病毒接种、收获尿囊液操作步骤_第1页
病毒接种、收获尿囊液操作步骤_第2页
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文档简介

1、-病毒接种1.选胚：首先，在照蛋间挑选出血管模糊，没有生命迹象的鸡胚。2.标记注射点：接着用记号笔在气室上方约 1mm 处画线，在线的下方挑选注射点，在挑选注射点时应注意避开主血管，避开鸡头。3.打孔：孔不宜过大，否则会导致封蜡不完全，甚至将蜡油流进鸡胚内部。4.注射病毒：用注射枪向每个鸡蛋孔内注射 0.2ml 病毒稀释液，注射时针头朝向注射点方向，每次注射停留 46s。5.封蜡：注射完毕，用镊子夹取酒精棉沾上蜡油，进行鸡胚封蜡。将封蜡完成的鸡胚放入孵化箱中培养。孵化箱温度设置3335，湿度 4852 6672小时。收获尿囊液1.鸡胚消毒:将培养好的鸡胚放入 4冷库进行冷胚 6h 以上；首先，

2、用 0.1%的新洁而灭溶液将鸡胚进行消毒，每次消毒 12 分钟。接着，在鸡胚的气室.z.-用碘酊消毒。2.烙蛋：将经过消毒处理的鸡胚在烙蛋器上进行烙蛋。3.收获：先用小镊子将壳膜撕破扒出气室，再用大镊子压住鸡头，同时用 5ml移液枪吸取尿囊液。收获的尿囊液应是澄清、微黄状。4.保存：将收获的尿囊液放至 6冷库保存。 蓝血凝滴度试验1.稀释病毒液 ：取一块洁净的“ 96”孔血凝板，横向摆放。用微量移液器（20200ul）加入磷酸盐缓冲液 100ul 至第一孔，横向从第二孔开始，每孔均用微量移液器（550ul）加入磷酸盐缓冲液25ul 直至第十二孔。2.倍比稀释：在“U”型 96 孔血凝板的左侧标记样品名称，用微量移液器（5 25ul 取出 25ul 放到第二孔中，从第二孔开始倍比稀释，每孔吹打混匀，稀释到最后一孔弃掉 25ul，此时的稀释倍数为 1:10240。3.阴性对照 96 25ul 的磷酸盐缓冲液替代供试品，作为阴性对照。4.加鸡血：将 每孔均用微量移液器（5-50l）加入 25l 的 1%鸡红细胞悬液，振荡均匀.z.-后置室温 40 分钟后观察结果。观察阴性对照，若红细胞于孔底形成一个小团，边缘光滑并有立体感，将板倾斜片刻，可见红细胞滑动呈泪滴状为“”，则阴性对照成立。（+以数字2点，此稀释度的倒数

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