沙苑子中沙苑子苷A对照品的制备及鉴定

1、沙苑子中沙苑子苷A对照品的制备及鉴定【摘要】目的建立从沙苑子中制备沙苑子苷A对照品的方法。方法采用大孔树脂富集、聚酰胺柱色谱、硅胶柱色谱和重结晶方法对沙苑子80乙醇提取物进展别离纯化，通过S、IR、UV、1H-NR和13-NR进展构造鉴定，通过TL和HPL对对照品进展纯度检测。结果从沙苑子中别离、纯化出沙苑子苷A对照品，质量分数99.0。结论该方法制备的沙苑子苷A对照品符合中药化学对照品的相关要求，可作为沙苑子药材及其制剂质量控制，以及中药药效物质根底研究用的化学对照品。【关键词】沙苑子；沙苑子苷A；对照品沙苑子为豆科植物扁茎黄芪AstragalusplanatusR.Br.枯燥成熟的种子1，

2、能温补肝肾、固精、缩尿、明目，用于治疗肾虚腰痛，遗精早泄，白浊带下，小便余沥，眩晕目昏；始载于?图经本草?，名为白蒺藜。沙苑子主要含有黄酮类、三萜类、有机酸类、氨基酸等。黄酮类成分是沙苑子的主要有效成分，具有许多药理活性。近年来研究认为沙苑子总黄酮可保护大鼠重要器官免受运动损伤，明显进步大鼠的运动才能2，抑制肝纤维化形成3，抗肿瘤46，此外对SHR和RHR78有明显的降压作用。但有关沙苑子的质量标准中，由于缺少化学对照品，尚无沙苑子黄酮含量控制指标，2022年版的?中国药典?中沙苑子的质量标准也仅有性状、显微、荧光检测等内容。为了进一步研究和完善沙苑子的质量标准，迫切需要研制一种或多种对照品。

3、沙苑子苷A是沙苑子黄酮的主要特征性成分，且在沙苑子中的含量较高，也是沙苑子保肝抗肝纤维化的主要有效成分之一。本文从沙苑子中提娶别离和纯化沙苑子苷A，制备沙苑子苷A对照品，为制定和完善沙苑子及其制剂的质量标准提供沙苑子苷A对照品。2方法与结果2.1沙苑子苷A的制备工艺取沙苑子粗粉3kg，用10倍量石油醚回流脱脂，脱脂药粉挥干，用10倍量的80%乙醇提取2次，1.5h/次,过滤，合并滤液，回收溶剂后，加水稀释至3000l，通过ZT-5黄酮大孔吸附树脂，依次用水及50%乙醇洗脱，搜集50乙醇洗脱部位，回收溶剂，枯燥，即为沙苑子总黄酮40g。取总黄酮加水溶解，过滤，经聚酰胺柱层析，用水及不同浓度乙醇梯

4、度洗脱，搜集水洗脱部位，上硅胶柱，用醋酸乙酯甲醇梯度洗脱，醋酸乙酯甲醇(102)洗脱部位析出沙苑子苷A结晶，甲醇进展屡次重结晶，得淡黄色针状结晶700g。2.2对照品的理化性质及构造鉴定结晶经显微熔点测定仪测定，p279280未校正，盐酸镁粉反响呈樱红色；酸水解后溶液遇斐林试剂呈阳性反响，三氯化铝反响呈黄色；氧氯化锆枸缘酸反响鲜黄色消退，说明有5位羟基无3位游离羟基。提示为黄酮苷类化合物。光谱分析结果如下：UVneH：266.2，333.8；IRKBRAX3371.8H，1655.0，1597.2，1500.7Ar：1253.8(Ar-),1076.4,1022(-)；Ei-S/e:(苷元)3

5、00162H，271，121；arinerass(/2)625.18(624+1);463.12(-162+H);274.27;206.99说明该化合物含两个六碳糖。13-NR:见表1。1H-NR:12.569(1H,s,5-H),8.169(2H,d,J=9Hz,2,6-H,7.16(2H,d,J=9Hz,3,5-H),6.80(1H,d,J=1Hz,8-H),6.41(1H,d,J=1Hz,6-H),5.50(1H,d,J=7Hz,gl1-H),5.39(1H,d,J=7Hz,gl1-H),3.87(3H,s,7-H3)。根据以上数据分析，与文献2报道的沙苑子苷A一致。见表1及图13。表1

6、沙苑子苷A-NR数据略转贴于论文联盟.ll.2.3对照品的纯度检测2.3.1对照品的杂质检查薄层色谱法检查：取适量沙苑子苷A对照品，50%乙醇制成1g/l的溶液，以醋酸乙酯醋酸水1022上层液和氯仿甲醇水6.53.51为展开剂，点样量5，10，20l，在硅胶G板上进展展开，以1%All3乙醇溶液为显色剂，分别在365n紫外灯和日光下观察。另于聚酰胺薄膜上，以丙酮水12进展展开，1%All3乙醇溶液为显色剂，在365n紫外灯下观察。结果说明，在3种展开剂中对照品均为一个黄绿色斑点，未见杂质斑点。比移值Rf分别为：0.31，0.82，0.36。高效液相色谱检测：色谱柱VP-DS1504.6,5；分

7、别以乙腈1%乙酸2278，1684，1486为流动相；流速：1l/in；柱温：40；检测波长：266n，对照品溶液质量浓度为0.1g/l,进样量20l。结果说明，在3种流动相下对照品均为一个主峰，保存时间分别为:7.45,16.71，28.46in。改变流动相分析时未出现异常峰。2.3.2面积归一化法纯度检查色谱柱VP-DS1504.6,5；分别以乙腈1%乙酸2278,1684，1486为流动相；流速：1l/in；柱温：40；检测波长：266n，取0.1g/l的溶液进样量20l。采集时间比保存时间延长1倍以上，检测结果经峰面积归一化法计算，质量分数为99.2，99.4，99.0。RP-HPL色谱图见图4。2.3.3二极管阵列检测器(PDA)纯度检查在“231项中色谱条件下，200800n用PDA检测器记录色谱图，检查主成分峰的纯度见图5。测定结果说明，主成分峰的纯度因子为999.834；五点光谱图完全重合，说明主成分峰为单一物质峰。3讨论实验中我们采用石油醚脱脂，80乙醇提取，ZT5黄酮大孔吸附树