HPV感染管理的GAP与研究进展培训课件

1、 SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 第26届2010加拿大蒙特利尔第27届2011德国柏林第28届2012波多黎各圣胡安第29届2014美国西雅图第30届2015葡萄牙里斯本第31届2017南非开普敦世界上最权威的HPV与宫颈癌研究学术组织（1982 美国特拉华)International Papillomavirus Conference & Clinical Workshop国际HPV学术会议暨临床研讨会 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Insti

2、tute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 第31届国际HPV学术大会 2017 2/283/4，南非开普敦 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 高危型HPV感染有效管理的困惑与探索 一、为什么国际会议首提治疗药物的研制？二、什么是高危型HPV感染的必要条件？三、“一过性感染”与“持续性感染”形成的机制？四、“持续性感染”难以自我清除，E6/E7是“靶点”五、“预防性疫苗“与”治疗药物“是一对孪兄弟六、高危HPV感染有效管理，如何把握好“度”？七、“分子靶向多重抗HPV核心技术”

3、与“瑞贝生” SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 高危型HPV感染有效管理的困惑与探索 生命科学，是一门实验性科学循证 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 宿主特异 性传播 双受体 不进入血液 一、为什么“第31届国际HPV学术会议” 首提“治疗药物的研制”？ SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 高危型HPV感染有效管理的缺口及研发战略 细胞学筛

4、查hrHPV筛查hrHPV预防性疫苗GAP 治疗药物缺口GAPhrHPV治疗性疫苗缺口高危HPV感染有效管理的“GAP”（缺口） SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 高危型HPV感染有效管理的缺口及研发战略 第31届国际HPV学术会议药物研制专题会议8位世界顶级科学家主持会议 2017年2月28日 南非 开普敦缺口1：预防性疫苗对hrHPV检测阳性患者无治疗作用，特别是持续性感染患者，由于未能及时清除高危HPV感染，甚至导致癌变。缺口2：（1）15种高危HPV病毒，疫苗预防保护的亚型有限:（2）临床发现，高危H

5、PV感染转阴后，还会被同一亚型再次感染，显示人体对HPV感染的免疫保护能力有限。 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 宿主特异 性传播 双受体 不进入血液 二、什么是高危型HPV感染的必要条件? SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA宿主特异 性传播 双受体 不进入血液 1、高危型HPV感染的二个必要条件(1)高危型HPV游离态病毒；(2)宫颈黏膜创伤（含机械创伤和感染创伤）。 SR-Life Sciences Institute,

6、 SR-Life Sciences Institute, USA宿主特异 性传播 双受体 不进入血液 2、高危型HPV感染的主要途径为性传播男传女：1 传 3女传男：3 传 1母女垂直传播 血液传播 性传播 医源性传播 密切接触传播产道HPV病毒经婴儿口腔感染密切接触病毒感染黏膜调查显示，80%多的妇女一生中会感染高危型HPV，其中一部分会自愈，称为“一过性感染”，还有约20-30%的感染患者很难自我清除，称为“持续性感染”，这部分高危HPV持续性感染患者即为宫颈癌发生的高风险人群。 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute,

7、 USA宿主特异 性传播 双受体 不进入血液 HPV病毒进入细胞过程模式图 ：第一受体：基底膜HSPG ；第二受体（细胞受体）未定。A、病毒结合至基底膜上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖受体 B、暴露L2易感位点，被前体蛋白转化酶（弗林蛋白酶或PC5/6）切除C、L1的未暴露区与未知的第二受体结合 3、高危型HPV感染宿主细胞过程 （双受体，不进入血液） SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 整合性感染 宫颈病变 三、“一过性感染”与“持续性感染” 形成的机制？ SR-Life Sciences I

8、nstitute, SR-Life Sciences Institute, USA一过性感染 持续性感染 整合性感染 宫颈病变宫颈基底细胞层由2种细胞构成：1）基底干细胞 （The Stem Cell） 基底干细胞具有无限的分裂复制潜力，其每次分裂生成的2个细胞，一个仍为干细胞，以保持和维持干细胞组织；另一个为TA细胞。 EPU Model( Epidermal Proliferative Unit)干细胞TA细胞 1、基底细胞分裂复制模式2）TA细胞 （The Transit Amplifying Cells） TA细胞经过2次分裂后，作为不再分裂的女儿细胞，逐步上移，形成粘膜复层鳞状上皮。

9、 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA一过性感染 持续性感染 整合性感染 宫颈病变决定“一过性感染”与“持续性感染”的关键因素2、高危型HPV“一过性感染”若hrHPV感染TA细胞，导致一过性感染。 感染HPV的TA细胞，经过2轮分裂后，作为不再分裂的女儿细胞，逐步上移，形成粘膜鳞状上皮,病毒随死亡脱落细胞自我清除。 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA一过性感染 持续性感染 整合性感染 宫颈病变决定“一过性感染”与“持续性感染”的

10、关键因素3、高危型HPV“持续性感染”若hrHPV感染基底干细胞，导致持续性感染。高危型HPV基因组以两种状态存在于被感染的干细胞内：1）附加体方式（无症状感染、活动性感染），2）与宿主细胞基因组整合状态，引发癌变。无症状感染非整合状态附加体活动性感染HPV大量复制高级宫颈上皮内瘤变低级宫颈上皮内瘤变高级宫颈上皮内瘤变 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA一过性感染 持续性感染 整合性感染 宫颈病变4、高危型HPV“整合性感染”（Integrated Infection）hrHPV 基因组宿主细胞基因组基因整合（

11、随机）E2插入灭活，E6/E7表达失控HPV 基因与宿主细胞基因组整合镶嵌在人基因组中的E6/E7基因过量表达E6/E7蛋白与P53/RB蛋白结合，使其失活，细胞分化失控，致癌变。E6E7 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA一过性感染 持续性感染 整合性感染 宫颈病变高危HPV持续性感染很难自我清除干细胞TA细胞 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA宿主特异 性传播 双受体 不进入血液 Cervical Cancer 角质层 透明

12、层颗粒层 棘细胞层基底层 真皮28-56天5、迄今临床上还没有准确判定“一过性感染” 或“持续性感染”诊断技术宫颈复层鳞状上皮结构及细胞上移周期在6个月-1年时限内，高危HPV检测2次阳性患者Ref. 北京协和医院数据 空白对照组自我转阴率18%瑞贝生一个周期转阴率62%0.618 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 四、“持续性感染”难以自我清除， E6/E7基因是治疗靶点 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Scie

13、nces Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 高危型HPV感染基底干细胞后，病毒基因组在被感染干细胞中以附加体、或以与宿主细胞基因组整合的状态存在，很难自我清除。2017“第31届国际HPV学术会议”根据大量的基础研究，明确了其治疗药物研制的靶点是“E6/E7”基因第31届国际HPV学术会议药物研制专题会议8位世界顶级科学家主持会议 2017年2月28日 南非 开普敦早期启动晚期启动 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 疫苗给未感染高危HPV的女性提供保护，药物

14、为已感染病毒的患者予以清除 五、高危型HPV预防疫苗与治疗药物 是一对孪兄弟 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA疫苗给未感染高危HPV的女性提供保护，药物为已感染病毒的患者予以清除 “预防性疫苗”与“治疗药物”是高危HPV感染管理的一对“孪兄弟” 预防性疫苗专注为未感染高危HPV的女性提供保护 治疗药物为已感染高危HPV患者提供治疗手段 SR-Life Sciences Institute, 中国森瑞谱生命科学药业 SR-Life Sciences Institute, Inc.,USA疫苗给未感染高危HPV的

15、女性提供保护，药物为已感染病毒的患者予以清除 中国森瑞谱生命科学药业 SR-Life Sciences Institute, Inc.,USA 中国森瑞谱生命科学药业 SR-Life Sciences Institute, USA目前美国FDA批准上市的抗病毒药物与疫苗疫苗单纯疱疹病毒 中国森瑞谱生命科学药业 SR-Life Sciences Institute, USA预防感染为先主，治疗感染在期待，筛查实施是基础，CIN管理很很重要六、高危型HPV有效管理，如何掌握好 “度”？ SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute,

16、USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 根据国际研究进展和中国国情，著名妇产科专家郎景和院士在2017年第三届CSCCP大会上，提出对高危HPV感染有效管理的四大关键：1、预防感染为先主，2、治疗感染在期待，3、筛查实施是基础，4、CIN管理很重要。为现阶段我国宫颈癌防治工程的发展指明了方向。 著名妇产科专家郎景和院士 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA预防感染为先主，治疗感染在期待，筛查实施是基础，CIN管理很重要 （-）P16（+）从病的角度看 癌前病变一过性感染持续性感染 整合性感

17、染癌变CINICINIICINIII 从传染病角度看癌变mR NADNA 高危HPV感染三节点“感染，整合，癌变” SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 七、“分子靶向多重抗病毒技术”与“瑞贝生” SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 2000年，美国森瑞生命科学研究所（SR Life Sciences Inst

18、itute）正式立项，专攻抗高危型HPV感染药物的研究。美国国立卫生研究院(National Institutes of Health，NIH ）美国森瑞生命科学研究所SR Life Sciences Institute 项目核心研发团队 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 团队学术带头人：张春发博士(1)日本东京农业大学（TUA）病毒分子生物学博士，国际HPV学会会员。(2)美国国立卫生研究院（NIH）医学病毒分子生物学博士后、研究员。(3)热带生物技术

19、国家重点实验室（1999-2005年）主任，研究员，博士生导师, 美国森瑞生命科学研究所所长。(4)国家有突出贡献中青年专家。(5)国务院特殊贡献专家津贴获得者。(6)国家发明三等奖5项，科技进步奖2项。(7)被The Intrenational Whos Who of Intellectuals（国际著名知识分子名人录）收录。(8)被Whos Who in The World（世界名人录）收录。(9)在世界上首次创建了“ApNPV 核型多角体病毒表达载体系统”，并获国家发明专利。 (10)带领团队在国际上创新研发了防治宫颈癌新药“REBACIN”，彻底改变了高危型HPV感染无药可医的局面，并

20、获得4项国家发明专利授权。 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 学术带头人：徐森根博士 (1)中科院上海生理所博士。(2)英国剑桥大学博士后。(3)日本东京帝国大学客座教授。(4)美国国立卫生研究院（NIH）资深研究员。(5)美国生物物理学会会员，医学生物物理学专家。(6)2005年被英国剑桥国际传记中心选为“二十一世纪2000名杰出科学家”。(7)1995年被英国剑桥国际传记中心选为 “杰出成就者”。(8)1986年获得了日本推动科学协会颁发的“外国科学

21、家奖”。(9)1984年获得了英国剑桥M. F. Perutz 基金会颁发的“访问学者奖”。(10)1982年获得了中国科学院颁发的“研究成就奖”。（美籍华人） SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 (1)美国生化与分子生物学学会会员。(2)日本东京农业大学分子生物学博士。(3)美国国立卫生研究院（NIH）博士后，研究员。(4)在美国国家卫生研究院工作期间，连续两年获得美国国家卫生研究院杰出博士后奖。(5)2003年10月，荣获美国国立卫生研究院（NIH）个

22、人成就奖，是此次获此殊荣的惟一亚裔科学家。其所从事的研究项目具有国际领先水平。 学术带头人：张颖博士 、王桂玉博士 (1) 美国西北大学生物系分子生物和细胞生物专业访问学者。(2) 美国国立卫生研究院（NIH）博士后。(3)多年来一直从事生化与分子生物学领域的研究，在国内外学术杂志上发表了多篇研究论文和专著，指导博士、硕士研究生多名，具有坚实的生命科学药物研发基础和丰富的研发经验。（美籍华人） SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 (1)“热带生物技术国家重

23、点实验室”分子生物学专业博士。(2)“海南省蛋白质工程药物重点实验室”主任。(3)专业基础坚实，思路清晰，分析和解决问题能力强。 (4)在国内核心期刊发表多篇学术论文。(5)技术专长：生命药学、医药分子生物学、生物技术制药及其相关技术研发。(1)德国马格德堡大学医学院博士。(2)美国乔治华盛顿大学医学中心博士后。(3)美国加州大学旧金山分校研究员。(4)美国德州大学奥斯丁分校研究员。(5)长期从事医药分子生物学的研究，在国际学术杂志上发表20多篇论文，利用分子生物学的先进技术，从事生命科学药物研发。 学术带头人：邓柳红博士、吴代飞博士 （美籍华人） SR-Life Sciences Insti

24、tute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 2、直接杀灭游离态病毒 1、瞄准“靶点”1、抑制E6/E7基因 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 2、建立“核心技术”“分子靶向多重抗HPV核心技术”4激活局部细胞免疫,清除高危型HPV潜伏性感染1抑制E6/E7基因表达,清除高危型HPV持续性 感染封闭病毒受体,修复黏膜3杀灭游离态HPV病毒粒子2杀灭游离态HPV

25、 病毒 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 瑞贝生 5支装瑞贝生 2支装 2、研发专利产品“瑞贝生” SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 3、委托中国最权威第三方做药效学验证 中国疾病预防与控制中心病毒病预防控制所 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Scienc

26、es Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 REBACIN10.25 g/ml20.07 g/ml30.02 g/ml40.01 g/ml5Mock M100bp DNA Ladder 1 2 3 4 5 M M 1 2 3 4 5Expression of HPV18_E7Expression of HPV18_E6 1 2 3 4 M M 1 2 3 4 5Expression of HPV16_E6Expression of HPV16_E7TC-1 CellsHela Cells 1）抑制 HPV E6/E7基因表达（a. 体外

27、实验） 体外实验结果，REBACIN（瑞贝生）对 HPV16 E6及E7基因（TC-1 细胞）和HPV18 E6及E7基因（ HELA细胞）的表达具有抑制作用，数据呈量效关系。 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 We further examined the suppressive effect of REBACIN on the growth of tumor induced by HPV16 and HPV18 infection in a

28、 mouse model. TC-1 or Hela cells pre-treated with different doses of REBACIN were used to induce tumor in mouse followed by a 28-day regimen that includes three sequential subcutaneous injections of REBACIN at various doses. The isolated tumors were weighted and compared with the one without treatme

29、nt. Treatment GroupREBACIN Dose# of Mice UsedTumor Weight (gram)Repression (%)P Value10.25 g/ml250.28 0.0591.84%0.0520.07 g/ml250.69 0.0779.88%0.0530.02 g/ml251.03 0.0269.97%0.0540.01 g/ml251.68 0.2651.02%0.055Control253.43 0.26 1 2 3 4 ControlREBACIN Dose# of Mice Shown as RepresentativeREBACIN （瑞贝

30、生）抑制HPV16 感染引发的SCID 小老鼠肿瘤高达 91.84% (p0.05). 1）抑制 HPV E6/E7基因表达（b. 动物体内实验）抑制HPV16/18E6/E7所致SCID小鼠肿瘤的生长 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 AVF抗病毒因子抗病毒的机制是：脱去病毒DNA特定结构的腺嘌呤，致使病毒特异蛋白质合成受到阻碍，最终导致侵入的病毒由于不能利用宿主细胞的蛋白质合成系统合成自己所需的蛋白质而随之消亡.AVF因子分子结构及电泳和H

31、PLC图谱AVF因子抑制特异蛋白合成 2）直接杀灭HPV姊妹病毒（a. 体外实验） SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 hrHPV治疗药物 Cervical Cancer Viral Suppression (%)0%20%40%60%80%100%0.7g/kg1.4g/kgAciclovirTreatmentTotal MiceViral Positive MiceTIC50 (g/kg)BeforeAfterREBACIN (g/kg)1.4303071.12

32、0.7303018Aciclovir30309由于HPV病毒迄今还不能体外培养，特以HPV姊妹病毒HSV作抗病毒实验：1、REBACIN（瑞贝生）对受试小鼠病毒性（HSV-II）阴道炎抑制率为93.3%，阳性对照药物阿昔洛韦为73.3%，病毒阴性对照为0。2、REBACIN对受试病毒有显著的抗病毒作用，其对HSV-II感染治疗率为76.6%，阳性对照药物阿昔洛韦为70%，病毒阴性对照治疗率为0。数据3次重复一致，呈典型量效关系。Viral positive rates before vs. after treatment 2）直接杀灭HPV姊妹病毒（b. 动物体内实验） SR-Life Sci

33、ences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 1、抑制 hrHPVE6/E7 基因（1）体外细胞实验结果，能有效抑制HPV16型和18型病毒致癌因子E6/E7的表达；（2）动物试验结果，对HPV16和HPV18病毒E6/E7致癌基因表达所致SCID小鼠肿瘤生长的抑制率分别为91.84%和83.75% (p0.05)。 中国疾病预与防控制中心病毒病预防控制所药效学研究结论 2、直接杀灭游离态hrHPV姊妹病毒 对小鼠病毒性（HSV-II）阴道炎的抑制率为93.3%，清除率为76.6% （阳

34、性对照阿昔洛韦的抑制率为73.3%，清除率为70%）； SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 SR-Life Sciences Institute, SR-Life Sciences Institute, USA 一过性感染 持续性感染 宫颈病变 HPV疫苗 治疗药物 4、临床验证清除高危HPV病毒持续性感染 经北京协和医院等国内顶级妇科医院对清除“高危HPV持续性感染”临床观察，结果基本一致： 1）使用“瑞贝生”一个周期（3个月），有效率85%，转阴率62%，使用2个周期，有效率达95以上，转阴率70%以上。 2）空白对照组，自我转阴率为18-19%。 SR-Life Sciences Institute, SR-Life S