抗Ⅱ型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义

1、抗型胶原抗体的检测及其在类风湿关节炎中的意义【摘要】目的理解抗型胶原抗体在类风湿关节炎(RA)中的临床意义。方法以改进的酶联免疫吸附法(ELISA)检测179例RA患者和171例其他风湿病患者的血清IgG型抗天然及抗变性型胶原抗体程度。结果RA患者抗天然和抗变性型胶原抗体阳性率各为22.3%和36.9%，早期RA患者各为30.0%和36.7%。其他风湿病患者中各为3.5%和31.6%，安康人二者均为2.5%。抗天然型胶原抗体阳性RA患者类风湿因子检出率、患者对病情活动性评价高于阴性组(P0.05)。抗变性型胶原抗体和抗天然型胶原抗体同时阳性RA患者的RP平均程度较高。结论抗天然型胶原抗体可以作

2、为RA的一个辅助诊断指标。抗天然与抗变性型胶原抗体的检测有助于判断RA病情活动性。Anti-typellagenantibdiesinrheuatidarthritis【Keyrds】Rheuatidarthritis;Anti-typellagenantibdy;Enzye-linkediunsrbentassay;-reativeprtein抗型胶原抗体(antibdiesttypellagen)与类风湿关节炎(RA)病情活动性、严重性的关系目前仍有争论。本研究参照Fujii等1提出的实验条件检测179例RA患者、171例其他风湿病和118名正常人血清的抗型胶原抗体，讨论其在RA中的临床意

3、义。结果报告如下。1资料与方法1.1一般资料1.2抗型胶原抗体的体测参照Fujii等1的方法。反响板的包被及封闭：正常羊血清于62加热20in，参加固体Tris(0.05l/L)、Nal(0.15l/L)和2l/LHl，调pH值至8备用(BNGS)。天然型胶原在46水浴中加热20in，即为变性胶原。将天然型和变性型胶原分别溶解于0.05l/L的醋酸中，浓度为3g/l。0.02l/L磷酸缓冲液(PB)pH7.6稀释胶原溶液，使浓度为40g/l，参加微量反响板孔，每孔100l，保鲜膜覆盖，4过夜。在与待检血清标本进展温育之前，包被好的微量反响板用含0.05%吐温20的生理盐水溶液洗涤3次，然后每孔

4、参加100lBNGS，室温(2428)下封闭30in，洗涤液洗涤3次。反响板的微孔中，设二孔平行，每孔100l，同时设空白对照。室温温育2h，生理盐水-吐温溶液洗涤3次。含25%BNGS的0.1l/LTBSpH8.0溶液稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG，每反响孔参加100l，室温温育2h，洗涤。将联苯二胺和过氧化氢溶解于柠檬酸-磷酸缓冲液pH5.0中，使各自浓度分别为0.05%和0.017%，参加反响孔，每孔100l，37温育30in后每孔参加终止液1.25l/L硫酸50l终止反响，酶标分光光度计492n处测吸光度(A)值。1.3统计学处理计量资料数据采用t检验，计数资料数据采用2检验。2

5、结果2.1ELISA工作浓度的选择：为便于比较，选择工作浓度时以天然型胶原作为包被抗原，测定血清抗天然型胶原抗体程度。参照文献3的方法进展。结果说明，型胶原包被液浓度以40g/l，第二抗体辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG稀释度以1400，血清以140稀释为最正确。2.2RA患者及对照组血清抗型胶原抗体检测结果：179例RA患者中，抗天然型胶原抗体阳性者40例，阳性率22.3%，显著高于安康人和疾病对照组(3.5%和2.5%)(P0.05)；抗变性型胶原抗体阳性者66例，阳性率36.9%，与正常对照组(2.5%)相比差异有极显著性(P0.0001)，与其他风湿病(31.6%)差异不大。30例早期R

6、A患者抗天然型胶原抗体阳性9例，阳性率为30.0%。抗天然型胶原抗体对RA诊断的敏感性为22.3%，特异性为96.9%，抗变性型胶原抗体对RA诊断的敏感性为36.9%，特异性为80.3%。枯燥综合征并发率、类风湿结节的发生率、功能分级二组间无统计学差异。IgG、Ig、IgA、-球蛋白，ESR程度、ANA阳性率及滴度、放射学病情进展及使用SAARDs的比例等方面在阳性组与阴性组无差异。抗变性型胶原抗体阳性的早期RA患者ESR、RP程度较阴性组增高(P0.05)。3讨论抗型胶原抗体检测方法有多种，目前以ELISA法应用最为广泛。Fujii等1比较了吐温20、牛血清白蛋白和一些动物血清(如兔、鸡、牛

7、、羊)阻止人血清免疫球蛋白与酶标微量反响板的吸附作用后认为，与其他动物血清及吐温20相比，兔和羊血清减少非特异性吸附作用效果最好。他用正常新颖兔血清封闭酶标反响板，使RA病人与安康对照者血清的抗型胶原抗体滴度差异明朗化，并进一步提出该抗体可作为RA的一早期诊断指标4。我们虽未做多种动物血清封闭酶标反响板的比较，但通过采用Fujii等改进的ELISA检测血清抗型胶原抗体程度后我们发现，对照组抗天然型胶原抗体阳性率甚低，使其对RA的诊断特异性达96.9%，在早期RA中敏感性略高于非早期RA患者，说明该抗体的检测可以作为对RA诊断的一个补充。本组RF检出率在抗天然型胶原抗体阳性RA患者较阴性组高，且

8、有统计学意义。与林冰等5所观察到的结果一致。国外的报道多认为抗天然型胶原抗体阳性与RF检出率无关6。是否存在人种差异，有待进一步证实。RP为一急性时相反响产物，其程度可作为判断RA活动性的一个指标。rgan等7报道仅部分RA患者RP与抗天然及抗变性型胶原抗体程度相关。本组179例RA患者抗变性型胶原抗体阳性者血清RP平均程度明显高于阴性组，且有高度的统计学意义。抗天然型胶原抗体阳性组患者RP程度偏高。早期RA抗变性型胶原抗体阳性患者ESR、RP程度显著较阴性者为高，提示这组患者炎症活动似更为显著。harriere等8研究认为，抗天然型胶原抗体阳性与患者X线病情进展较慢、较轻有关。但林冰等5报道

9、抗天然型胶原抗体阳性RA患者关节X线分期较高，认为该组病人病情更重。我们的研究未发现抗天然型胶原抗体阳性组与阴性组在放射学分期、Sharp评分上有统计意义的差异。在本研究中，RA患者抗天然型胶原抗体阳性者抗变性型胶原抗体多呈阳性，单纯抗天然型胶原抗体阳性者较少(占全部抗天然型胶原抗体阳性RA患者的31.7%)。进一步分析抗天然和抗变性型胶原抗体与临床的关系发现，抗天然型胶原抗体阳性与否对抗变性型胶原抗体与RP程度的关系有影响：当抗天然型胶原抗体阴性时，抗变性型胶原抗体与RP程度即无明显关系，说明抗天然型胶原抗体状况对活动性同样起着关键作用，检测抗型胶原抗体有助于对RA活动性的估计。参考文献1,

10、FujiiK,Tsuji,urtaK,etal.Aniprvedenzye-linkediunsrbentassayfanti-llagenantibdiesinhuanseru.JIunlethds,1989,124:63-70.3,马东来，张敏，许华林，等.类风湿关节炎患者血清型胶原抗体检测.中国实验临床免疫学杂志，1996，8：28-30.4,FujiiK,Tsuji,KitauraA,etal.Thediagnstisignifianefanti-typellagenantibdyassayinrheuatidarthritis.Intrthp,1992,16:272-276.5,林冰，吴东海，张荣富，等.类风湿关节炎患者抗天然型胶原抗体的测定及临床意义.中国康复医学杂志，1997，12：170-172.6,hiEK,GateabyPA,GillN,etal.Autantibdiesttypellagen:urreneinrheuatidarthritis,therarthritides,autiunennetivetissuediseases,andhrn