黄连解毒汤方药3种方法提取液成分比较

1、黄连解毒汤方药3种方法提取液成分比拟【摘要】目的选择黄连解毒汤方药的提取工艺。方法以小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮、1000D提取物为指标，采用半仿生提取法(SBE法)、醇提取法AE法、水提取法E法进展比拟研究。结果6个指标综合评价Y值为：SBE液AE法E液。结论黄连解毒汤以采用SBE法提取为佳。【关键词】黄连解毒汤；指标成分；超滤；提取方法Abstrat：bjetiveTptiizetheextratintehnlgyfHuanglianJieduDetin.ethdsTakingtheberberine,baialin,genipside,ttalalkalid,ttalflav

2、nid,extratfleular1000Dastheindexes,theethdsfsei-binisextratin(SBE),alhlextratinAE，aterextratinEerepared.ResultsThettalindexYvaluefthesixindexesas:SBEAEE.nlusinTheSBEisthebestextratinethdinpreparatinfHuanglianJieduDetin.Keyrds：HuanglianJieduDetin;arkerpnents;Ultrafiltratin;Extratinethds黄连解毒汤始见于唐?外台秘要

3、?，由黄连、黄芩、黄柏和栀子组成，具有清热、泻火、解毒之成效。根据SBE法理论1，2，在SBE法工艺优选和醇提最正确浓度的根底上，为进一步讨论该方药用SBE法提取是否较目前普遍使用的提取方法为佳，故以小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮、1000D提取物为指标，对该方药3种提取方法进展平行对照实验。1仪器与药品pHS-3型精细pH计上海雷磁仪器厂；A110型电子分析天平上海第二分析仪器厂；AgiLent1100高效液相色谱仪G1315A二极管阵列检测器；UV3010型紫外分析仪日立公司；KQ-250E型医用超声波清洗器昆山市超声仪器；中空纤维超滤膜上海德宏生物医学科学科技开展。中药经山东中

4、医药大学张兆旺教授鉴定：黄连为毛茛科植物黄连ptishinensisFranh的枯燥根茎；黄芩为唇形科植物黄芩StellariabaiaLensisGergi的枯燥根；关黄柏为芸香科植物黄檗PhelldendrnarenseRupr的枯燥树皮；栀子为茜草科植物栀子GardeniajasinidesEllis的枯燥成熟果实。盐酸小檗碱111595202204、黄芩素110715202215、栀子苷110749202213均购自中国药品生物制品鉴定所；甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。2方法2.1样品液制备2.1.1半仿生提取液SBE液按处方比例称取1020目黄连15g、黄芩1

5、0g、关黄柏10g、栀子15g，按黄连、栀子合煎，黄芩、关黄柏合煎的组合方式，分别浸泡30in，分别用SBE法提取3次，加水量依次为药量的10,8，8倍，3煎pH值依次为6.0，7.5，8.5，提取时间依次为120，60，30in，分别将3煎提取液依次粗滤，离心，一定规格的中空纤维超滤膜滤过，浓缩，合并，定容至250l，即得方药1000D提取物的SBE样品液(质量浓度为2.0102gL-1)。2.1.2醇提液AE液按“2.1.1项下方法，只改用优选的醇提最正确浓度61%的醇溶液作溶剂，依法即得方药1000D提取物的AE样品液(质量浓度为2.0102gL-1)。2.1.3水提液E液按“2.1.1

6、项下方法，只改用水作溶剂，依法即得方药1000D提取物的E样品液(质量浓度为2.0102gL-1)。2.2供试液的制备精细量劝2.1项下SBE、AE、E样品液各10.0l，水浴浓缩蒸至近干，加硅藻土0.8g，蒸干，研匀，精细参加甲醇25l溶解，称重，超声提取30in，放冷，补足失重，滤除残存硅藻土，即得SBE、AE、E供试液A质量浓度80gL-1。供测定总生物碱。精细量取上述供试液A各2.5l，用甲醇定容至10l，即得SBE，AE，E供试液B质量浓度20gL-1。供测定小檗碱、栀子苷。精细量劝2.1项下SBE、AE、E样品液各10.0l，拌入聚酰胺6090目0.5g，参加已处理的聚酰胺柱上。依

7、次以蒸馏水300l,20%乙醇100l,70%乙醇80l洗脱至无色，搜集洗脱液，浓缩，再用70%乙醇定容至50l，得溶液甲。精细量取上述溶液甲各25.0l，水浴蒸干，残渣加甲醇定容至10l，即得SBE、AE、E供试液(1.0102gL-1)，供黄芩素含量测定。精细汲取上述溶液甲各0.35l，用70%乙醇定容至10l，得SBE、AE、E供试液D(质量浓度为1.4gL-1)，供总黄酮含量测定。2.3对照品溶液的制备精细称取盐酸小檗碱对照品9.88，5.05g，分别依次用甲醇和pH7.0的缓冲溶液配制，得对照液0.395gl-1和对照液0.101gl-1。精细称取黄芩素对照品7.38，3.68g，分

8、别依次用甲醇和70%乙醇配制成对照液0.295gl-1和对照液0.147gl-1。精细称取栀子苷对照品7.33g，用甲醇配制成对照液0.293gl-1。2.4小檗碱含量测定2.4.1色谱条件色谱柱为Diansil185，2504.6；流动相为乙腈-0.05l/LKH2P43070；检测波长265n；流速1.0l/in；进样量20l；柱温30。3。见图1。2.4.2标准曲线的绘制精细吸劝2.3项下对照液，按上述色谱条件，进样2，4，6，8，10l。以峰面积为纵坐标，盐酸小檗碱的含量g为横坐标，得回归方程为：Y=1662.9X+127.44r=0.9996(n=5)，线性范围0.793.95g。2

9、.4.3含量测定按上述方法，将SBE，AE，E供试液B经0.45微孔滤膜滤过，进样20l，分别平行进样3次，测得峰面积，计算含量。结果见表1。转贴于论文联盟.ll.2.5总生物碱含量测定2.5.1标准曲线的绘制精细吸劝2.3项下对照液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2l，用pH7.0的缓冲液稀释至2.0l。参加0.007%溴麝香草酚蓝8.0l，摇匀，参加氯仿10.0l，振摇，静置分层2in。分取氯仿层，用枯燥滤纸滤过，相应试剂为空白，在413n测定，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，回归方程：Y=59.802X-0.0094，r=0.9995n=5，线性范围为4.0412.12gl-14。2

10、.5.2含量测定精细汲取SBE、AE、E供试液A各0.15l，按上述方法，依次参加氯仿10.0，10.0，5.0l萃取，依法测定，总生物碱含量以盐酸小檗碱计算。结果见表1。表1黄连解毒汤3种不同提取液各指标成分含量及标准化处理结果略2.6黄芩素含量测定2.6.1色谱条件色谱柱为Diansil185，2504.6；流动相为甲醇-0.4%醋酸水7030；检测波长275n；流速1.0lin-1；进样量20l；柱温305。结果见图2。2.6.2标准曲线精细吸劝2.3项下对照液1，2，3，4，5l，按上述色谱条件测定。以峰面积为纵坐标，黄芩素的含量g为横坐标，回归方程为：Y=4129.4X241.09r

11、=0.9995(n=5)，线性范围0.2951.475g。2.6.3含量测定精细汲取SBE、AE、E供试液，各进样20l，按上述色谱条件，依法测定计算黄芩素的含量。结果见表1。2.7总黄酮含量测定2.7.1标准曲线的绘制精细吸劝2.3项下对照液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5l，用70%乙醇稀释至10l。以70%乙醇为空白，在278n处测定，浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，回归方程为:Y=101.22X+0.0244r=0.9994(n=5)，线性范围：1.477.35gl-16。2.7.2含量测定按上述方法测定SBE、AE、E供试液D，总黄酮含量以黄芩素计算。结果见表1。2.8栀子苷含量

12、测定2.8.1检测条件色谱柱：DiansiLT钻石185，2504.6；流动相：乙腈-水1585；检测波长：238n；流速：1.0l/in；进样量：20l；柱温：307。结果见图3。2.8.2标准曲线的绘制精细吸劝2.3项下对照液1，5，10，15，20l，按上述色谱条件测定。以峰面积为纵坐标，栀子苷含量g为横坐标，回归方程为：Y=1511.8X-42.55r=0.9998(n=5)，线性范围0.2935.86g。2.8.3含量测定精细汲取SBE、AE、E供试液B，各进样20l，按上述色谱条件，依法测定计算栀子苷的含量。结果见表1。2.91000D提取物测定精细汲取SBE、AE、E样品液各10

13、.0l，分别置枯燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105烘至恒重，计算1000D提取物得率。结果见表1。2.10实验结果和数据综合评判方法将小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮、1000D提取物等6项指标汇总，按以下公式进展标准化处理xi.j=(xi,j-j)/sj。式中xi.j为标准化后的值，xi.j为样品液i中成分j的含量，j为各种样品液i中成分j的平均值，为成分j的标准偏向。根据各指标在工艺选择中的主次，给予不同的加权系数，即得综合评价指标Y值，Y=(小檗碱+黄芩素+栀子苷)35+(总生物碱+总黄酮)23+1000D提取物2。Y值大者为佳。结果SBEY值最大，结果见表1。3讨论3种提取液

14、小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮、1000D提取物得率等6项指标综合评判Y值的大小顺序为：SBE液AE法E液，提示本制剂的方药提取用SBE法为佳。本研究是对提取纯化的最终产物“1000D提取物，作小檗碱、黄芩素、栀子苷、总生物碱、总黄酮的测定，即使对单体成分一无所知的中药及其复方，也可以用1000D的提取物量为指标，选择提取工艺和控制质量，这符合中医药的整体观，对中药现代化研究是很有借鉴意义的。以小檗碱、黄芩素、栀子苷这3个有效成分为指标，同时以总生物碱、总黄酮、1000D提取物为指标，综合评价选择提取工艺。这样做表达了方剂药效物质提取中，坚持“有成分论，不唯成分论，发挥活性混合物综合作用特点的SBE法观点。同时也有利于用单体成分控制制剂的质量。【参考文献】1张瑞亭,张兆旺,孙秀梅.思维方式的转换与中药“半仿生提取法J.中国中药杂志，1997,22(9):542.2张兆旺,孙秀梅.中药方剂药效物质提取新技术对“半仿生提取形式的讨论J.世界科学技术中药现代化,2000,2(4):53.3王晓林，钟方丽.HPL测定复肾宁片中盐酸小檗碱的含量J.中成药,2022,30(3):463.4张学兰,张兆旺，徐