理肺通络方对肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液中sIgA的干预作用

1、理肺通络方对肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液中sIgA的干预作用【摘要】目的观察肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA的含量及理肺通络方的干预作用。方法将40只大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。一次性滴鼻感染肺炎支原体国际标准株(PFH)菌液(每毫升含肺炎支原体107变色单位)造成肺炎支原体肺炎模型。造模第11d起，除正常组外，其余各组分别灌服生理盐水、理肺通络方水煎剂、阿齐霉素溶液，2L/只。中药组连续服药10d，西药组前、后3d灌药液，中间4d灌生理盐水。在治疗的第11d处死动物，观察各组大鼠血清P|Ig滴度及右肺组织形态学，采用放免双抗夹心法检测sIgA含量。结果模型组大

2、鼠血清P|Ig阳性，光镜下显示肺组织炎性细胞浸润和组织损伤明显;与正常组比拟，模型组、中药组、西药组肺泡灌洗液中sIgA含量显著降低，有高度统计意义P0.01;与模型组比拟，中药组、西药组sIgA含量显著升高P0.01;中药组与西药组比拟有统计意义P0.05。结论肺炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA含量下降，理肺通络合剂能进步呼吸道部分sIgA含量，且优于西药阿齐霉素，可能有助于降低再次感染的几率。【关键词】肺炎支原体肺炎；理肺通络方；肺泡灌洗液；分泌型IgA分泌型免疫球蛋白AsIgA广泛存在于血液及各种分泌液中，它是分泌液重要的免疫蛋白种类，是机体特异性的防御因素。本实验观察了理肺通络方对肺

3、炎支原体肺炎大鼠肺泡灌洗液sIgA含量影响，讨论本方对于增加sIgA含量、进步气道部分防御功能方面的作用。1材料及方法1.1材料选择6周龄SPF级雄性istar大鼠40只，质量15010g，由湖北省疾控中心提供答应证号：SXK鄂2022-0005,颗粒饲料喂养。理肺通络方由黄芪20g、沙参10g、紫菀10g、枳实10g、百部10g、麻黄7g、杏仁10g、蜈蚣1条、甘草6g组成，由湖北省中医医院中药房煎煮成浓度为3g/L药液，高压灭菌后置冰箱中备用；阿齐霉素临用前配成5.5g/L溶液按50g/kgd计算；sIgA放免试剂盒北京北方生物技术研究所提供；肺炎支原体抗体被动凝集诊断试剂盒富士瑞必欧株式

4、会社提供；GL-20G-冷冻离心机上海安亭科学仪器厂消费；KY型微量移液器上海荣泰生化工程消费。1.2方法1.2.1实验分组及样本处理40只大鼠随机分为4组：正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。经3d适应性饲养后，用乙醚麻醉动物，模型组、中药组及西药组一次性滴鼻感染肺炎支原体国际标准株(PFH)菌液(每毫升含肺炎支原体107变色单位)0.3L/只，正常组予生理盐水0.3L/只滴鼻。造模第11d起，分别灌胃灌服生理盐水、理肺通络方水煎剂、阿齐霉素溶液，2L/只。模型组、中药组连续灌胃10d；西药组前、后3d灌服药液，中间4d灌服生理盐水。在治疗的第11d处死动物，摘眼球取血，检测正常组、

5、模型组血清P|Ig。暴露大鼠胸腔，结扎右肺，左肺用生理盐水2L行肺泡灌洗，灌洗液置-70冰箱中备用，检测各组sIgA含量。取肉眼可见病变的右下叶肺组织,用10%福尔马林固定、石蜡包埋、切片、HE染色,光学显微镜下观察。1.2.2肺泡灌洗液sIgA检测本试剂盒采用放免双抗夹心法，可检测血清及各种分泌液中的sIgA。采用的双抗体均是针对sIgA中分泌成分S的特异抗体。包被在聚苯乙烯球上的抗体与样本中的sIgA形成免疫复合物“抗体-sIgA，然后参加标记抗体125I-抗体，形成三层夹心免疫复合物“抗体-sIgA-125I-抗体。测定每个小球上的125I放射性计数率(p)值，与标准曲线或标准值p对照计

6、算，即可知样品中sIgA含量。检测操作步骤首先对样品进展110稀释，详细步骤见表1。表1sIgA放射免疫操作步骤各管p值先减去S0p值后再计算，用双对数直角坐标作图横坐标为浓度，纵坐标为p值，查出浓度应乘以稀释倍数即为原标本浓度。1.2.3统计学处理所有测定指标均采用s表示,组间比拟采用检验,以P0.05、P0.01表示有统计意义。2实验结果2.1大鼠血清p|Ig滴度及肺组织形态学检查实验结果显示，模型组大鼠血清P|Ig滴度显著增高见表2。光镜下HE染色，正常组肺组织仅个别大鼠小支气管有少数淋巴样细胞浸润；模型组可见肺泡间隔增宽，支气管、细支气管周围与肺泡间隔内毛细血管明显充盈，有程度不等的淋

7、巴样细胞，个别单核细胞及分叶核白细胞浸润，间质呈明显的炎性改变见图1、图2。以上结果说明造模成功。表2大鼠不同稀释倍数血清P|Ig滴度阳性例数肺泡壁未见增厚，肺泡腔内未见炎性渗出物。肺内小支气管及间质小血管周围未见明显炎性病变。图2光镜下模型组肺组织形态学观察200增宽的肺泡间隔内毛细血管明显充盈，可见程度不等的淋巴样细胞，个别单核细胞及分叶核白细胞浸润，间质呈明显的炎性改变。2.2各组大鼠肺泡灌洗液sIgA的含量比拟实验结果显示，与正常组比拟，模型组、中药组、西药组肺泡灌洗液sIgA含量显著降低，有高度统计意义P0.01。与模型组比拟，中药组、西药组sIgA含量显著升高P0.01,说明理肺通

8、络合剂和阿齐霉素均可不同程度地进步呼吸道部分sIgA含量；中药组与西药组比拟有统计意义P0.05,提示理肺通络合剂对于进步sIgA含量方面作用优于阿齐霉素。见表3。表3各组大鼠肺泡灌洗液sIgA的含量比拟注：与正常组比拟P0.01；与模型组比拟P0.01；与中药组比拟P0.053讨论肺炎支原体(P)是呼吸道常见致病菌,主要通过飞沫或气溶胶传播,P侵入呼吸道后，首先黏附于膜上皮细胞，然后进入上皮细胞之间，借菌体所产生的过氧化氢酶与菌膜毒性成分引起细胞损伤，致上皮细胞病变及纤毛运动减弱。P感染后可产生血清特异性Ig、IgG、IgA，但体液抗体保护作用不完全，而呼吸道部分产生的sIgA对防止再感染有

9、较强的作用。sIgA由黏膜固有层的浆细胞产生，在防御、廓清P感染的过程中起着非常重要的作用1。由于外分泌液中sIgA含量多，又不易被蛋白酶破坏，故成为机体抗感染、抗过敏的一道重要的免疫“屏障。sIgA可阻止病原微生物黏附于黏膜上皮细胞，其机制:一是使病原微生物发生凝集，因丧失活动才能而不能黏附于黏膜上皮细胞；二是与微生物结合后，阻断了微生物外表的特异结合点，因此丧失黏附才能；三是与病原微生物结合，可刺激呼吸道等黏膜中的杯状细胞分泌大量黏液，“冲洗黏膜上皮，阻碍微生物黏附。此外，sIgA还有免疫排除作用。气道sIgA对于空气中吸入的某些抗原物质具有封闭作用，使这些抗原游离于分泌物，易于被排除，或

10、将抗原物质限制于黏膜外表，不致进入机体，从而防止超敏反响的发生2。祖国医学认为，正气是对人体的精、气、神及在此根底上产生的抗病才能、康复才能和自身调控才能的总称。在人体与疾病的正邪斗争中，正气的强弱起着决定性的作用。所谓“正气存内，邪不可干，“邪之所凑，其气必虚。有报道3指出，肺气虚患者，肺泡灌洗液中sIgA含量较正常人降低，说明肺气虚证患者部分体液免疫处于低下状态，sIgA含量的上下可直接反响呼吸道部分的防卫功能状态。由此可推论sIgA是可以反响人体正气强弱的指标之一。理肺通络方以扶正祛邪、理肺通络为组方原那么。通过扶助正气、减轻感染后的病症及病理损伤，促进康复，防止其向其他疾病演变，这是理肺通络方对肺炎支原体肺炎模型的防治作用的机理之一。方中重用黄芪以补脾肺之气，现代药理学也证明，黄芪具有免疫双向调节作用4；沙参养肺阴，扶正以祛邪；枳实行气化痰；紫菀下气止咳；麻黄、杏仁宣肺平喘；百部杀虫润肺止咳；蜈蚣活血搜风止痉。诸药合用，共奏理肺通络之成效。本实验结果显示，理肺通络方能有效地进步气道sIgA程度，且作用优于阿齐霉素，说明理肺通络方能进步部分防御功能，对于去除支原体寄居和防止再次感染有重要意义。【参考文献】1贾飞勇,梁东,傅文永,等.肺炎支原