蛋白质含量测定(凯氏定氮法)

1、时间：2021.03. 06*中妥解鉛处曲时间：2021.03. 06创作：欧阳道-、目的与要求1、学习凯无定氮出测定蛋自质的原理。2、拿握凯氏走氮出的操作技术，包括样的谄化处 理、蒸镭、满定及卷自质含量计算等。二、卖验原理養自质是含氮的化合杨。食与浓硫酸和傕化利共 同加热谄化，使蛋自质分解，产生的氣与硫酸结合生成 硫酸馁，勿亦涓化液中，然后加喊蒸馆使氣游离，用硼 酸吸收后，再用盐酸棕准嫁液譎定，根粧酸的谄耗量来 乘以養自质换算糸数，即得養自质含量。因为Z中除蛋自质外，还含有其它含氮物质，所 以此養自质称为粗養勺。三、仪器与试利硫酸铜(CuSO45H20丿 硫酸钾 硫酸(密度为 1.8419g

2、/L) 硼酸溶液 C20g/L)氢氧化钠济液(400g/L)0.01mol/L盐酸榇准满定涿液O混合指示试別：0.1%甲昱红乙涿液液1份，与0涣 甲酚绿乙醸嫁液5份临用时混合。微量文氮蒸镭裝置：如图3所示。图3微量凯氏走氮裝置1、电炉;2、水蒸毛发生器C2L平底烧 瓶丿；3、螺炎夹a；4、小漏斗及棒状玻璃瘪(样入口处丿；5、反应宝；6、反应宝外层；7、橡皮管及螺炎夹b； 8,冷凝管；9、蒸 馆液接收瓶。四、卖验步骤1、样凤谄化称取样约2.00g ( 0.00 lg丿,移入干燥的 100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸鋼和6g硫酸钾，稍 揺匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以 45角斜

3、支于有小孔的石榨网上，使用万用亀炉，淮.通 凤橱中加热葡化，开始时用低温加热，待内彖炀全部炭 化，泡沬停止后，再升嵩温度保持微沸，琦化至液体呈 蓝绿色潦请透朗后，继续加热0.5h,取下放冷，小心加 20mL水，放冷后，无损地转移到100mL彖量瓶中，加 水定彖至刻度，混匀备用，即为谄化液。试刘空自卖验：取与样岚谄化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行询化，冷却，加水定 彖至100mL,得试利空仓琦化液。2、文氮裝置的检查与冼涤检查微量定氮裝置是否裝好。在蒸宅发生瓶内裝水 约三分之二，加甲基红指示利数满及数毫升硫酸，以保 持水呈酸性，加入数耘玻璃珠（或沸石丿以防止暴沸。测走前走氮裝置

4、如下法冼涤23次：从样器进口入 加水适量（约占反应管三分之一体积丿通入蒸九煮沸， 产生的蒸九冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子a,使反应 管中的废液倒吸流到反应宝外层，打开夹子b由椽皮管 排出，如此数次，即可使用。3、喊化蒸镭量取硼酸试別20mL于三角瓶中，加入混合指示利 23厲，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，柱螺炎夹 a关闭，螺炎夹b开启的状态下，准确吸取lO.OmL样 谄化液，由小漏斗流入反应宝，并以10mL蒸馆水洗涤 进样口流入反应宝，棒状玻塞塞紧。使10mL氢氧化钠 洽液倒入小玻杯，提起_玻塞使其缓缓流入反应宝，用少 量水冲冼立即将玻塞盖坚，并加水于小玻杯以防漏毛， 开启螺炎夹a,关闭螺炎

5、夹b,开始蒸镭。通入蒸九蒸 腾lOmin后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馆2mino然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下三角 瓶，准备譎足。同时浹取lO.OmL试利空仓葡化液按上法蒸镭操作。4、样譎定以0.01mol/L盐酸捺准溶液譎定至灰色为终点。5、数擔记录项目第一次第二次第三次样品消化液（mL）滴立消耗盐酸标准溶液（mL）消耗盐酸标准溶液平均值（、T、五、结果计算式中 X样蛋自质含量（g/ioog丿；V1样满走谄耗盐酸捺准涿液体积（mLJ ；V2空自满定琦耗盐酸榇准谕液体积CmLJ ；c盐酸榇准譎走徐液浓度（mol/LJ ；0.0140l.OmL jt c（HCl） = 1 .OO

6、Omol/L 准譎文嫁液柏当的氮的质量（gJ ;m 样品的质量（g丿；F氮换算为卷勺质的糸数，一般食物为6.25；乳制醃为6.38；面粉为5.70；嵩梁为6.24；抡生为5.46；朱为5.95；大豆及其制为5.71；肉与肉制氐为6.25 ；大麦、小采、熱爰、裸表为5.83；芝麻、向目葵5.30。计算结果保紹三住有效数字。六、注意事项及说朗1、本由也适用于半固体试样以及液体样检测。半固 体试样一般取样范爾为2.00g5.00g；液体样取样 lO.OmL25.0mL （约柏当氮30mg40mg丿。若检测液体 样,结果以g/100mL表示。2、葡化时，若样含無嵩或含脂及较多时，注意控制 加热温度，以免大量泡沬喷出凯无烧瓶，凌成样损 失。可加入少量辛醇或液体石蜡，或硅谄泡利類少池集 产生。3、荫化时应注意炎转凯氏！烧瓶，将附柱瓶壁上的碳粒 冲下，对样烙彻底葡化。若样不易谄化至潦请透朗， 可将凯氏烧瓶中涿液冷却，加入数厲过氧化氢后，再继 续加热葡化至完全。4、硼酸浹