葛根总黄酮提取工艺的比较

1、葛根总黄酮提取工艺的比拟【摘要】目的优选葛根总黄酮的提取工艺。方法采用水浴回流、微波和超声波辅助3种方法提取葛根总黄酮，正丁醇萃取纯化。结果微波辅助提取所得总黄酮提取率最高，提取率为91.68%，纯化后，总黄酮纯度为87.56%;超声波辅助提取次之，提取率为87.88%;水浴回流提取最低，提取率为85.35%。结论微波辅助提取法节能、高效，且污染小，具有应用前景。【关键词】葛根;总黄酮;水浴回流法;微波法;超声波法Abstrat：bjetiveTptiizetheextratinpressfttalflavnidsfrradixpuerariae.ethdsaterirufluene,irav

2、e-assisted,ultrasniave-assistedandn-Butanlereeplyedintheextratinandpurifiatinpressesfttalflavnids.ResultsTheextratinratefttalflavnidsbtainedbyirave-assistedashigherthanthethers,theyieldas91.86%,andthepurityasupt87.56%afterpurifiatin.Theextratinratesfultrasniave-assistedandateriruflueneere87.88%,85.3

3、3%,respetively.nlusinirave-assistedethdisenergy-saving,effiientandhaslittlepllutin,hihanbeusedtextratttalflavnids.Keyrds：RadixPuerariae;Ttalflavne;aterirufluene;irave;Ultrasniave葛根属豆科植物野葛Puerarialbata(illd.)hi的块根1，2，其所含有效成分总黄酮能降低心肌耗氧量，增加冠脉、脑血管血流量，明显缓解心绞痛、抗心律失常等3，对防治心肌堵塞、心律失常等也有重要疗效4，5。葛根总黄酮的提取通常采用水提

4、法和有机溶剂提取法6。本实验以乙醇为溶剂，用紫外分光光度法分析葛根总黄酮的含量，比拟了水浴回流提娶微波辅助提取和超声波辅助提取3种提取方法，为确定葛根总黄酮的提取工艺提供实验根据。1材料与仪器1.1原料和试剂葛根购自湖北三九大药房，粉碎过20目筛备用;葛根素对照品购自中国药品生物制品检定所;所用试剂均为分析纯，水为去离子水。1.2仪器XTB数显恒温水浴锅，武汉市琴台医疗器械厂产品;XH-100A微波催化合成/萃取仪，北京祥鹄科技开展产品;KQ-250DB型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器产品;UV-2450紫外分光光度计，日本岛津公司产品;Agilent1100系列高效液相色谱仪，美国Agil

5、ent公司产品。2方法2.1分析方法2.1.1标准曲线的制作精细称取葛根素对照品5.5g，用95%乙醇溶解并定容于50l容量瓶中，得0.11g/l的葛根素标准溶液。准确汲取该标准溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0l于10l容量瓶中，蒸馏水稀释定容，得系列对照品溶液。以1.0l95%乙醇加水至10l作空白对照，于250n处7测定各对照品溶液吸光度，得到吸光度A与总黄酮质量浓度(g/l)的线性回归方程：=0.01502A-0.000041，r=0.99992。2.1.2葛根中总黄酮含量的测定称取枯燥葛根10.0g，参加200l80%乙醇，在80水浴下回流提取2h，抽滤。同条件下

6、反复提取6次，得葛根总黄酮提取液，测定提取液中总黄酮浓度并计算葛根中总黄酮含量为8.4%。2.1.3葛根提取液中总黄酮含量的测定准确汲取葛根总黄酮提取液1l于50l容量瓶中，用蒸馏水稀释定容，按上述“2.1.1项的方法操作，测定吸光度，根据线性回归方程计算各提取液中总黄酮浓度。葛根总黄酮提取率：X=50250101000100%其中：X总黄酮提取率(%);由线性回归方程计算出的提取液中总黄酮浓度(g/l);50稀释倍数;250提取液体积(l);10葛根质量(g);1000葛根中总黄酮含量(g/g)。2.1.4色谱条件InertsilDS-318色谱柱(2504.6，5);流动相为甲醇水(257

7、5);柱温30;流速1.0l/in;检测波长250n;进样量10l。2.2实验方法2.2.1水浴回流提取法准确称取枯燥葛根10.0g，放入三口圆底烧瓶中，参加乙醇，水浴下回流提取后抽滤，滤液冷却至室温，用同浓度的乙醇定容至250l，得葛根总黄酮提取液，测定该提取液中总黄酮浓度。2.2.2微波辅助提取法准确称取枯燥葛根10.0g，放入三口圆底烧瓶中，参加体积分数为80%的乙醇，微波萃取后抽滤(微波萃取示意图见图1)，滤液冷却至室温，80%乙醇定容至250l，得葛根总黄酮提取液，测定该提取液中总黄酮浓度。2.2.3超声波辅助提取法准确称取枯燥葛根10.0g，放入三口圆底烧瓶中，参加80%乙醇，超声

8、波辅助提取后抽滤，滤液冷却至室温，80%乙醇定容至250l，得葛根总黄酮提取液，测定该提取液中总黄酮浓度。2.2.4正丁醇萃取法8分别称取各优化工艺下的提取物2g，40l蒸馏水溶解，用200l水饱和的正丁醇萃取，将正丁醇相减压浓缩、真空枯燥，得黄酮粉末，称重，测定总黄酮的浓度，计算产品纯度及产率。图1微波萃取仪示意图3结果3.1水浴回流提取法优化工艺确实定采用正交实验设计，选取提取时间(A)、乙醇浓度(B)、提取温度()、液固比(D)为考察因素，以总黄酮提取率为考察指标，采用L9(34)表。正交实验结果见表1。表1L9(34)水浴回流提取法的正交实验结从表1结果可以看出，各因素对提取效果的影响

9、作用大小依次为(提取温度)A(提取时间)B(乙醇浓度)D(液固比)，其中提取温度对葛根总黄酮的提取效果影响最大，而液固比和乙醇浓度对提取无显著影响。极差分析结果说明，水浴提取葛根总黄酮的优化工艺为A3B23D3，即：提取时间120in，乙醇浓度80%，提取温度80，液固比201。按水浴回流提取法的优化工艺进展验证，即按因素组合A3B23D3平行提取3次，提取率分别为84.92%，85.16%，85.98%，RSD为0.65%，该工艺稳定可行，葛根总黄酮的平均提取率为85.35%。3.2微波辅助提取法优化工艺确实定根据水浴回流提取法的实验结果，以80%乙醇为溶剂时总黄酮提取率最高，故微波辅助提取

10、以80%乙醇为溶剂，选取提取时间(A)、微波功率(B)、提取温度()、液固比(D)为考察因素，以葛根总黄酮提取率为考察指标，采用L9(34)表，正交实验结果见表2。表2L9(34)微波辅助提取法的正交实验结果由表2结果可知，各因素对提取效果的影响作用大小依次为A(提取时间)(提取温度)B(微波功率)D(液固比)，其中提取时间对葛根总黄酮的提取效果影响最大，而液固比对提取无显著影响。极差分析结果显示，微波辅助提取法的优化工艺为A3B23D3，即：提取时间60in，乙醇浓度80%，提取温度80，液固比201，微波功率800。转贴于论文联盟.ll.按因素组合A3B23D3平行提取3次进展验证，提取率

11、分别为92.15%，90.26%，92.63%，RSD为1.37%，可见该工艺稳定可行，葛根总黄酮的平均提取率为91.68%。3.3超声波辅助提取法优化工艺确实定采用正交实验设计，选取提取时间(A)、提取温度(B)、超声波功率()为考察因素，以总黄酮提取率为考察指标，采用L9(33)表。正交实验结果见表3。表3L9(33)超声波辅助提取法的正交实验结果由正交实验结果可知，各因素对提取效果的影响作用大小依次为A(提取时间)B(提取温度)(超声波功率)，其中提取时间对葛根总黄酮的提取效果影响最大，而超声波功率对提取无显著影响。极差分析结果显示，超声波辅助提取葛根总黄酮的优化工艺为：A3B32，即：

12、提取时间60in，乙醇浓度80%，提取温度80，液固比201，超声波功率50%。按因素组合A3B32平行提取3次进展验证，提取率分别为88.12%，87.56%，87.95%，RSD为0.33%，可见该工艺稳定可行，葛根总黄酮的平均提取率为87.88%。3.4总黄酮纯度的比拟三种优化工艺所得提取物萃取前后的HPL色谱图见图2，提取物总黄酮纯度见表4。a对照品b水浴回流提取物(萃取前)微波提取物(萃取前)d超声波提取物(萃取前)e水浴回流提取物(萃取后)f微波提取物(萃取后)g超声波提取物(萃取后)图2HPL图表43种优化工艺所得提取物的总黄酮纯度%方法萃取前纯度萃取后纯度产率水浴回流提取50.

13、5287.7932.36微波辅助提取49.8287.5656.74超声波辅助提取42.8686.5244.32比拟图2中b、d可知，3种提取方法中，水浴回流提取法所得提取物的杂质相对较少，微波提取物杂质相对较多。比拟图2中e、f、g可知，各提取物经正丁醇萃取后，所含杂质明显减少，且根本一样。因此，虽然微波提取物杂质较水浴多，但是经正丁醇萃取后，微波提取物的杂质明显减少，与萃取后的水浴提取物杂质根本一样，所以采用微波辅助提取葛根总黄酮不会影响后续别离工作。由表4可以看出，萃取前，水浴回流提取物纯度较高，萃取后的各提取物纯度相近，差异不大，与HPL色谱图显示的结果一致。各产品产率以微波提取物最高，

14、超声波提取物次之，水浴回流提取物最低，所以综合考虑产品纯度及产率，以微波辅助提取法最优。3.5葛根总黄酮3种提取方法的比拟3种提取方法在优化工艺条件下的平均提取率见表5。表53种提取方法优化工艺条件下提取率的比拟在葛根总黄酮的提取中，水浴回流提取法以加20倍乙醇，80下提取120in的工艺效果为佳，平均提取率85.35%，而微波辅助提取法和超声波辅助提取法那么以加20倍乙醇，80下提取60in的工艺效果为佳，经优化工艺验证其平均提取率分别为91.68%，87.88%。显然，这两种提取方法优于水浴回流提取法，不仅提取率相对较高，还大大缩短了提取时间。可见，在常规提取过程中，施加微波辐射和超声场均

15、能有效加速总黄酮的溶出。微波辅助提取法与超声波辅助提取法的提取时间一样，提取率相近，但从环境保护来说，微波辅助提取法优于超声波辅助提取法，因为超声波辅助提取过程中会产生噪音，污染环境，不合适大批量消费。比拟3种方法优化工艺下所得提取物萃取前后的HPL色谱图、总黄酮纯度及产率可知，虽然水浴回流提取物杂质相对较少，但是经过正丁醇萃取后，各提取物所含杂质及总黄酮纯度均相近，产率以微波提取物最高，所以微波法优于其他两种方法。比拟上述3种提取方法，从消费本钱和环境保护出发，微波辅助提取法优于其他两种方法;从产品纯度来看，微波提取物的总黄酮纯度较高，与水浴回流提取物的总黄酮纯度相近，差异可忽略不计。综合考

16、虑消费本钱、环境因素及产品纯度和产率，微波辅助提取法具有高效性、污染孝节能、操作简便等优点，更合适用于葛根总黄酮的提龋4结论本实验比拟了葛根总黄酮的水浴回流提娶微波辅助提取和超声波辅助提取3种方法，结果说明，微波辅助法优于其他两种方法，其优化工艺为：提取时间60in，乙醇浓度80%，提取温度80，液固比201，微波功率800，提取率为91.68%。提取物经正丁醇萃取后，所得产品的总黄酮纯度为87.56%。将微波辅助提取法与水浴回流提取法、超声波辅助提取法作了比拟。相比水浴回流法，微波辅助法有提取速度快，提取率高的优点;相对于超声波辅助法来说，微波辅助法有节能、环保的优点。说明微波辅助提取法在保证相对较高提取率的同时还有节能、环保的优势，对于葛根总黄酮提取的工业消费有更高应用价值，在天然产物有效成分的提取方面有更广阔的应用前景。【参考文献】1窦德明,代纬正,陈振峰，等.秦岭不同产地葛根中葛根异总黄酮含量的研究J.中草药,2002,33(7):663.2黄琨,黄少伟,池汝安.微波辅助提取葛根多糖工艺研究J.中国民族民间医药,2022,2(17):1.3安伟建,夏光成.不同产地葛根总黄酮含量的比拟J.中国中药杂志,1999,24(6):338.4YngPilHang,hulYunghP,Yunghulhungetal.PrtetiveEffetsfPuerarinnarbn