力相关功能基因研究及疫苗开发和海洋文昌鱼繁育与免疫基

1、关于发布863计划海洋技术领域迟钝爱德华氏菌毒力相关功能基因研究及疫苗开发和海洋文昌鱼繁育与免疫基因功能解析关键技术研究项目申请指南的通知各有关单位：“十一五”期间，依据国家中长期科学和技术发展规划纲要(2006-2020)、国家“十一五”科学技术发展规划和863计划“十一五”发展纲要，863计划海洋技术领域的战略目标是：“深化近浅海、开拓深远海”，重点围绕提高近海资源利用水平和深海战略性资源的储备，开发近海边际油田、深水油气田、天然气水合物和大洋海底固体矿产资源勘探开发关键技术与重大装备；发展和完善海洋环境监测技术，特别是深远海监测技术，形成200海里专属经济区及西太平洋海洋环境立体综合监测

2、与监控的技术能力；开展深海生物资源的探查、开发与利用技术研究，研制海洋创新药物与海洋生物制品等高值产品；建立一批海洋高技术研发基地,发展一批海洋前沿技术；实现我国海洋技术从近浅海向深远海的战略性转移。围绕“十一五”战略目标，863计划海洋技术领域在项目和专题两个层次进行部署。项目分为重大项目和重点项目。重大项目以重大产品开发和重大技术体系建设为目标，重点项目以突破核心技术、开发单项战略产品原型或解决中试中的重要工艺问题为目标。项目遵循“成熟一个、启动一个，成熟一批、启动一批”的原则，分次分批启动。此次发布的是本领域迟钝爱德华氏菌毒力相关功能基因研究及疫苗开发和海洋文昌鱼繁育与免疫基因功能解析关

3、键技术研究2个重点项目的申请指南，合计拟安排863计划专项经费3200万元。本批重点项目的申请采取网上集中申报。申报通过“国家科技计划项目申报中心”进行，网址为，有关申请的程序要求和注意事项详见“十一五”国家高技术研究发展计划（863计划）申请指南。项目或课题申请负责人出生日期要求为1952年7月1日（含）以后。项目或课题申请受理的截止日期为2007年9月14日24时。指南内容:附件一：“迟钝爱德华氏菌毒力相关功能基因研究及疫苗开发”重点项目申请指南附件二：“海洋文昌鱼繁育与免疫基因功能解析关键技术研究”重点项目申请指南科学技术部863计划海洋技术领域办公室二八年七月二十四日附件一：“十一五”

4、863计划海洋技术领域“迟钝爱德华氏菌毒力相关功能基因研究及疫苗开发”重点项目课题申请指南一、指南说明“迟钝爱德华氏菌毒力相关功能基因研究及疫苗开发”是“十一五”863计划海洋技术领域重点项目之一。其总体目标是：针对目前严重危害我国各种经济海水养殖鱼种的病原菌迟钝爱德华氏菌，利用分子生物学、现代病原微生物学和疫苗学的原理和技术，揭示迟钝爱德华氏菌黏附、侵染、胞内寄生和疾病爆发相关的毒力因子以及它们的调控机制。针对迟钝爱德华氏菌特定的毒力因子和致病机制，获得具有自主知识产权的候选疫苗，促进我国海水养殖业的健康发展。本项目拟下设1个课题，申报团队需按指南内容进行整体申报，提提出详细可考核的课题考核

5、指标。二、指南内容1项目名称迟钝爱德华氏菌毒力相关功能基因研究及疫苗开发2项目总体目标确定迟钝爱德华氏菌的易感鱼类和细胞系，揭示迟钝爱德华氏菌黏附、侵染、胞内寄生和疾病爆发相关的毒力因子以及它们的调控机制；针对迟钝爱德华氏菌特定的毒力因子和致病机制，获得34个具有自主知识产权的高效疫苗，进行疫苗的实验室安全和效力评价，至少一株获得环境安全试验许可证书，并进入环境安全试验。3项目主要研究内容（1）迟钝爱德华氏菌易感细胞和动物模型研究。选取迟钝爱德华氏菌易感鱼类细胞（系）和宿主动物，考察其在感染过程中与迟钝爱德华氏菌之间的相互作用，建立用于迟钝爱德华氏菌侵染和致病规律研究的易感宿主模型。（2）迟钝

6、爱德华氏菌全基因组测序和基因组学分析。对迟钝爱德华氏菌进行全基因组测序并拼装；对获得的全基因组序列进行全面的生物信息学分析，初步筛选出候选的毒力相关基因，并对其进行功能验证；分析迟钝爱德华氏菌不同毒株间的基因差异及其与毒力差异之间的关系。（3）迟钝爱德华氏菌重要致病相关基因/蛋白的表达调控分析。以全基因组序列为基础，以病原细菌重要毒力调控基因/蛋白为靶点，进行基因表达谱差异分析，确定关键毒力基因及其调控网络。研究重要调控基因和蛋白在病原菌致病过程中的生物学功能，建立迟钝爱德华氏菌作为鱼类胞内寄生病原菌的致病机制模型。（4）迟钝爱德华氏菌抗原蛋白组学分析。以迟钝爱德华氏菌的全基因组为平台，预测毒

7、力因子、分泌抗原及表面相关抗原，寻找外膜抗原以及侵染和毒力相关的抗原。对筛选得到的免疫显性抗原进行免疫保护力评价，为海水养殖疫苗研究提供候选靶点。（5）迟钝爱德华氏菌疫苗的构建和评价。以关键毒力基因或保护性抗原为靶点，设计和构建迟钝爱德华氏菌减毒活疫苗或者亚单位疫苗，并在实验室规模上进行安全性和免疫效力评价，筛选具有产业开发前景的疫苗。初步确定疫苗的实验室制备工艺和免疫策略，在此基础上进行环境安全试验。4主要考核指标（1）完成迟钝爱德华氏菌的全基因组测序，全基因组测序覆盖率达到10倍以上；进行迟钝爱德华氏菌全基因组序列的拼装，给出全基因组的精细图，完成迟钝爱德华氏菌全基因组分析。（2）建立迟钝

8、爱德华氏菌致病机制研究的易感细胞和动物模型。开展迟钝爱德华氏菌与鱼类致病相关基因的功能研究，对其中的10-20个基因的功能进行较深入系统的研究。新发现1-2个重要致病因子。（3）构建34个迟钝爱德华氏菌的减毒活疫苗或者亚单位疫苗，浸泡或者口服的相对免疫保护率达到70%以上。至少一株获得环境安全试验许可证书，并进入环境安全试验。申请或获得国家发明专利34项，国际发明专利12项。5项目经费及组成本重点项目总支持经费为1320万元，其中863专项经费拟支持1200万元，要求落实地方或部门配套经费120万元。配套经费需提供证明。6项目支持年限自课题任务书签定日起4年。7其他内容本项目申请必须针对项目整

9、体任务，针对部分研究内容的申请将视为无效申请。项目申请者需填写项目申请书。附件二： “十一五”863计划海洋技术领域“海洋文昌鱼繁育与免疫基因功能解析关键技术研究”重点项目课题申请指南一、指南说明“海洋文昌鱼繁育与免疫基因功能解析关键技术研究”是“十一五”863计划海洋技术领域重点项目之一。项目总体目标：本重点项目通过文昌鱼全基因组的测序和相关生物信息学分析， 再进行系统的功能研究，以获取生殖与免疫相关的功能基因，从而为海水养殖的优良品种培育与病害控制提供关键技术和自主知识产权的保证。项目重点任务：完成中国文昌鱼全基因组序列测定、组装和全部基因潜在功能的注释，建立文昌鱼的人工繁育与养殖技术体系

10、，建立文昌鱼细胞系及其相关的培养技术，初步建立文昌鱼遗传基因的修饰与改造技术，获得一系列与海水鱼养殖繁育和免疫防御相关的功能基因，其中至少获得10个功能基因的知识产权保护，为海水养殖优良品种培育与病害控制提供关键技术，提高我国在海洋生物科技方面的创新力和竞争力。说明：根据863计划有关管理办法和规定，本重点项目参照重大项目任务落实方式，对项目全部内容公开发布课题申请指南，以课题为单位进行申请，申请者请填写项目课题申请书。本项目拟支持的863专项经费控制额为2000万元，课题支持年限为自课题任务书签定日起4年。二、指南内容课题1海洋模式生物文昌鱼全基因组的测序和基因功能注释的生物信息分析 研究目

11、标：通过建立我国文昌鱼高质量基因组BAC文库，采用超快速基因测序技术完成中国文昌鱼基因组测序，对全基因组序列进行拼接、组装，完成全部基因潜在功能的注释，建立信息完整、数据丰富、界面友好、开放应用的中国文昌鱼全基因组数据库和研究平台，奠定我国在海洋模式生物及其功能基因研究领域的国际竞争力。主要研究内容：建立高质量单一个体的文昌鱼BAC基因组文库，对文昌鱼全基因组进行大规模测序，用生物信息技术对大量的原始序列数据进行拼接组装，利用已有的中国文昌鱼EST数据和国际文昌鱼数据库中的EST数据，给合生物信息技术，对全部基因潜在功能进行注释，建立资源共享的数据库。主要考核指标：文昌鱼基因组文库的平均插入片

12、段不小于100 kb，总库容达基因组10倍以上；全基因组测序覆盖深度达8，组装序列对基因组的覆盖率不低于98%；注释基因不少于1.5万，达到高质量工作“框架图”要求；基因组数据库信息完整，界面友好并开放使用；申请或获得国家发明专利2-3项。课题设置：本课题拟支持专项经费700万元，拟支持课题数不超过1个。课题2海洋文昌鱼的人工繁育与养殖及其生殖相关功能基因的研究研究目标：利用我国丰富的文昌鱼资源，突破文昌鱼人工繁育和养殖的技术瓶颈，建立实验室条件下长期繁育的文昌鱼人工繁殖群，克隆一批文昌鱼生殖相关功能基因，为将文昌鱼作为模式动物奠定基础。主要研究内容：通过品种筛选和优化养殖条件，提高文昌鱼生长

13、速度，缩短生殖周期；研究文昌鱼卵母细胞和精原细胞基本发育规律，实现产卵时间的可预见性和可调控性，诱导养殖群体室内产卵；改变原有生活习性和生殖习性，使文昌鱼能在人工海水中长期养殖；研制和建立适合实验室大规模养殖的专用设备和技术方法；克隆文昌鱼生殖相关功能基因，研究这些基因的功能及其在文昌鱼生殖周期和繁育中的作用。主要考核指标：建立一个不少于10万尾全人工繁育的文昌鱼实验室繁殖群，调节延伸产卵期至自然条件下2倍以上，建立人工海水条件下的繁育和室内诱导产卵技术，申请或获得国家发明专利2-3项。经费安排：本课题拟支持专项经费550万元，拟支持课题数不超过1个。课题3：海洋模式生物文昌鱼免疫防御的关键基

14、因研究研究目标：针对海水养殖病害防治这一关键问题，研究海洋模式生物文昌鱼对病原感染应答的规律和免疫防御机制，克隆一批重要的免疫相关基因，研究这些基因在免疫防御中的作用，为开发海水养殖病害控制新的免疫防治技术提供理论依据。主要研究内容：不同病原感染文昌鱼的转录组研究；不同病原感染文昌鱼的蛋白组学研究；文昌鱼重要免疫基因家族研究；重要免疫细胞信号传导通路及关键基因研究；免疫相关组织和器官发生相关基因研究；早期免疫识别分子的产生和识别机制研究；原始适应性免疫分子的签定和功能研究等。主要考核指标：克隆30-60个病害控制和免疫防御相关的功能基因，阐明10-20个重要病害控制和免疫防御相关基因的功能，发表高水平研究论文5-10篇以上，申请或获得国家发明专利3-5个。经费安排：本课题拟支持专项经费550万元，拟支持课题数不超过1个。课题4：海洋文昌鱼细胞系的建立及其遗传修饰与改造技术研究目标：针对文昌鱼细胞不能体外培养这一难题，本课题将突破文昌鱼细胞体外培养的技术瓶颈，实现文昌鱼细胞的原代培养和永生细胞系的建立，为重要海水养殖动物的遗传育种和基因修饰改造提供技术支持。主要研究内容：建立文昌鱼原代细胞的培养条件和传代培养的方法；通过各种诱导方法，使原代培养细胞转化为细