病理学检验课件

1、病理检验技术12级检验（1）班01号学号：2012130801001姓名：蔡枝奇第六章 组织制片技术 第一节 组织块的处理 第二节 切片机具与切片一、取材 一、切片机二、固定和固定液 二、切片刀三、洗涤、脱水、透明 三、磨刀与被刀四、浸蜡、包埋 四、切片学 习 目 标1.了解常用组织切片的种类2.熟悉组织切片制作的基本程序3.掌握常用固定液的配置和应用4.熟练进行洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、封片等操作第一节 组织块的处理一、取材定义：按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程，称为取材（一）取材的配合 病理检验技术员取材时的职责是：配合病理医师对病变组

2、织进行肉眼检查，准确记录病理医生检查时描述的病理改变，按照病理检验的需要，选择和确定取材的部位和块数。病理检验技术人员要及时对切取的组织进行编号或标记，并在病理检单上做好记录，以便病理医生镜检时查对。取材后的标本应加足固定液，按编号存放，以备复查之用。（二）注意事项1.避免组织结构变形切取组织的刀、剪应锋利，刀体宜薄，并有足够的长度。2.组织块大小适当通常切取的组织块厚约0.20.3cm，大小以1.01.5cm1.01.5cm为宜。3.及时取材4.标明包埋方向5.染色、包裹小标本6.充分暴露病灶取材应避免过多的坏死组织或凝血块7.确定取材部位8.清除多余组织9.重复取材10.认真核对（二）固定

3、方法细胞的主要组成成分是蛋白质、脂类及糖类，应根据观察目的和诊断要求，选用相应的固定液和固定方法，使其凝固或沉淀。常用的固定方法有以下几种： 1.浸泡固定法2.注射、灌注固定法3.微波固定法4.蒸气固定法（三）常用固定液1.单纯固定液是指有一种化学物质组成的固定液。此类固定液包括：重铬酸钾、苦味酸、丙酮、氯化汞、铬酸、锇酸等。常用的有：甲醛（福尔马林）、乙醇、乙酸（冰醋酸、醋酸)（3）乙醇-甲醛液（AF液）适用于皮下组织中肥大细胞的固定。固定后的组织不必经低浓度逐级乙醇脱水，可直接移入95%乙醇脱水，也不用水洗，缩短了脱水时间。配方： 95%或乙醇脱色 90mL 40%甲醛 10mL（4）Bo

4、uin液是一种常规用于活检标本固定的良好固定液，适用于大多数组织的固定，尤其适用于结缔组织染色。（5）Zenker液适用于一般组织固定，胞核和胞质染色均清晰，对免疫球蛋白染色最好，也可用于病毒包涵体、某些肿瘤标本的固定。（四）固定的注意事项1.及时固定取材后立即将组织块放入固定液中2.固定容器宜大3.固定液应足量4.防止组织变形5.确定恰当的固定时间固定时间应依据组织块的大小、厚度以及固定液的种类、环境温度而定。组织块大小为（1.01.5cm）1cm（0.20.3cm）时，固定时间以1224h为宜。三、洗涤、脱水、透明（一）洗涤定义：用水或乙醇等将组织经过固定处理后，与组织结合的固定液及沉淀物

5、清洗掉的过程，称为洗涤。1.洗涤目的除去未与组织结合的固定液及沉淀物。2.洗涤的方法（1）含水固定液的洗涤方法：常用的含水固定液是甲醇溶液，用自来水冲洗即可。（2）含乙醇固定液的洗涤方法：一般不需要洗涤，如果需要洗涤，应使用与固定液中的乙醇浓度相近或略低的乙醇洗涤。（3）特殊固定液的洗涤方法:略2.常用的脱水剂脱水剂能同时以任何比例雨水和头，透明剂混合。常用的有：乙醇、正丁醇、丙酮等，其中乙醇最常用。3.脱水的方法一般把脱水剂配成各种浓度，自低到高浓度依次进行使组织中所含水分依次减少直致被脱水剂取代。4.自动脱水机（三）透明定义：用某些化学试剂（如二甲苯等）将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡

6、和包埋，因组织块浸入这些试剂后常呈半透明状，故称透明（或煤浸）。所使用的化学试剂称为透明剂。1.透明目的2.常用的透明剂可使用的较多，有苯、甲苯、二甲苯（最常用）、三氯甲烷、汽油、香柏油（透明时间长达24h，所以不常用）等，多数透明剂对人体有害，使用时应注意防护。3.常用透明方法将脱水后的组织块先用乙醇-二甲苯混合液处理或直接浸入透明剂中，置换透明剂23次既能达到透明目的。石蜡浸蜡方法石蜡有高熔点和低熔点之分，一般使用的是熔点为56以上的石蜡。要显示酶和保存抗原活性性时，则需使用熔点为54以下的石蜡。常规制片普通用熔点为5658旳石蜡。（二）包埋定义：用石蜡或其他包埋剂将组织包成一定形状，使其

7、具有一定的硬度和韧度，便于切成薄片的过程，称为包埋。（1）石蜡包埋法常用的有：常规石蜡包埋、胃镜标本的包埋、液体标本的包埋、快速石蜡包埋法。（2）火棉胶包埋法常用于大块组织的制片（如整个眼球或神经组织等），用火棉胶包埋可避免纤维组织和肌肉组织的过度硬化，减少纤维组织的收缩和扭转，有利于保存原有的组织结构。（3）碳蜡包埋法（4）明胶包埋法包埋的注意事项（1）确定包埋面（2）同一蜡块内包埋多个组织块时组织块的性质应相同（如同属软组织），组织块的大小、厚薄要相近，且包埋方向要一致，组织块间的距离不能过大。（3）难切的组织（如皮肤、骨等）以及需切连片的组织均应单独包埋。（4）神经、脊髓及需要定向包埋的

8、组织应注意组织块的相互关系。（5）操作应迅速（6）若将管腔或空洞标本与小标本包埋在一个蜡块内时，不能将小标本放入官腔或空洞标本内。扭转式石蜡切片机冰冻切片机适用于病理组织石蜡切片的刀片切片机与刀片的认识实验室照的图石蜡切片机切的切片冰冻包埋机总结组织制片的过程收集标本（活检、尸检、动物实验）取材固定切块（110.3自来水冲洗12h）组织脱水（75乙醇、85乙醇、95乙醇I、95乙醇II、100乙醇I、100乙醇II，低溶度乙醇24h,高溶度乙醇1h）组织透明（二甲苯30s）浸蜡（软、硬蜡、大组织416h,组织24h）包埋冷却修蜡块焊蜡块切片贴片烤片切片脱蜡切片染色（常规染色HE）第一节 常 规

9、 染 色回肠HE染色图片人脾脏HE染色图片备注：常规染色或普通染色简称HE染色。HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一。大肠癌异变掀窝病灶HE染色宫颈液基HE染色HE染色43岁宫颈刮片染色中常见问题及注意事项：一、固定不当二、脱蜡不净三、染色与分化不当四、脱水不彻底或过度五、封固及封固剂使用不当六、切片脱落网状纤维染色图片网状纤维染色：用浸银法可将纤维染成黑色，故又称嗜银纤维网状纤维染液网状纤维染色显示瘤组织被网状横纹肌染色图片横纹肌的染色方法：有PTAH法、Masson氏液染色法、Uan Gieson氏法等。可见横纹肌母细胞及梭形带横纹肌染色锇酸组织块染色备注：锇酸与脂质结合成黑色。电镜下的锇酸染色在锇酸染色的切片上有髓神经糖原染色图片备注：用于鉴别淋巴系统细胞增生的性质，鉴别红细胞系统增生的性质。染色肝细胞 肝糖原累积病糖原染色第三节 染色前