而柴胡疏肝散组那么较不显著；模型组胃黏膜均出现不同程度的腐败和炎症反响，而柴胡疏肝散组那么较轻；模型组

2、大鼠胃和脑组织上的GASRRNA表达量较正常对照组有显著升高均P0.05,柴胡疏肝散组那么较模型组有显著降低均P0.05。模型组大鼠胃组织K-ARRNA表达较正常对照组显著升高P0.05，柴胡疏肝散组较模型组有显著降低P0.05。结论柴胡疏肝散能改善慢性应激抑郁和消化不良行为，其机制可能与其能减低脑和胃组织GASRRNA表达和减低胃组织K-ARRNA表达有关。【关键词】柴胡疏肝散；GASRRNA；K-ARRNA；夹尾应Abstrat：bjetiveTstudytheeffetsfhaihushugansannthegastrireeptrRNA(GASRRNA)andK-AreeptrRNA(

3、K-ARRNA)expressininstressratsinduedbynstantlysqueezingthEirtails.ethds30ratsereseletedandrandlydividedint3grups:ntrlgrup,delgrupandhaihushugansangrup(eahn=10).TheanialdelfstressasestablishedbynstantlysqueezingthEIrtailsfr4kandeanhilesaline,haihushugansandetinereadinisteredrespetivelytthreegrupsbygav

4、age.Theanialsgeneralsituatinandpathlgialhangeerebservedeveryeek,andGASRRNAandK-ARRNAexpressinfratsinbrainandgastritissuesereeasuredfureekslater.ResultsThedelgrupappeareddepressinanddyspepsia,theanifestatininhaihushugansandetinayntbesbviusparedithdelgrup.delgrupappeareddifferentderatestahusaersinandi

5、nflaatinbuttheyerentsbviusinhaihushugansangrup.TheGASRRNAandK-ARRNAexpressinfthedelgrupratsinbrainandgastritissuesereinreasedsignifiantlythanthsefntrlgrupP0.05,hilehaihushugansangrupassignifiantlylerthandelgrupP0.05.delgrupassignifiantlyhigherthanntrlgrupinK-ARRNAfgastritissueP0.05.nlusinhaihushugan

6、sananiprvedepressinanddyspepsia，itsehanisisrelatedtdereasingexpressinfGASRRNAinbrainandgastritissuesandK-ARRNAingastritissnefrats.Keyrds：haihushugansan;GASRRNA;K-ARRNA;Stress应激是一种常见的机体对紧急事件的反响状态，常可导致胃损伤和运动障碍，与胃肠道心身疾病起病及病症的发生亲密相关1。应激损伤属于中医病因学中的情志致病范畴，情志内伤最易伤肝，导致肝失疏泄而出现肝气郁结病证，进一步开展为肝郁脾虚或肝胃不和等，出现胃肠道病症。

7、文献报道2，3及我们的临床理论说明中医疏肝理气法治疗胃肠道心身疾病如功能性消化不良等具有较好效果。研究说明其作用可能与影响胃肠激素程度有关46，而胃肠激素对消化功能的影响常取决于表达的受体的数目，受体程度的上下在一定程度上更能反映该激素的作用强度，但目前尚无相关研究报道。本实验通过慢性夹尾激惹刺激法制造大鼠慢性应激模型，观察柴胡疏肝散对其脑、胃组织的胃泌素受体、胆囊收缩素受体表达的影响，以期从中枢及外周脑肠肽受体角度讨论疏肝理气法治疗应激相关胃肠病的作用机制。1材料1.1动物30只安康清洁级istarII级大鼠，雌性，体质量20010g，购自广西医科大学实验动物中心。1.2药物和仪器经方柴胡疏

8、肝散组成：柴胡6g，陈皮6g，川芎4.5g，白芍4.5g，枳壳4.5g，香附4.5g，甘草1.5g。GASRRNA原位杂交试剂盒和K-ARRNA原位杂交试剂盒，均购自武汉博士德生物工程。病理图像分析仪，德国，型号DRQ550。2方法2.1分组、造模适应性饲养7d，将30只大鼠随机分为3组,即正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组，每组10只，每5只一笼。除正常对照组外，其余各组参照文献7加以改良，采用夹尾激惹刺激法制造大鼠模型，方法是：束缚布包止血钳钳夹标记鼠鼠尾，立即放开，30in/次，2次/d，持续4周。于造模同一天开场灌胃，正常对照组和模型组分别予0.9%Nal溶液灌胃，柴胡疏肝散组给柴胡疏肝

9、散水煎液灌胃，量均为1.5l/100g，早晚各1次。共喂药4周。2.2药物配制与用法将柴胡疏肝散按成人(60kg/人)临床用药量的10倍，按15容积比,用蒸馏水浸泡30in，煎煮两次(30in/次)后，过滤,去渣取汁，合并滤液加热蒸发，制成1.41kg/L水煎浓缩液(含生药1.41kg/L)，4保存待用。2.3行为学观察通过动物的皮肤毛发、胡须、情绪反响、行为状态、兴奋程度、活泼状况、睡眠、饮食等进展一般情况的观察。2.4取材及组织学观察处死大鼠前禁食不禁水12h，在实验第29天，所有大鼠用3%戊巴比妥钠1l/200g腹腔麻醉，剖腹取胃，断头取脑。10%福尔马林固定，常规包埋，切片，常规HE染

10、色，光镜观察组织学改变。2.5原位杂交石蜡切片厚4。65烤片5h,T生物透明剂脱蜡，梯度乙醇复水，三蒸水冲洗3遍后，按原位杂交试剂盒说明书操作。GASRRNA序列：5；5；5。RRNA序列：5；5；5。设无探针阴性对照。利用病理图像分析仪进展图像采集和分析：选取一样的部位的每张切片上选取5个互不重叠的视野，在400光镜下分别测量各个视野GASRRNA和K-ARRNA阳性细胞的面积密度，取其平均面积密度值%。2.6统计学处理所有数据以s表示，采用SPSS13.0统计软件对数据进展处理，多组间比拟用ne-ayANVA进展分析，方差齐采用LSD方法。P0.05显示有统计学意义。转贴于论文联盟.ll.

11、3结果3.1行为学变化实验第4周，模型组出现了靠边、扎堆状，兴奋性及活泼程度下降，打斗减弱,活动相对缓慢、反响迟钝，毛发蓬松枯黄、不顺，进食量减少等现象。柴胡疏肝散组上述表现那么较不明显。3.2组织学大体观察正常对照组胃黏膜无明显潮红、肿胀、腐败等病变，模型组大鼠胃残留饮食物较多,几乎均可见数个针尖样大小的腐败点,柴胡疏肝散组亦可见残留饮食物、腐败,但数量、程度均较模型组轻。光镜检查：正常对照组大鼠胃黏膜有轻度淋巴细胞浸润；模型组大鼠胃黏膜固有层均有轻、中度淋巴细胞、嗜酸性细胞浸润，黏液分泌亢进,部分腺体扩张，胃小凹中有大量浆液,黏膜下层组织疏松水肿，胃肌层无明显病理改变，柴胡疏肝散组亦可见黏

12、膜轻度炎症反响，部分也存在黏液分泌亢进现象，但程度较模型组为轻。3.3各组大鼠脑、胃组织GASRRNA和K-ARRNA的表达3.3.1形态学观察GASRRNA阳性细胞在脑组织主要表达于大脑皮层。K-ARRNA在各组脑组织均无明显表达。模型组胃组织GASRRNA和K-ARRNA主要表达于胃窦黏膜固有层和粘膜下层，胞浆染色呈棕黄色。正常对照组和柴胡疏肝散组在胃和脑组织阳性细胞胞浆染色均不及模型组。结果见图13。3.3.2各组大鼠脑、胃组织GASRRNA和K-ARRNA阳性细胞表达面积密度比拟结果见表1。模型组大鼠脑和胃组织GASRRNA表达量均较正常对照组显著升高均P0.05，柴胡疏肝散组较模型组

13、显著降低均P0.05。模型组胃组织K-ARRNA表达量较正常对照组显著升高均P0.05，柴胡疏肝散组那么较模型组显著降低P0.05。表1各组大鼠脑、胃组织GASRRNA和K-ARRNA阳性细胞表达面积密度比拟(略)4讨论脑肠肽是指存在于胃肠道内分泌细胞、肠道神经系统及中枢神经系统的肽类激素，其作为神经肽或神经内分泌或神经旁分泌物质，调节着胃肠运动、分泌吸收等复杂的功能，并与情绪有关8。Gas对整个胃肠道均有作用，它可抑制胃底、胃体运动，延缓液体胃排空，同时对胃窦收缩有促进作用，促进胆囊收缩9，K对胃运动调节的主要生理作用是控制胃排空10。脑肠肽对消化功能影响的大小，常取决于表达的受体的数目。K

14、受体主要分为K-A和K-B，有证据说明K-A主要分布在外周组织,其可能参与饱感和多巴胺等行为活动的调节，而K-B那么广泛分布于中枢神经系统，其参与对焦虑、疼痛、觉悟及某些精神疾病的调节11。胃泌素和胆囊收缩素同属一激素家族，两者的受体序列也有同源性，故胃泌素与胆囊收缩素受体统称为Gastrin/K-B受体12。受体和激素结合后，与G蛋白偶联并使之激活，循肌醇磷脂信号传递途径，在磷脂酶的作用下使细胞内多种蛋白质磷酸化并最终产生生理效应4。本研究采用长期夹大鼠尾部诱导大鼠应激反响,通过躯体刺激的方式来诱导并实现心理性应激,结果应激大鼠出现抑郁和消化不良的行为学表现，胃黏膜均出现不同程度的腐败和炎症

15、反响,提示夹尾对大鼠是一种有效的应激源。而经柴胡疏肝散干预的大鼠上述表现那么较不明显，提示柴胡疏肝散能有效地对抗应激所致的“心身改变。原位杂交检测结果显示，模型组大鼠胃组织GASRRNA和K-ARRNA表达显著高于正常对照组，而经柴胡疏肝散干预后，表达显著减低。GASRRNA在大脑皮层表达，柴胡疏肝散组表达量低于模型组。中枢和外周GASRRNA和外周K-ARRNA表达上调，提示脑肠肽受体可能在应激相关疾病的病理生理学中起重要作用。夹尾刺激兴奋迷走神经，分别刺激GAS和K的分泌，血循环中的脑肠肽GAS和K升高，受体增加并且兴奋迷走神经并通过迷走神经冲动发送信号投射到孤束核，将信号送到达下丘脑，通

16、过中枢神经系统对胃肠动力进展调节，抑制胃肠运动，同时胃泌素和胆囊收缩素在中枢通过迷走神经介导胃酸的分泌13。但中枢神经系统高级部位中内源性GAS和K的传导机制尚未清楚，可能是机体GAS和K增多，相应受体表达量升高，其化学信号直接从大脑皮层传到达下丘脑发挥作用，其详细机制均有待进一步研究。另外，本实验对两类脑肠肽GASRRNA和K-ARRNA进展同步检测，发现K-BRRNA在脑组织中有明显表达而K-ARRNA根本上无表达，这可能由于RNA极容易被降解且K-A受体在脑中比K-B受体含量少得多导致，其详细机制有待进一步探究。本研究结果还提示了柴胡疏肝散对中枢和外周部分脑肠肽受体的调节作用，提示其复方

17、多靶点的整体调治作用。由此推测柴胡疏肝散能使得肝气正常升发，津血能正常为五脏六腑及脑所用，使脑有所充、脾有所养,调节部分和中枢神经系统脑肠肽的平衡,从而治疗应激相关胃肠玻【参考文献】1BennettEJ,Piesse,PalerK,etal.Funtinalgastrintestinaldisrders:psyhlgial,sial,andsatifeaturesJ.Gut，1998，42:414.2陈芝芸，严茂祥，项柏康.肝郁证大鼠血及结肠组织胃肠激素变化的研究J.中医杂志，2022，44(2):131.3邓青秀，延娟，彭成，等.四逆散对肝郁证模型大鼠胃肠组织细胞形态及胃肠激素的影响J.中国

18、实验方剂学杂志，2022，13(6):33.4刘凯，齐清会.胃肠肽受体及受体后信号传导与胃肠动力J.世界华人消化杂志，2002，10(12):1445.5陈嘉屿，聂丹丽，张方信，等.肝郁脾虚大鼠模型胃肠动力障碍的机制J.世界华人消化杂志，2001，9(1):106.6胡冬菊，杨倩，刘建平.“疏肝降逆方对功能性消化不良患者胃电图及血清胃肠激素的影响J.江苏中医药，2022，40(1):31.7郭海军，林洁，李国成，等.功能性消化不良的动物模型研究J.中国中西医结合杂志，2000，9(3:141.8凌江红.肝主疏泄与脑肠肽的相关性J.中国中西医结合杂志，2022，11(4):233.9ilburBG,kallyKA.GastrinpentapeptidedereasesaninegastritransuralpressureJ.Gastrenterlgy，1974，67:1