蛋白质分离采用膜层析

1、蛋白质分离采用膜层析：机遇与挑战抽象使用合成孔和微孔膜作为层析介质填充床色谱的一些相关的问题，是可以克服的。本文综述了目前的 发展状况，在该地区的膜蛋白质的色谱分离。膜色谱的运输现象简要讨论，并在这方面所做的工作进 行检讨。它已被用于蛋白质的分离，以及与不同的应用程序，各种分离化学评论。膜色谱技术所面临 的挑战，突出显示，并的范围为今后的工作进行了讨论。关键词：评论；膜色谱；固定相，LC1、介绍色谱法是迄今为止最广泛使用的用于高分辨率的蛋白质分离和分析技术。传统上，这些过程被进行使 用填料床，其中有几个主要的限制。填充床的压降普遍偏高，往往会增加在一个过程中，由于床合并 （介质变形引起的）的综

2、合影响，造成的胶体物质积累的列致盲。与常规的色谱生化分离过程，特别是那些采用软色谱介质，另一种主要的限制是依赖于颗粒内扩散的溶质分子的结合位点（参照图1这样的介质的孔隙内的运输。这增加了处理时间，因为运输的大分子通过扩散是缓慢的，尤其是当它 被阻碍。因此，回收液量（洗脱所需的）也增加。沟流，即形成流路由于开裂的填充床，是一个大问 题。这会导致短路物质流，导致病床使用率不佳。其他问题包括从使用传统的多分散介质所产生的径 向和轴向扩散限制。其中的一些因素的运输现象是复杂的事实，使填充床层析过程中难以规模的扩大。图1溶质运移填充床色谱和膜色谱。填充床色谱法的一些设计上的限制已被克服，通过使用新开发的

3、单分散性的，无孔的，刚性的色谱介质（例如，参考文献1和 ）。然而，这些媒体通常是昂贵的和溶质的结合能力大大降低自结 合现在可以只发生在外部表面。此外，与这些材料中，高压降的问题依然存在。是一种完全不同的方法来克服的局限性，与填充床使用化学合成的微孔或大孔膜层析介质（如文献34 56）。其结合位点的溶质运输在膜色谱过程中发生主要通过对流（参照图1），从而减少了处理时间，而且回收液量。的结合效率一般是独立的进料流率，在很宽的范围内，也可以使用，因此非常 高的流动速率。的压力损失也显着低于与填充床。另一个主要优点是膜吸附填料床规模相比相对容易。然而，这种潜力还没有得到充分的利用尚未在生物工艺行业。膜

4、色谱法特别适合于较大的蛋白质（即M 250 000）。这样的蛋白质很少进入孔隙中存在的微粒色谱介质的外部可用的表面积，这样的介质上的唯一的绑定。因此，对于较大的蛋白质，可用于绑定的表面积与膜显着更大。较小的蛋白质的 结合能力的膜吸附在一般低于传统的基于凝胶的媒体，但明显高于单分散性的，无孔的，硬介质。膜色谱设备一般都是大量生产更容易，更便宜。这使得有可能有一次性膜吸附器。这些设备可以使用， 直至维持理想的性能（即液压通透性，结合能力，选择性和分辨能力）。一旦他们停止正常运作这些 设备可以更换。消除这种类型的灵活性的要求，以便进行清洁设备重新生效。利用不同的化学分离的蛋白质在膜色谱。已发现一些已

5、在使用中的膜分离过程的其他类型的（例如微 滤）膜是适合作为色谱介质。然而，在大多数情况下，这些可用的膜已被修改，以使它们更适合用作 膜吸附器。也已经开发新型合成膜。填充床色谱分离，膜色谱具有一定的相似之处，另一种方法是基于巨石列上使用。这些列被用棒状的多孔结构，通过对流流动相可以发生。整料列的主要优点是膜色 谱相似。然而，不同的膜材料的结构和形态方面巨石。虽然膜顾名思义就是横向尺寸远远超过了纵向 尺寸的障碍，相反可能是真实的巨石。巨石或许更类似于比膜填充床色谱柱。在这篇评论文章中，膜色谱的发展在该地区的当前状态进行了讨论。发表的文献中的蛋白质膜色谱领 域的审查（例如 膜层析潜在的局限性还强调，

6、这项技术更广泛地接受，在很大程度上取决于找到解 决这些限制。2。膜层析运输现象膜色谱法的优点在于对流物质运输的主导地位。然而，显而易见的，从图，扩散输运不完全缺席。单独对流的优势不一定能保证效率。对流不合适的类型可以是一个严重的缺点。流量分配色谱和确实 大多数类型的分离过程中的一个主要问题。设计合理的膜层析工艺和设备是可能的，只有当涉及的运 输现象，正确理解。但是，它可能是值得一提的是，在许多的层析过程中，特别是那些依赖亲和型的 相互作用，结合动力学进行限制。在这些方法中，在传输现象的改善是可能导致过程的效率显着改善。一般来说，膜吸附器的三种类型的用于对蛋白质生物分离：平片，中空纤维和径向流。

7、单平板很少被 采用。更多的时候，一些平板堆被安置于膜组件。除了提供更多的吸附剂体积，膜堆栈的使用具有p巾 MCDW山- pasmq-FS膜吸附器类型（几何）。下面讨论的某些其他好处。的中空纤维膜具有一个管状的几何形状通常范围从0.25到2.5毫米的直径 与管。中空纤维膜吸附通常由几百纤维管壳式换热器型配置中的一个模块内盆栽的捆绑。径向流吸附 器的制备是通过螺旋缠绕的平片膜的多孔圆筒形芯虬图2p巾 MCDW山- pasmq-FS膜吸附器类型（几何）。图2,表1中。市售的膜吸附器产品名称膜材料/类型组态生产厂家Sartobind MA5，强化企稳纤维素，平板，准备赛多利斯MA15 和 MA100强

8、阳离子交换（S型），使用吸附强阴离子交换（Q型），弱阳离子交换（C型），弱阴离子交换（D型）Sartobind MA120强化企稳纤维素，平板，赛多利斯MA550，MA600X5强阳离子交换（S型），光盘和 MA5500X10强阴离子交换（Q型），弱阳离子交换（C型），弱阴离子交换（D型）Sartobind 因子强化企稳纤维素，径向流赛多利斯两个家庭强阳离子交换（S型），盒式磁带强阴离子交换（Q型），弱阳离子交换（C型），弱阴离子交换（D型）Sartobind C5F，强化企稳纤维素，平板赛多利斯C15X 和 C100X弱阳离子交换Vivapure强与弱，平板，VIVASCIENCE阴，阳离子

9、交换离心Q野马亲水性聚醚砜，径向流鲍尔阴离子交换胶囊和盒式磁带在平片膜吸附器中，该液体通常是引入垂直于膜表面（参照图3）。在中空纤维膜的液体最初平行于膜表面流动（参照图3）。然后将液体逐渐朝向和静水压力差，由于通过毛孔。使用的中空纤维结构的主要优点是高的膜表面积与体积之比，它提供了。使用中空纤维的另一个优点是减少由于横流的孔隙入 口附近的颗粒堆积。在中空纤维中的液体流动模式的观察表明，这种类型的吸附器不能用于脉冲色谱 法依赖于样品注射的形式的脉冲，其持续时间与总的处理时间相比是微不足道的。即使在绑定和洗脱模式，突破有望扩大，导致吸附利用率较差。图中所示的径向流动装置的液体流动模式。3Hollo

10、w ”虹Radial flow图流在膜吸附。图诜项 径向流吸附自称是适合大规模应用。然而，在这些装置中的流动分布预期是相当具有挑战性。膜的面 积也增加，在径向向外的方向。这势必引入的复杂性，导致在其流量通过膜表面的液体流速度下降。 的径向流吸附器显然是不适合脉冲色谱法。它很可能是更适合使用的绑定和洗脱下来模式。然而，结 合和洗脱过程可能是困难的建模和预测。尽管这种感知的缺点，径向流吸附流行的行业用户。赛多利 斯和Pall公司如几个成功的产品已经商品化。在这些产品的设计，已投入相当大的努力，成提高流量 分布。一些研究人员认为占有优势径向流装置的膜堆放远大于缺点产生的气流分布。一旦进入进料膜，它流

11、过的孔，一般均认为相对于膜表面的取向正常。通过膜的总体的液体流动发生 在一个正常的方向。然而，由于大多数微孔膜中孔隙的曲折性，本地化流未必总是如此。液体流动制 度通常是层。主要是对流运输的蛋白质分子内圆柱孔的轴向径向输运，而主要是扩散。轴向运输可能 会受到泰勒分散。然而，这种效果被期待要小。一些研究者已研究膜色谱中的传输现象（例如，参考文献5，21，48，49，55，58L，82，皿和109）。大多数的这些文件作为模型系统的基础上的平片膜。处理与运输现象膜色 谱最早的论文之一是内裤和库拉5L。数学公式被提出和解决一个理想化的膜吸附的基础上成堆的平 板来预测突破和洗脱曲线。动态吸附和洗脱研究使用

12、的酶甲酸脱氢酶和丙酮酸脱羧酶的数学公式所预测的趋势进行了实验验证。孙先生及策尔幽提出了一个数学模型，该模型考虑到对流，扩散和吸附 等温线符合Langmuir型了。这种模式也是基于一个平板式膜吸附。在本文中，它被预测，用很薄的 膜的流率的上限可以由配体-蛋白质关联动力学限制。被推荐一些薄膜使用堆栈来克服这个限制。还 强调了膜的孔隙度和厚度的变化所带来的局限性。这个数学模型的大众运输的影响进行了探讨（单克 隆抗体）使用的实验研究49在随后的纸张。Tennikova和斯威克21研究了膜色谱法（平板）的大众运输的现象主要是基于操作参数。大众交通 影响流程效率的运行参数（如肤浅的速度，孔径，膜的厚度，蛋

13、白质扩散）所观察到的影响进行了讨 论。他们报告说，检查系统的处理效率，并不限定于流率。这被认为是由于增强扩散蛋白质运输，由 于流速增加（即增加传质系数）。据报道，近四年幅度高于其各自的解决方案扩散订单毛孔内的蛋白 质的扩散系数。刘和油炸讨论根据溶菌酶的吸附在平板亲和膜系统的一个模型系统幽。在重要的细节，传质的影响 进行了讨论。的径向和轴向扩散和孔径分布和膜厚度的变化的影响的重要性进行了审议。增加的细孔 径分布和膜厚度的变化显着地拓宽了穿透曲线。有人建议，用大量的膜堆“平均化”流动分散会增加清 晰度的突破曲线，因此增加的结合效率。Roper和莱特富1Q91，在他们的评论文章中，定性地讨论了不同类

14、型的膜吸附器的传质现象。最近，Sarfert策尔55，杨等人幽和特赫达等人108讨论在设计膜吸附传质的影响。3。化学分离回顾早期的评论文章往往集中大量运用在膜色谱（如文献化学分离17，30，32和65）。这些 措施包括离子交换（IEX），亲和力疏水相互作用（HI）和反相（RP）为基础的分离（参见图4）。使 用的离子交换和亲和相互作用得到越来越广泛的报道。已经有显着减少工作疏水相互作用和基于反相 蛋白质膜色谱。60Affinity I EX HI & RP图4, 相对使用不同的化学分离，膜色谱。图选项 文献回顾的基础上，亲和分离似乎构成单一最大的细分市场。这可能是由于与不同的配体，可以相对 容易

15、地附着到膜。事实上，亲和相互作用被广泛应用于从不分青红皂白地使用术语“亲和膜”一些研究 人员表示所有类型的膜具有约束力的性质是显而易见的。用于亲和膜色谱的配位体大致可分为四种类 型：1。免疫亲和配体；2。A或G蛋白；3。低分子量的质量的配体;其它配位体。表2中列出了不同的免疫亲和配体的用途。免疫亲和层析依赖于利用生物特异抗原抗体识别和结合。使用抗体作为配位体可能是更加普遍。然而，在理论上的抗原可能同样也可以使用作为配位体朝它特 定的纯化抗体。使用多克隆抗体和单克隆抗体免疫亲和配体的报道。然而，预期的结合效率和选择性 显着更高的单克隆抗体。附件所涉及的化学抗体膜主要从开发活动抑制细胞膜上的酶和其

16、他聚合物表 面。同时开展这些附件护理程序必须注意，以确保结合的抗体保持其生物特异性的抗原结合能力。表2中。基于免疫亲和配体的膜色谱配体膜目标蛋白/秒吸附楼盘。几何抗IgE抗体再生纤维素IgE抗体平板四抗牛血清白蛋白抗体再生纤维素BSA中空纤维26人igGGMA-EDMAG蛋白平板23单克隆抗体酰肼白细胞介素-2受体中空纤维73单克隆抗体酰肼白细胞介素-2中空纤维74BSA单克隆抗再生纤维素BSA平板85抗体反HSAP抗体纤维素人血清淀粉样蛋白p（HSAP）平板Z81反 RINFa2A酰肼重组干扰素-a2A中空纤维73单克隆抗体（a2ARINF）IgG抗体（GMA-EDMA）共聚重组蛋白G平板2

17、5IgG抗体微孔膜人低密度脂蛋白平板69IgG抗体微孔膜人低密度脂蛋白平板网表选项蛋白A,蛋白G是通过抗体的Fc区特异性结合免疫球蛋白G (IgG)的物质。是不是这种类型的识 别和结合抗原抗体结合的一个例子，因此列为一个单独的类别。表3列出了各种用途的蛋白质A和G 蛋白膜色谱。抗体附件，附件中涉及的化学蛋白质A和G膜主要从开发酶固定。表3。蛋白A和G亲和膜色谱配体膜目标吸附楼盘。蛋白质/s的几何蛋白A羟乙基纤维素处理IgG抗体中空纤维31混合聚醚砜和聚环氧乙烷蛋白A / G基于甲基丙烯酸甲酯的IgG抗体平板34共聚物重组蛋白G再生纤维素IgG抗体平板53蛋白A基于尼龙人IgG平板皿蛋白A聚(醚

18、型聚氨酯-脲)人IgG平板86蛋白A复合膜人IgG中空纤维3重组蛋白A聚醚砜人IgG中空纤维27重组蛋白A聚砜人IgG中空纤维28重组蛋白A复合纤维素膜人IgG径向流87重组蛋白A / G聚己内酰胺人IgG平板29蛋白A环氧鼠单克隆平板88抗体（IgG）G蛋白基于尼龙人IgG平板103蛋白A聚（偏氟乙烯）人IgG平板100蛋白A聚（GMAEDMA）人IgG平板64重组蛋白G的 Immobilon AV人IgG平板59子类表选项表4列出了各种低分子量的质量（LMM）配体的报告的用途。合成染料是最广泛使用的LMM的配位 体。这主要是遗留下来的早期发展领域的填充床亲和层析。其他LMM的配位体包括氨基

19、酸，糖类和 底物类似物。表5中列出了其它类型的配位体，包括肽，聚合物物质和固定化金属离子。不同的成膜 材料（如甲壳素）具有内在的亲和力不同的蛋白质结合能力。表4。低分子质量的配体亲和膜色谱法配体膜目标蛋白/秒吸附楼盘。几何染料F3-GA基于尼龙BSA平板5活性黄HE-4R基于尼龙丙酮酸脱羧酶平板5普施安红HE-3R基于尼龙甲酸脱氢酶平板5染料 Cibacron Blue 3GA纤维素溶菌酶平板82麦芽糖纤维素伴刀豆球蛋白A平板18苯丙氨酸基于聚乙烯IgG抗体中空纤维35色氨酸基于聚乙烯IgG抗体中空纤维36组氨酸Polyethylenevinyl人IgG中空纤维朝酒精染料F3-GA基于尼龙腺苷

20、酸激酶平板国染料F3-GA改性纤维素碱性磷酸酶平板Z6染料F3-GA丙烯酸共聚物BSA管状的71染料F3-GA聚（羟乙基牛过氧化氢酶平板啊甲基丙烯酸甲酯）染料F3-GAsartobind 蓝2酵母的葡萄糖-6 -磷酸平板6磷酸盐脱氢酶染料F3-GA支持壳聚糖人血清白蛋白的平板11对 Aminomethylbenzoyl聚（甲基缩水碳酸酐酶平板61磺胺丙烯酸酯）的基础天门冬氨酸再生纤维素天冬氨酸平板105对氨基苯甲壳聚糖膜胰蛋白酶平板14染料F3-GA壳聚糖膜人血清白蛋白的平板15染料F3-GA基于尼龙丙氨酸脱氢酶平板102普施安蓝MX-R改性聚乙烯肌酸磷酸激酶中空纤维99表选项表5中。其他类型

21、的亲和膜色谱法配体膜目标蛋白/秒吸附楼盘。几何肽配体PentadecapeptideGMA-EDMAIgG抗体平板24十六肽GMA-EDMAIgG抗体平板24此聚合物配位体基于甲壳素大孔甲壳素膜溶菌酶平板121胶原环氧联蛋白平板621胰蛋白酶改性聚砜大豆胰蛋白酶抑制剂平板751基于甲壳素大孔甲壳素膜麦胚凝集素平板161大豆胰蛋白酶抑制剂改性聚乙烯胰蛋白酶中空纤维461嗜硫配体单克隆抗体螺旋缠绕四固定化金属离子配体铜2 +Sartobind IDA膜细胞色素C，溶菌酶平板671和胰凝乳蛋白酶铜2 +玻璃膜细胞色素C，溶菌酶，管状的911胰凝乳蛋白酶的和核糖核酸酶A铜2 +基于尼龙溶菌酶，卵清蛋白

22、和平板921刀豆蛋白A表选项 离子交换膜指用于膜色谱介质的另一个主要部分。大量用于微孔膜已知有离子交换性能。在许多应用 中，这被认为是一个主要的缺点。然而，这个属性被证明是潜在有用的进行色谱分离。一些这些膜进行了修改，以提高他们的离子交换容量。介绍了不同的带电基团，如磺酸（S），磺丙基（SP），二乙基氨基乙基（DEAE），季铵（Q），以获得高的蛋白结合膜。表6列出了各种报告所使用的离子交换膜 色谱用于蛋白质的分离。在市售的色谱膜，离子交换膜构成的最大部分。表6。离子交换膜色谱类型膜目标蛋白/秒吸附楼盘。几何阳离子交换sartobind S （磺酸型）血红蛋白，溶菌酶径向流81阴离子交换DEA

23、含有 GMA-EDMA肌红蛋白，伴清蛋白，平板21共聚物卵清蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂阳离子交换sartobind S （磺酸型）溶菌酶，卵清蛋白平板83阴离子交换sartobind Q （季铵型）牛血清白蛋白，IgM抗体平板83阳离子交换sartobind S （磺酸型）血浆蛋白平板阴离子交换sartobind Q （季铵型）血浆蛋白平板阳离子交换sartobind S （磺酸型）单克隆抗体（IgG）平板84阴离子交换sartobind Q （季铵型）单克隆抗体（IgG）平板84阴离子交换大孔壳聚糖膜细胞色素，溶菌酶，平板13卵清蛋白，人血清白蛋白，大豆胰蛋白酶抑制剂阳离子交换S型纤维素膜BS

24、A平板55阳离子交换sartobind S （磺酸型）溶菌酶，胰凝乳蛋白酶原平板66A和大豆胰蛋白酶抑制剂阴离子交换Sartobind Q （季溶菌酶，胰凝乳蛋白酶原平板66铵型）A和大豆胰蛋白酶抑制剂阴离子交换快速磁盘Q膜人肿瘤坏死因子平板63阳离子交换SP聚乙烯溶菌酶中空纤维37阳离子交换sartobind S （磺酸型）鼠单克隆抗体（IgG）平板88阳离子/阴离子Sartobind S 和 Q Sartobind鼠单克隆抗体（IgG）平板93阴离子交换DEAE MemSep 100卵清蛋白和肌红蛋白平板94阴离子交换DEAE MemSep 的磷酸二酯酶平板95阳离子/阴离子和Q纤维素膜乳

25、清蛋白平板52阳离子/阴离子和Q纤维素膜乳清蛋白平板四阴离子交换聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）卵清蛋白，伴清蛋白，平板幽肌红蛋白，大豆胰蛋白酶抑制剂阳离子交换sartobind S （磺酸型）溶菌酶，牛血清白蛋白平板询阳离子/阴离子S，DEA和EA呈现膜BSA中空纤维42阳离子/阴离子S，DEA和EA呈现膜BSA中空纤维43阳离子/阴离子S和DEA呈递共聚物牛奶中的蛋白质平板68和纤维素膜阳离子/阴离子DEAE 和 SP Zetaprep 100的人血白蛋白径向流96阳离子交换SP MemSep 1010乳清蛋白，牛血清白蛋白平板倒阳离子/阴离子CM 和 DEAE MemSep 1010 的溶菌酶

26、，细胞色素C，平板97胰凝乳蛋白酶，乳清蛋白，伴清蛋白和卵清蛋白阳离子/阴离子和Q纤维素膜乳球蛋白，溶菌酶，平板69伴清蛋白，细胞色素和胰凝乳蛋白酶阴离子交换QAE-Cellulose/acrylic&半乳糖苷酶平板104阳离子交换SP-改性聚乙烯溶菌酶平板38阴离子交换DEAE-聚（GMA-EDMA）大豆胰蛋白酶抑制剂，平板62肌红蛋白和伴清蛋白阴离子交换改性的纤维素，聚（乙烯基BSA平板101氯）复合阳离子交换S -聚（甲基丙烯酸缩水甘油酯）溶菌酶中空纤维47阳离子交换CM MemSep 1010疫毒，单克隆抗体平板皿阴离子交换DEAE MemSep 1000氨基端结构域平板107甲酰四氢

27、脱氢酶阴离子交换DEAE-聚合物BSA中空纤维曲阳离子交换磺酸型膜乳铁蛋白和乳过氧化物酶平板56表选项表7列出了各种利用反相和疏水性的相互作用为基础的膜色谱分离。多数可以在合成膜是用有机溶剂不兼容。这或许可以解释反相膜色谱为什么却鲜有报道。疏水性相互作用是已知有其他化学分离的几 个优点，特别是从蛋白质的稳定性的点。因此，这是令人惊讶地注意到稀缺膜色谱分离蛋白质利用率 的报告。一般的做法一直在疏水膜色谱附加各种膜的疏水性配体（通常是烃链或环）。各种可用的膜进行疏水相互作用为基础的分离的内在属性可能还需要进行调查79L。表7。反相和疏水性相互作用膜色谱膜/配体目标蛋白/秒吸附楼盘。几何苯乙烯一二乙

28、烯苯卵清蛋白，人血清白蛋白平板24苯基接枝聚乙烯BSA中空纤维44甲基丙烯酸十二烷基酯含有肌红蛋白，核糖核酸酶A，平板21GMA-EDMA溶菌酶和胰凝乳蛋白酶a快速磁盘C4人肿瘤坏死因子平板63甲基丙烯酸十二烷基酯含有肌红蛋白，核糖核酸酶A，平板21GMA-EDMA溶菌酶和胰凝乳蛋白酶aHydrophilised聚偏氟乙烯鼠单克隆抗体（IgG）平板79癸醇聚（偏人源化单克隆平板80二氟乙烯）膜抗体（IgG）改性聚乙烯BSA中空纤维45表诜项用于色谱分离不同类型的膜已审阅早期的评论文章（如文献17和 皿）。纤维素类膜的使用是 最广泛的报道。4。审查申请从表2,表3,表4,表5,表6和表7可以看出

29、，膜色谱已被用于各种各样的蛋白质分离。的大多 数文献评论的二元或多元蛋白的混合物的分离处理。也有一些基于一个单一的蛋白质结合和突破的研 究报告。应用程序可以被分类的基础上分离不同的蛋白质。图。5,蛋白质膜色谱分离（根据文献回 顾）被分为五个大类。40Monodanal &8仙浦 Serum Enzymes Other antibody ancibody albuminprotslnis蛋白质膜色谱分离。图选项虬5也许并不真正代表的潜在应用膜层析。这是由于不同的利益在这一领域的研究，大致可分为三类： （一）生物技术热衷于使用生物混合物的利益，膜色谱（二）膜的研究人员热衷于寻找新膜的应用及 （c）

30、工艺工程师热衷于模型膜层析。当然，还有那些谁属于一个以上的这些类别。基于应用的研究主要涉及工艺开发的特定蛋白质的分离，从复杂的的天然混合物（如提纯的单克隆抗体细胞培养上 清）。模拟蛋白质的混合物的分离，合作自然发生的（例如，血清白蛋白和免疫球蛋白），也可以是大 致分类为基于应用程序的研究。然而，蛋白质的分离，这是不能同时存在的天然混合物如牛血清白蛋白（BSA）和溶菌酶可能不属于这一类。模拟已被分离的混合物的基础上，其特征在于，很容易找到的蛋白质，例如牛血清白蛋白，溶菌酶，肌红蛋白，卵清蛋白，伴清蛋白，细胞色素C和胰凝 乳蛋白酶原。以及其特征在于，在这些蛋白质中，可以以非常纯的形式，代表了广泛的

31、物理化学性质 （即等电点，分子量）。这些模型蛋白质，这主要是用于演示的新的膜的性能和适宜性，因此非常适 合作为理论研究。图危和尝试已取得代表膜色谱的蛋白质纯化的潜在应用。这是基于真实的蛋白质混合物的分离或仿 自然共同出现的蛋白质的混合物的文献处理。血清抗体代表的单一最大的应用领域。酶，单克隆抗体 和血清白蛋白后续以该顺序。然而，必须指出，这种酶类别包括不相似的分子实体。P0JS岑P0JS岑wnBm_cQ-puLAEq图6图6,应用膜色谱用于蛋白质分离。图诜项 临界分析评论文献，似乎显示膜色谱法纯化的蛋白质是没有它们各自的天然存在的混合物的主要成分 的适用性。例如，抗体发生血清或血浆中白蛋白的浓

32、度比在低得多的。类似地，单克隆抗体的细胞培 养上清中的浓度一般是远低于主要的杂蛋白，如牛血清白蛋白。这指向两件事情：首先，膜吸附器处 理大量的液体，并且，第二，一般低蛋白结合能力的适用性。膜色谱因此，可能是更适合于大量液体， 含有低浓度的目标蛋白的纯化过程，在这过程中要被处理。当目标蛋白为主要成分的饲料中，膜色谱的使用很可能在很大程度上仅限于特定的杂质除去少量的110。5。面临的挑战：进一步研究和发展的原动力膜色谱填充床色谱的几个明显的优势。但是，也有一定的局限性，需要克服。一些主要的限制，或者 我们应该说挑战，膜色谱是：1。入口流量分配；2。膜的孔径分布；3。膜的厚度不均；4。降低约束力容量

33、。流量分配的问题不是单靠膜吸附独有。事实上，Yuan等人皿和莱特富等人112已经讨论了有关的问题，一般在层析过程中的流动分布。不过，这个问题可能尤为严重，由于存在一个大的正面面积相 对于床的高度，在膜色谱法。的膜吸附器的进气口进入一般是在输入一个较大的圆形横截面的圆形通 道的形式。在平片膜吸附器中，进料通常是沿径向分布在整个的领先的膜表面用合适的安排。在膜吸 附饲料引进，溶质（即蛋白）前最好同时击中所有领先的膜。来实现，由于各种各样的原因，这是相 当困难。溶质的一定程度的失真发生的配管本身内，由于开发速度剖面。然而，这是一个小的因素。 吸附剂本身的低效率的流量分配进一步扭曲了溶质的前面，从而扩大导致吸附剂的利用效率降低的穿 透曲线的形状。入口流量分配的改善是一个相当大量的工作需要做，如果膜色谱是有竞争力的地方。 在堆栈中使用更多的膜片也可以减少这种问题。然而，产生的气流分布的缺点，更可能影响脉冲色谱 法。正面（或捕获）色谱，缺点由于流动不畅分布有没有可能是关键。的孔隙中存在微孔和大孔的膜，一般不会具有相同的直径。通常有一个孔径分布，这在大多数情况下 是单峰。在某些情况下，有可能是一个双峰分布。具有宽的孔径分布的问题是，进料流将优先发生过 较大的“流孔”，将进行非常小的材料，通过较小的孔隙。其结果，吸附剂的利用