蛹虫草人工代料栽培技术

1、蛹虫草人工代料栽培技术蛹虫草（又称北冬虫夏草、北虫草、黄金草），作为一种药 用真菌， 其药效成分和营养成分与冬虫夏草完全相同， 属于世间 珍贵而稀有的生物药材 1-2 。蛹虫草含有虫草素、虫草酸、虫 草多糖、超氧化物歧化酶 SOD和微量元素硒等多种生物活性物 质，具有特殊的药用价值和滋补功效 3-4 。蛹虫草作为冬虫夏 草的替代品，目前已广泛用于制药，深受消费者的青睐。人工代 料培育蛹虫草不仅占地少，栽培周期短，而且经济效益好，是农 村农民、 下岗和退休职工兴业致富的好项目， 也为我国名贵药材 产业化生产又开辟了一个新的途径。菌种制备优质菌种是种植成功和高效的关键， 蛹虫草菌种不可长期保 存或

2、多次转管扩繁， 否则菌种容易退化变异， 产量和品质会明显 下降。因此，需要经常留种和更新菌种。制种方法是采取组织分离法。选择适应性强、发菌快、见光 转色快、性状稳定、速生高产的菌株进行组织分离制种，也可直 接购买斜面培养基试管母种自行进行扩繁。 目前有固体菌种和液 体菌种 2 种类型，其中以液体菌种接种为好 5 。液体配制液体配比为葡萄糖20 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾3 g、 硫酸镁1 g、维生素B1 1片（10 mg）、水1 000 mL（ pH值6-7）。先将1 000 mL水加热增温（约40 C），倒入蛋白胨搅拌 溶解，再倒入其余原料，充分搅拌；然后用pH试纸测试酸碱度（标准pH值

3、是67）,若偏酸则用氢氧化钠调和，偏碱则用白 醋或盐酸调节。营养液配制的多少应根据生产量灵活掌握。 实践证明， 使用 吸液管喷洒接种，每个培养瓶喷洒菌种45 mL,每瓶液体菌种（指小型医用盐水瓶）可接种 3740 瓶；也可用蒸馏水或高压 灭菌水将液体菌种稀释 23 倍进行接种,可大大提高菌种使用 率。装瓶选用500 mL的医用盐水瓶或250 mL小型医用盐水瓶作为液 体菌种培养瓶（500 mL大瓶可分装300 mL培养液，250 mL小瓶 装至 1/2/ 以上）。装瓶时用玻璃漏斗,以免培养液粘附于瓶口、 瓶颈或瓶壁上而招致杂菌感染。 瓶口用聚丙烯薄膜或化学棉、 脱 脂棉棉球封塞严密。高压灭菌

4、用手提式高压灭菌锅灭菌。将上述培养瓶整齐地摆放锅内,上面用干毛巾盖好瓶口，关紧锅盖。大火加热至110 C，压力表指针指向 0.05 时打开排气阀以便排出冷空气,待压力表回至 0时关掉排气阀；然后大火加热，让其快速升温至125126 C,压力表指针指向 0.15 时改用小火,维持 1.25 h 后停火,等压力 表回到 0 位,冷却后打开锅盖,取瓶出锅。放种培养瓶完全冷却后方可下种， 母种扩繁在接种箱进行无菌操 作。先将接种用一切用品、 工具和试管母种及培养瓶事先放入接 种箱内进行消毒。 操作人员从接种口把手伸入箱内， 在消毒碗内 点燃至少 2 袋起舞消毒剂， 进行薰蒸消毒。 随即用袖头把接种口

5、堵塞严密，密闭 30 min 。操作人员将手洗净，并用 75%酒精擦洗 1 遍，通过袖头伸入 接种箱。再用 75%酒精把手连同手腕部位一并擦洗 1 遍，用皮筋 把袖头在手腕部扎紧，严防杂菌进入箱内。点着酒精灯，把接种 工具用 75%酒精擦洗 1 遍再放在酒精灯上方燎烤消毒；拿起母种 试管，用 75%酒精擦洗管口周围， 并在酒精灯火焰上方燎烤一下。 打开母种试管，用接种工具将试管母种切割成0.5 mmx 0.5 mm大小菌块，在靠近酒精灯的无菌区进行放种，每瓶放种23块。液体菌种培养为利于菌种繁殖和菌丝生长， 应将放完种的培养瓶放置黑暗 环境中，在摇床上进行振荡培养，可全天 24 h 不停振荡培

6、养或 间歇式每隔 1 h 左右振摇 1 次，每次 30 min 左右。经过 8 12 d 振荡培养， 瓶中便有大量絮状、 片状菌丝体和菌丝球充满整个培 养瓶；若无摇床条件，可用手摇措施振动瓶液，每隔 12 h 摇 动 1 次为好。注意不可将营养液打湿封膜或棉塞。培养基原料配制原料配方实践表明，人工代料栽培还是选用大米（杂交米）作主料为 最好，具有发菌均匀、 出草快、产量高的特点。 每瓶装大米 30 g、 黄豆粉（豆面）3 g、营养液50 mL;营养液配方为水1 000 mL（pH值67）、葡萄糖25 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾1.5 g、 硫酸镁 1 g 、柠檬酸铵 1 g 、维生素 B1

7、 2 片。实例为提高拌料和装瓶的效率，可一次性拌好能装 1 000 2 000 瓶的原料，同时应精确地计算出主料和各种辅料的用量。现以每批装1 000瓶为例，配料如下。主料：大米 30 g X 1 000=30 kg，黄豆粉 3 gX 1 000=3 kg；辅料：水 50 gX 1 000=50 kg，葡萄糖1 250 g，蛋白胨500 g，磷酸二氢钾150 g，硫酸 镁 50 g ，柠檬酸铵 50 g ，维生素 B1 100 片。拌料在地坪上铺 1 块干净塑料布， 将上述 2 种主料称好倒在塑料 布上充分掺拌均匀。再将几种辅料分别精准秤好倒入 50 kg 的水 中，充分搅拌使其溶化。用pH试

8、纸测试酸碱度，以pH值67为准。装瓶可分别自制几个能定量盛装 33 g 主料（大米 30 g ，黄豆粉 3 g ）的容器和定量盛装 50 mL 液体的容器进行装瓶。装瓶时， 应先装主料，再装营养液，装好后用皮筋封好膜后，摇动瓶里原 料，使固体与液体充分混合均匀，以利于发菌好、生长整齐。灭菌可用高压蒸汽炉进行灭菌，即在 121 C高温和1.5 kg/m2 的压力下密闭灭菌 30 min ，冷却后取出即可；也可常压灭菌， 当温度升至100 C时，再改小火维持 810 h即可，闷锅一夜， 次日早出锅接种。接种于接种箱中进行无菌操作， 点燃酒精灯， 在靠近酒精灯的安 全区打开液体菌种瓶，用吸液管吸取液

9、体菌种，每瓶以45 mL种量均匀喷注到培养基上，立即封口扎紧（下种量要均匀，喷注 菌种尽量匀称） ；接好一批培养瓶后及时转入培养室 （黑暗环境） 进行菌丝培养； 接种操作每批之间必须重新消毒， 点燃起舞消毒 剂23袋（第1箱消毒时3袋，之后2袋）。密闭30 min即达 消毒效果；将接种好培养瓶整齐摆放在培养架上。菌丝培养蛹虫草属中低温真菌类，菌丝最适宜生长温度是1525 C, 子座最适宜温度为1822 C。要求培养室内具备调节温度、湿 度和光照的基本条件； 培养室放置培养架， 培养架可设 67 层， 层高40 cm,保证每个培养瓶都能得到光照。一般 2530 m2的 房间可摆放 10 000

10、个培养瓶，可生产 80 kg 左右干品。初始阶段（前 5 d） 菌丝萌发阶段，要求做到“三控”：一是控光，需要黑暗环 境；二是控温，培养室内温度最好控制在 1518 C;三是控湿， 室内空气相对湿度控制在 60%左右。接种第 2天，培养瓶料面上可见到点片或连片发菌； 第 3天 菌丝已大面积展开， 占领料面 50%以上；第 4 天菌丝占领料面 80% 以上；第 5 天菌丝全部发满料面， 并已开始向培养基内渗透一指 左右。稀释与未稀释菌种，其菌丝萌发能力完全相同，采取稀释 23倍方法可解决菌种不足问题。经过 5 d时间培养，培养瓶 里菌丝很快布满整个料面。待菌丝布满料面后（ 5 d 后）可将温度提

11、高至2023 C,再继续培养15 d左右，菌丝 就可吃透整瓶培养基， 至此菌丝就完成营养生长阶段， 标志菌丝 体已发育成熟，开始进入生殖生长时期。进入生殖生长阶段后（接种后 20 d 左右） 进行光照刺激，促进菌丝体转色。打开日光灯，进行全天24 h 光照，直到蛹虫草发芽长出小子实体时，再改为白天光照 1415 h,夜晚关灯。白天温度控制在 20 C,晚上控制在10 C 左右，通过温差刺激能促进菌丝快速发育；室内湿度60% 65%。见光第 1 天，料面上菌丝出现微黄；第 2 天显现正黄色；第 3 天 培养基内菌丝全变鲜黄或米黄色；第 4 天整瓶呈橘黄色；第 5 7 天，菌丝基本转完色； 第 7

12、 10 天，料面上出现米粒大小原基。出草管理 经菌丝体生长发育，待培养基料面有突起形成米粒状原基 时，蛹虫草即行发芽出草。扎孔透气将牙签或铁丝经75%酉精擦洗消毒后，在封口膜上扎 68 个通气孔，加强气体交换，促使子实体的生长。加强室内通风换气 打开换气扇或用电风扇吹风，每天早、中、晚各通风1 次，以便补充新鲜空气和排出 C02防止C02积累过多，子座不能正 常分化，影响生长发育。温湿度管理到了出草阶段， 温度和湿度对子实体的生长十分重要。 温度 控制在1821 C。尽量使空气相对湿度提高到 80%85%室内 湿度过小时， 瓶内培养基容易提早失水而影响产量； 若室内湿度 过大时，容易诱发气生菌丝，对子实体生长同样不利。可采取在 地面上洒水或泼水， 空间用空气加湿器增加室内湿度； 无条件用 空气加湿器者，可用喷雾器在空间喷雾增湿。光照管理生长一段时间， 部分瓶里的子实体有一边倒现象， 这是由于 蛹虫草较强的趋光性所致。 因此， 应注意在子实体形成后可根据 生长情况调整培养瓶与光源相对方向， 让其受光均匀， 以提高产 品的品质和产量。采收经过4550 d的精心培育，子实体长至 78 cm,子实体 呈橘红色或橘黄色棒