血管生成及其成熟度在肝细胞癌边缘与中心的差异研究

1、血管生成及其成熟度在肝细胞癌边缘与中心的差异研究【摘要】目的：讨论肝细胞癌(hepatellulararina,H)边缘和中心血管生成及其成熟度的差异。方法：利用免疫组织化学技术检测病灶边缘(A组)和中心区域组织(B组)血管内皮生长因子(vasularendthelialgrthfatr,VEGF)、Flk-1、增殖细胞核抗原(prliferatingellnulearantigen，PNA)的表达情况，并对微血管和成熟血管的数目、平均面积、总面积、周长、直径、异型指数、血管间距、表达部位，以及动脉数、静脉数、动脉比、静脉比、血管成熟指数和平均灌注分数等进展计数。分析以上血管生成相关参数在肿瘤

2、边缘和中心的差异。结果：两组微血管的数目、直径及异型指数，成熟血管的数目、总面积、动脉数、动脉比及静脉比，血管成熟指数及平均灌注分数差异均有统计学意义(P0.05)。A组微血管和成熟血管的数目、平均面积、总面积、直径、异型指数及血管间距差异均有统计学意义(P0.05)。而B组微血管和成熟血管的数目、总面积、异型指数及血管间距差异也均有统计学意义(P0.05)，但平均面积、周长和直径比拟差异无统计学意义(P0.05)。结论：H边缘和中心的微血管和成熟血管的多个形态学特征存在差异，病灶中心血管多为幼稚的微血管，边缘那么以成熟血管居多。【关键词】肝细胞癌血管生成，病理性【ABSTRAT】bjetiv

3、e:Tstudythedifferenesinangigenesisanditsaturatinbeteentheperipheryandenter.fhepatellulararina(H).ethds：Thirty-neasesprvedsurgiallyandpathlgiallyereseleted.Aftersurgery,tsetinseregttenfrtheturperipheryandenter.ntinuusslieserestainedithiunhistheistryffiveantibdiesagainstVEGF,Flk-1,PNA.TheexpressinsfVE

4、GF，Flk-1,andPNA,andsevasularparaetersereuntedinludingthenuber,eanarea,ttalarea,iruferene,diaeter,distanebeteenadjaentvessels(DAV),varietyindexfirvesselandaturevessels.Thearteriles,vEinlets,aturevesselindexandeanperfusedfratin(PF)erealsalulated.Thedifferenesfthevasularparaetersabvebeteentheperipherya

5、ndenterereanalyzed.Results:Thedifferenesinthenuber,diaeter,andvarietyindexfirvessel,thenuberandttalareafaturevessel,thearterilesandtheratifarterilervEInlet,aturevesselindexandPFerestatistialdifferenesbeteentheperipheryandenterfthetur(P0.05).Inturperiphery,ealsfundstatistialthedifferenesinthenuber,ea

6、narea,ttalarea,diaeter,varietyindexandDAVbeteenirvsselandaturevessel(P0.05),andserethedifferenesinthenuber,ttalarea,varietyindexandDAVbeteenirvsselandaturevesselintheturenter(P0.05).nlusin:Therearedifferenesinsevasularharateristisfirvesselandaturevessel,andtheinfantvesselsftenurintheturenter,hilethe

7、aturevesselinperiphery.【KEYRDS】HepatellulararinaNevasularizatin,pathlgi肿瘤的发生、开展及转移与血管生成亲密相关1-3，理解肿瘤的血管生成情况有助于进步对肿瘤生物学行为的认识，并可以指导治疗、改善疗效4。目前利用病理学技术对肿瘤组织进展血管计数是评价肿瘤血管生成的“金标准。但是近年的研究发现5-7，肿瘤血管不仅仅数目增多，同时也存在直径、周长、面积、分布及血管成熟度等多个方面的变化，仅仅依靠血管计数并不能完全反映肿瘤的血管生成特征。因此Flkan等8后来提出单纯用微血管密度来评估肿瘤新生血管并不准确。只有从各个方面评价肿瘤的

8、血管生成特点，才能对肿瘤的生物学行为和治疗效果做出准确评估。本研究对多个血管生成相关抗体进展染色，讨论肝细胞癌(hepatellulararina，H)边缘和中心血管生成及其成熟度的差异，旨在全面和深化理解H的血管生成特点。1资料与方法1.1一般资料搜集2022年111月在我院普外科进展手术切除并经病理组织学证实的H病例31例，其中男20例，女11例，年龄3672岁，平均年龄54.80岁。在病灶边缘和中心区域所取的标本分别为A组和B组。所有病例手术前均未行任何抗肿瘤治疗，临床资料完好。1.2实验方法在切下的病灶最大径处纵行将其剖开，观察并记录病灶的大体病理表现后常规固定，在病灶边缘和中心区域各

9、取1块大小约为23的标本，边缘区域组织同时还应包括周围约0.51的正常肝组织，中心区取材尽可能避开坏死和出血的组织。31个病灶共取标本62块，每块标本厚5。常规石蜡包埋后行4连续切片，从中随机各取出1张进展HE染色，其他的均行免疫组织化学检测。实验步骤严格按照试剂说明书进展。1.3主要试剂及仪器VEGF、Flk-1、-SA、D34和PNA单克隆抗体、PV9000二步法免疫组织化学检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术产品;捷达(JD801)形态学图像分析系统由捷达科技消费。1.4结果断定1.4.1VEGF、Flk-1及PNA结果判断VEGF、Flk-1阳性染色是在细胞质或细胞膜出现棕黄色颗粒。在

10、400倍视野下随机选取5个视野计算阳性细胞率。根据阳性细胞率进展评分：无阳性细胞为0分，阳性细胞率30%为1分，30%70%为2分，70%为3分;按染色强度将其分为4个等级：无着色者0分，阳性细胞为浅黄色1分，黄色2分，棕黄色3分。将两个分值相乘，得分03者为阴性，4分者为阳性表达。PNA主要在细胞核中表达，PNA指数(PNAindex,PI)=PNA染色阳性细胞数/肿瘤细胞数100%。1.4.2D34和-SA结果判断D34和-SA阳性染色分别为内皮细胞质和血管平滑肌细胞出现棕黄色颗粒，D34染色阳性血管为微血管，-SA阳性血管为成熟血管。利用图像分析系统对无苏木精复染的阳性血管进展自动分析，

11、根据eidner方法9在400倍镜下记录5个视野中的血管评价参数并取其平均数。评价指标包括：血管数目、平均面积、总面积、周长、直径、血管间距和异型指数。异型指数=根据成熟血管的最小外径比(-SA阳性厚度/成熟血管最小外径)来区分动脉和静脉，凡最小外径比1/10为动脉，否那么为静脉10。计算动脉数、静脉数、动脉比(动脉数/成熟血管数)、静脉比(静脉数/成熟血管数)以及血管成熟指数(成熟血管数/微血管密度)和平均灌注分数(成熟血管总面积/D34阳性血管总面积)。1.5统计学处理采用SPSS11.5软件包进展数据处理，计量资料采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果本组病例共31个病灶，大体

12、病理显示病灶直径3.011.0，平均直径为(5.642.24)，直径5的病灶占58.06%(18/31)。同时合并肝硬化的病灶54.84%(17/31)。病理分级高、中和低分化的肿瘤分别占12.9%(4/31)、41.94%(13/31)和45.16%(14/31)。2.1两组H各血管参数的差异对于微血管而言，两组的微血管数目、直径及异型指数差异均有统计学意义(P0.05，表1，图1);对于成熟血管，两组的成熟血管数目、总面积、动脉数、动脉比及静脉比差异均有统计学意义(P0.05，表2，见图1)。另外，A、B两组动脉比分别为0.750.13和0.590.15，静脉比那么为0.250.11和0.

13、410.18，差异也有统计学意义(P0.05)。同样，两组的血管成熟指数及平均灌注分数差异亦有统计学意义(P0.05，表3)。其他参数差异均无统计学意义(P0.05)。2.2微血管和成熟血管相对应测量参数的比拟在A组微血管和成熟血管的数目、平均面积、总面积、直径、异型指数及血管间距差异均有统计学意义(P0.05);B组微血管和成熟血管的数目、总面积、异型指数及血管间距差异亦均有统计学意义(P0.05)，但平均面积、周长和直径之间差异无统计学意义(P0.05，表4)。转贴于论文联盟.ll.3讨论恶性肿瘤的快速生长需要更多的血氧供给，肿瘤血管的大量增生使肿瘤的血流灌注面积和灌注量明显增加。VEGF

14、是目前的诱导肿瘤血管生成作用最强、特异性最高的调控因子，它主要通过受体Flk-1、Flt-1等发挥刺激血管生长、进步血管通透性的作用。近年的研究证实肿瘤新生血管分为不成熟的无血流灌注的内皮细胞芽、无周围细胞环绕的小灌注血管和有周围细胞环绕的较大的成熟血管4。尽管肿瘤新生血管数目增多，但肿瘤的血液供给主要依靠成熟的血管11。研究报道，黑色素瘤和淋巴瘤的微血管数目并不丰富，但其生长速度和恶性程度并不低于微血管数目相对较多的肿瘤，如高分化的胶质瘤等12-13，提示肿瘤内成熟血管对于肿瘤的血供发挥主要作用。研究发现，肿瘤内有功能的毛细血管占瘤内血管的比例5%，而肿瘤内部大量的非成熟血管极少参与肿瘤的营

15、养供给9。同时，非成熟血管缺乏平滑肌细胞，肿瘤细胞易于脱落转移14。因此区分功能性和非功能性血管(即判断血管成熟度)可以对肿瘤的预后进展一定程度的评估。目前抗血管生长治疗主要针对非成熟度的血管，理解肿瘤内部成熟和非成熟血管的分布、数量及其他形态特点有利于针对性地进展干预，从而进步抗肿瘤血管生成治疗的效果。目前判断血管成熟的方法多是利用-SA对血管平滑肌进展标记15。本研究发现，对于微血管而言，病灶边缘的微血管数目和异型指数明显小于中心，而微血管直径那么相反。与正常的毛细血管不同，肿瘤血管粗细不均、分支紊乱、管腔不规那么，因此其血液黏滞度和血流阻力也相应增加;同时因为广泛存在动静脉瘘，肿瘤内部压

16、力因血管通透性增加以及缺乏淋巴管引流而增加(为正常间质组织的35倍)16，所以肿瘤中心常常出现缺氧并容易坏死。受到乏氧诱导因子的影响，肿瘤内部VEGF及Flk-1的表达明显增高，微血管的数目也相应增加。本研究未发现肿瘤边缘和中心之间VEGF表达的差异，由于血管生成是受多个血管因子的共同调控，因此本组病例中VEGF的作用并不突出。但研究显示病灶中心的微血管数目明显大于边缘，同时，病灶中心微血管的异型指数大于边缘，这提示肿瘤内部新生血管在乏氧的诱导下大量增殖，但多为较幼稚的、不成熟的血管，形态变化较大。另外，病灶中心微血管直径小于边缘也提示这些血管的幼稚性。病灶边缘的成熟血管数目、总面积、动脉数、

17、动脉比明显大于中心组织，但静脉比那么相反;同时，本研究还说明病灶边缘的血管成熟指数及平均灌注分数明显大于病灶中心。由于成熟血管数目对肿瘤血供起主要作用，也说明了肿瘤边缘的血液供给明显优于病灶中心。D34染色阳性血管代表微血管，而-SA那么反映成熟血管，本研究将H边缘及中心的微血管和成熟血管相对应的测量参数进展了比拟。结果发现，除周长之外，病灶边缘的微血管和成熟血管的数目、平均面积、总面积、直径、异型指数及血管间距差异均有统计学意义;而在病灶中心，微血管和成熟血管的数目、总面积、异型指数及血管间距差异亦均有统计学意义，但平均面积、周长和直径差异无统计学意义。成熟血管的异型指数明显小于微血管，也提

18、示成熟血管更加规那么和完好。微血管和成熟血管测量参数在肿瘤边缘和中心的差异，也说明血管生成受复杂因素的影响而产生较大的异质性。总之，H边缘和中心的微血管和成熟血管的多个形态学特征存在较大的差异，相对而言，病灶中心多以幼稚的微血管为主，而边缘那么以成熟血管居多。受此影响，病灶边缘血供丰富;而中心那么相对较差，更易出现坏死。根据H边缘和中心区域血管类型的差异，针对性地进展治疗，有助于进步抗肿瘤血管生成生物治疗的效果。【参考文献】1FlkanJ,ShingY.Angigenesis(Revie)J.JBilhe,1992,267(16):10931-10934.2EidnerN,SepleJP,el

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