虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定

1、虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定刘仁旺，滕增辉，张邦乐，宦梦蕾，杨茜，周四元【摘要】目的：成立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效 液相色谱法，优化虎杖中有效成份白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取工艺. 方式：采纳梯度法成立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色 谱方式，以白藜芦醇和白藜芦醇苷总量为考察指标，设计以乙醇浓度、 溶剂倍数及醇提温度等为阻碍因素的4因素3水平的正交实验，确信 虎杖中上述有效成份的最正确提取工艺.结果:在选定的色谱条件下， 虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷能够达到基线分离.检测白藜芦 醇及其苷的线性回归方程别离为 Y=0.0006X-0.183 (r=0.999

2、6)， Y=0.0011X-0.478 (r=0.9993)；线性范围别离为 0.4838.4 mg/L 和 0.4738.2 mg/L.日内、日间周密度都小于5%，回收率在90%105% 之间，样品分析时刻小于7 min.虎杖中有效成份白藜芦醇和白藜芦 醇苷的最正确提取工艺为乙醇浓度80%，溶剂倍数15,醇提温度70C， 提取时刻2 h.结论：成立了准确靠得住、分析速度快可同时检测虎 杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷的分析方式，优化了质量可控的提 取工艺.【关键词】虎杖；白藜芦醇；白藜芦醇苷；高效液相色谱0引言虎杖（polygonum cuspidtum sieb）为蓼科蓼属连年生草本植物虎

3、杖的干燥根茎，要紧含有蒽醍类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等 成份1.白藜芦醇（3,4,5 三羟基 二苯乙烯）和白黎芦醇苷是 虎杖的要紧功效成份，具有爱惜心脏、抗血栓、降血脂2等药理作 用.白藜芦醇及白藜芦醇苷的药理作用相近，但其极性却相差较大. 本研究探讨一种兼顾白藜芦醇及白藜芦醇苷的提取工艺，并成立同时 测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法（high performance liquid chromatography， HPLC），旨在为虎杖的药理作 用研究和科学合理利用提供实验依据.1材料和方式1.1材料白藜芦醇苷和白藜芦醇的对照品均由中国药品生物制 品检定所提供；虎杖的干药材购

4、自西安市胡家庙药材市场.2695型高 效液相色谱仪，2996型二极管阵列检测器（美国Waters公司）；调温 式电热套（北京科伟永兴仪器）；色谱纯乙腊，甲醇（美国TEDIA公司）， 其他试剂均为国产分析纯.1.2.1工作曲线的成立别离周密称取白藜芦醇苷及白藜芦醇对 照品10 mg置100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成100 mg/L的白藜芦醇苷和白藜芦醇对照品混合储蓄液，备用.别离周密吸 取两对照品储蓄溶液0.05，0.2，1，2, 4 mL配制成浓度为0.5，2, 10，20, 40 mg/L的混合对照品的标准溶液，依次取20 mL进样.色 谱条件为：色谱分析柱：C18（250

5、mmX4.6 mm，5 mm，美国Phenomenix 公司）；流动相：乙腊和水，梯度洗脱如表1所示.检测波长：315nm； 流速：1 mL/min；柱温为30C.按上述色谱条件测定峰面积积分值， 以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度值为横坐标绘制工作曲线，应 用Excel软件采纳最小二乘法计算回归方程.表1HPLC流动相梯度表时刻（min） 乙腊（%） 水（%） 流速（mL/min） 梯度 类型028721.06772281.069 72281.062028721.011.2.2周密度和准确度测定别离周密吸取白藜芦醇及白藜芦醇 苷储蓄液0.1，0.5，3 mL，配成浓度为1，5，30 mg/L

6、混合对照品的 标准溶液.每一个浓度6个样本，持续测定3 d，与标准曲线的成立 同时进行.代入当日的回归方程计算标准溶液的浓度，将结果进行方 差分析，即取得本方式的周密度.将1，5，30 mg/L三个浓度标准溶 液的白藜芦醇和白藜芦醇苷的测定浓度值与标准溶液的标示浓度相 较，即得方式回收率.1.2.3虎杖有效成份提取工艺的优化在本生产工艺研究中，依照 药物有效成份、药理作用及理化性质特点，选择醇提法进行正交实验， 以提取时刻(A 1,2,3 h)，乙醇浓度(B 70%,80%,90%)，醇提温度(C 50,60,70 C)和溶剂倍数(D 10,15,20)作为考察因素，选择3个水平， 综合评判提

7、取工艺，选用L9(34)正交表，安排正交实验.取虎杖10 g，按L9(34)正交表设计的顺序，各加入设定的乙醇 量，加热煎煮规按时刻和次数，滤过，归并滤液，将滤液用甲醇稀释 10倍后取样20 uL，用HPLC法测定白藜芦醇及白藜芦醇苷的峰面积， 带入回归方程中，计算出白藜芦醇和白藜芦醇苷的总量.2结果2.1HPLC检测方式的特异性在本实验选定的洗脱及检测条件下，白藜芦醇和白藜芦醇苷的保留时刻别离为6.8 min和4.7 min.白藜 芦醇及白藜芦醇苷峰和杂质峰能实现基线分离，样品峰的测定不受杂 质峰的干扰(图1).478（r=0.9993）.结果说明，白藜芦醇及其苷别离在0.4838.4mg/

8、L和0.4738.2 mg/L范围内呈良好的线性关系.2.3周密度和准确度测定1,5, 30 mg/L浓度的白藜芦醇苷的日内周密度别离为4.0%, 2.6%和2.0%；日间周密度别离为4.2%, 4.3%和2.6%；方式回收率别 离为（1013.4） %,（942.3） %和（951.3） %.白藜芦醇的日内周密度别离为5.0%,3.0%和2.0%；日间周密度别离为4.8%, 3.9%和 1.1%；方式回收率别离为（96土5.1）%, （952.6）% 和（95土1.6）%. 结果显示本方式准确、重复性好.2.4虎杖有效成份提取工艺的优化将测得值进行方差分析（表 2）,因素B不同具有统计学意义

9、（PK1K3,平 均含量以第2水平为高；B因素中各水平实验结果的和比较为： K1K2K3，平均含量以第1水平为高；C因素中各水平实验结 果的和比较为：K3K1K2，平均含量以第3水平为高；D因素 中各水平实验结果的和比较为：K2K1K3,平均含量以第2水 平为高.选择最正确的提取工艺为提取时刻2h,乙醇浓度为70%,醇 提温度为70C3讨论最近几年来有较多关于虎杖有效成份白藜芦醇和白藜芦醇苷提 取及含量研究的报导，多采纳单因素、正交实验及大孔吸附树脂吸附 法研究白藜芦醇的提取条件3-4；正交实验法及乙醇回流法优选白 藜芦醇提取工艺5-7；以白藜芦醇苷为指标，研究虎杖的提取条件 等8,这些方式均

10、以白藜芦醇或白藜芦醇苷单个成份为指标.由于 虎杖中的活性成份白藜芦醇和白藜芦醇苷都具有爱惜心脏、抗血栓、 降血脂等药理作用，因此咱们在本实验中测定样品中的白藜芦醇和白 藜芦醇苷的总量并以此作为评判指标是合理可行的.咱们的实验结果 说明，正交实验及方差分析结果虎杖醇提取工艺最大阻碍因素为乙醇 浓度B,第二为溶剂倍数D，再次为醇提温度C和提取时刻A.最正确 工艺乙醇浓度为80%，溶剂倍数为15，醇提温度为70C，提取时刻 为2 h.目前对虎杖中白藜芦醇或白藜芦醇苷的测定方式很多9-10， 可是同时对白藜芦醇及其苷测定的报导较少11，要紧存在诸如样品 处置方式复杂、分析时刻较长等问题.本研究成立的同

11、时测定虎杖中 白藜芦醇及其苷的方式选用315 nm作为检测波长，使检测方式取得了 较高的灵敏度.采纳乙腊和水作为流动相，白藜芦醇和白藜芦醇苷与 其他化合物达到基线分离.白藜芦醇和白藜芦醇苷别离在6.8 min和 4.7 min出峰，快速有效地实现了分离检测.综上所述，本研究成立的虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的HPLC检测方式具有灵敏、准确、迅速和工艺稳固、经济等特点，可用 于虎杖提取液中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量测定和有效成份提取的 质量操纵.【参考文献】肖凯，宣利江,徐亚明，等.虎杖的化学成份研究J.中 国药学杂志，2003,38(1):12-15.黄永洪，史假设飞.虎杖的活性成份及其在

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