肿瘤标志物检测原理和常见问题分析培训课件

1、本次讲解内容肿瘤标志物概述及试剂检测原理结果不一致原因分析常见问题答疑本次讲解内容肿瘤标志物概述及试剂检测原理结果不一致原因分析常背景 图 2009年中国部分市前十位疾病死亡专率及死亡原因构成，数据引自“中国卫生统计年鉴2011”背景 图 2009年中国部分市前十位疾病死亡专率及死亡原因构背景 目前对肿瘤最有效的措施：早发现，早治疗 图像诊断 CT核磁共振 化学诊断免疫学指标血清学癌反应 细胞及组织 背景 目前对肿瘤最有效的措施：图像诊断 CT化学诊断免疫学一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理1.肿瘤标志物定义： 肿瘤标志物（tumor marker，TM）是指恶性肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞

2、合成分泌或是由机体对肿瘤细胞反应而产生和（或）升高的，可预示肿瘤存在的一类物质。存在于血液、体液、细胞或组织中。参考文献：肿瘤标志物的临床应用建议 中华检验医学杂志2012年2月第35卷第2期 P103.一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理1.肿瘤标志物定义： 一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理2.肿瘤标志物临床应用 高危人群筛查肿瘤辅助诊断疗效评价复发监测及预后一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理2.肿瘤标志物临床应用 高危一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理3.方法学原理：双抗夹心免疫学方法一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理3.方法学原理：双

3、抗夹心免疫一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理4.肿瘤标志物物试剂盒组成一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理4.肿瘤标志物物试剂盒组成一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理4.肿瘤标志物检测试剂盒组成反应缓冲液（A液）：1瓶，2.5ml/瓶。PE标记混合抗体溶液（B液）：1瓶，2.5ml/瓶。校准品：6瓶，0.2ml/瓶，分别为：CAL1-CAL6。微球混悬液（C液）：1瓶，2.5ml/瓶。终止液（D液）：1瓶，15ml/瓶。 AFP HOOK 指示微球溶液（H液）：1瓶，250ul/瓶。（仅限含AFP指标）说明书：1份。 封板纸：2张。96孔反应板：1块。光盘（读数模板+计算模板）一.肿瘤标志物概述及试剂

4、检测原理4.肿瘤标志物检测试剂盒组成一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理5.反应过程简介 +C液 25ul 37反应60min +D液 100ul 振荡混匀，读数，计算浓度 恢复到室温、校准品复溶、重悬微球准备工作 A液 25ul+ 样本 10ul+ B液 37反应5min第一步反应第二步反应终止反应一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理5.反应过程简介 +C液 2一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理6.独特的抽样技术一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理6.独特的抽样技术一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理6.独特的抽样技术一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理6.独特的抽样技术一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理7.获得信

5、号值一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理7.获得信号值一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理8.剂量反应曲线Y4=b4x4+a4Y5=b5x5+a5Y3=b3x3+a3Y2=b2x2+a2Y1=b1x1+a1样本1样本2一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理8.剂量反应曲线Y4=b4x一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理核心反应原理一.肿瘤标志物概述及试剂检测原理核心反应原理二、结果不一致原因分析1.基本概念-准确度、正确度、精密度1.准确度2.正确度3.精密度二、结果不一致原因分析1.基本概念-准确度、正确度、精密度1二、结果不一致原因分析1.基本概念-不精密度补充说明95%置信区间二、结果不一致原因分析1.基

6、本概念-不精密度补充说明95%置二、结果不一致原因分析1.基本概念-灵敏度和特异度（阳性符合率、阴性符合率）试验方法和金标准比较2*2列联试验方法金标准合计阳性(+)阴性(-)阳性(+)aba+b阴性(-)cdc+d合计a+cb+da+b+c+d二、结果不一致原因分析1.基本概念-灵敏度和特异度（阳性符合二、结果不一致原因分析1.基本概念-相关性二、结果不一致原因分析1.基本概念-相关性二、结果不一致原因分析1.基本概念-相关性二、结果不一致原因分析1.基本概念-相关性二、结果不一致原因分析1.基本概念-相关性二、结果不一致原因分析1.基本概念-相关性二、结果不一致原因分析2.不同免疫检测方法

7、检测肿瘤标志物结果差异原因分析（1）计量学溯源问题上梁不正下梁歪二、结果不一致原因分析2.不同免疫检测方法检测肿瘤标志物结果二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析TM编号时间说明AFPAFP1975NIBSC持有CEA73/6011975NIBSC持有HCG99/6502001NIBSC持有PSA96/6681999NIBSC持有PSA96/6701999NIBSC持有表 目前已知肿瘤标志物有国际标准（国际约定校准）的指标二、结果不一致原因分析TM编号时间说明AFPAFP1975

8、N二、结果不一致原因分析表 无国际标准标志物溯源情况二、结果不一致原因分析表 无国际标准标志物溯源情况二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析二、结果不一致原因分析图 不同方法学胃蛋白酶I检测的系统误差，因为缺乏国际标准，导致系统间存在显著的差异：二、结果不一致原因分析图 不同方法学胃蛋白酶I检测的系统误差二、结果不一致原因分析（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰类风湿因子本质是一种免疫球蛋白，可以特异性的识别自身IgG的Fc部分，属于一种自身抗体。主要存在形式为IgM RF（约占80%）及IgG RF。RF产生原因有（1）人体IgG在物理因素下其抗原性发生变

9、化持续刺激免疫系统；（2）免疫功能紊乱；（3）遗传因素。二、结果不一致原因分析（2）.类风湿因子（Rheumatoi二、结果不一致原因分析（2）.类风湿因子（Rheumatoid Factor,RF）干扰二、结果不一致原因分析（2）.类风湿因子（Rheumatoi二、结果不一致原因分析（3）HAAAs（HAMA）干扰(human anti-animal antibodies,HAAAs)二、结果不一致原因分析（3）HAAAs（HAMA）干扰二、结果不一致原因分析（4）.异嗜性抗体干扰模式图二、结果不一致原因分析（4）.异嗜性抗体干扰模式图二、结果不一致原因分析（5）.补体干扰免疫检测系统中捕获

10、抗体在向固相包被中和标记抗体的标记过程中,抗体分子发生变构,其Fc 段的补体C1q 分子结合位点被暴露出来,使C1q 可以将二者连接起来,从而造成假阳性。一些公司为了增加检测的敏感性,使用链霉亲和素包被固相,将捕获抗体用亲和素标记,此过程也可引起捕获抗体的构象发生改变,造成假阳性或假阴性升高。二、结果不一致原因分析（5）.补体干扰免疫检测系统中捕获抗体二、结果不一致原因分析（6）.抗体标准化问题-CA125二、结果不一致原因分析（6）.抗体标准化问题-CA125二、结果不一致原因分析（6）.抗体标准化问题-CEA厂商CEA Gold1CEA Gold 2CEA Gold 3CEA Gold 4

11、CEA Gold 5RocheYYCanAgYY上海透景？Y Abbott？罗氏CEA说明书二、结果不一致原因分析（6）.抗体标准化问题-CEA厂商CE二、结果不一致原因分析（6）.抗体标准化问题-CA19-9Sonia L. Laulu, and William L. Roberts Performance Characteristics of Five Automated CA 19-9 AssaysJ, Am J Clin Pathol 2007;127:436-440.二、结果不一致原因分析（6）.抗体标准化问题-CA19-9S二、结果不一致原因分析（7）.钩状（Hook）效应二、结果

12、不一致原因分析（7）.钩状（Hook）效应二、结果不一致原因分析（7）.钩状（Hook）效应二、结果不一致原因分析（7）.钩状（Hook）效应二、结果不一致原因分析（8）.钩状（Hook）效应二、结果不一致原因分析（8）.钩状（Hook）效应二、结果不一致原因分析（9）.外源性污染导致的部分肿瘤标志物假阳性唾液导致CA199、CEA假性升高。人体唾液中含CA199、CEA等抗原，因避免唾液对检测过程的污染。人体表皮皮屑、唾液、汗液导致SCCA指标假性升高。人体表皮细胞中含大量SCCA抗原，皮屑汗液等如果在实验过程中掉入到反应体系中将对SCCA产生假阳性。细菌污染导致假阳性另外细菌污染导致血清产

13、生大量悬浮物与沉淀，在反应中导致非特异性吸附的发生，易导致假阳性。携带污染和交叉污染此类污染易出现在ELISA方法学及采用相同样品针的仪器上。二、结果不一致原因分析（9）.外源性污染导致的部分肿瘤标志物二、结果不一致原因分析（10）室间质评样本差异二、结果不一致原因分析（10）室间质评样本差异二、结果不一致原因分析（10）室间质评样本差异二、结果不一致原因分析（10）室间质评样本差异三、常见问题答疑Q1 有关肿瘤标志物Hook效应问题无HOOK效应弱HOOK效应强HOOK效应HOOK效应即钩状效应, 由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象解答：AFP在临床上有非常高的样本出现，因此我们有设置

14、HOOK微球指示，其它项目因为我们试剂本身检测范围较广，出现HOOK的概率非常低，所以没有设置HOOK指示微球。三、常见问题答疑Q1 有关肿瘤标志物Hook效应问题无HO三、常见问题答疑Q2 有关肿瘤标志物HAMA效应问题解答：HAMA效应是众多特异性干扰中的一种。正常人群中，约有20%的人会有或高或低的HAMA反应，因此，每家厂家的试剂都会有相应消除HAMA的成分，对于我们来说，A液主要用途就是消除HAMA等类似干扰。但和所有厂家一样，都不能保证100%的消除HAMA反应，偶尔会有个别样本出现假阳性，此类样本，需要通过稀释等手段确认。三、常见问题答疑Q2 有关肿瘤标志物HAMA效应问题解答：

15、三、常见问题答疑Q3 有关肿瘤标志物试剂盒装量的问题解答：公司试剂盒装量一般按照110人份的量进行装量，多出来的试剂一个是为了防止枪头、粘壁等的损失，一个是弥补需要做标准品的缺点。三、常见问题答疑Q3 有关肿瘤标志物试剂盒装量的问题解答：公三、常见问题答疑Q4 有关肿瘤标志物定标频率的问题解答：因为手工操作误差、反应温度、移液器系统误差及其它系统误差，每次试验间会有区别，造成整体信号值的变化，因此不做标准曲线会导致结果存在系统偏差。公司要求必须每次试验做标准曲线。三、常见问题答疑Q4 有关肿瘤标志物定标频率的问题解答：因为三、常见问题答疑Q5 有关于肿瘤标志物试剂盒组成问题96孔板光盘校准品H

16、液D液C液（微球混悬液）B液（PE标记抗体）A液（反应缓冲液）三、常见问题答疑Q5 有关于肿瘤标志物试剂盒组成问题96孔板三、常见问题答疑Q6 有关肿瘤标志物f-PSA临床意义的问题解答：患良性疾病概率增加患前列腺癌概率增加三、常见问题答疑Q6 有关肿瘤标志物f-PSA临床意义的问题三、常见问题答疑Q7 肿瘤标志物阳性意味着什么？解答：TM阳性 恶性肿瘤三、常见问题答疑Q7 肿瘤标志物阳性意味着什么？解答：三、常见问题答疑Q7 肿瘤标志物阳性意味着什么？1.采血检测PSA项目前，进行直肠指检、前列腺穿刺等临床操作，PSA水平可升高；丝裂霉素、顺铂等抗肿瘤药物使PSA水平增高；2. 采血检测CA

17、125项目，受检对象处于月经期，CA125水平会增高；3. 妊娠会引起AFP、freehCG、CA125水平的增高；4. 吸烟人群CEA水平会有轻度升高；5. 在肿瘤手术治疗、化疗和放疗过程中，由于肿瘤组织受到破坏或肿瘤坏死时某种肿瘤志物产生增加，从而影响肿瘤标志物的测定，造成假阳性6. 标本放置时间过久或溶血会导致NSE水平增高7. 唾液、汗液会引起SCCA、CEA、CA19-9水平增高；8. HAMA效应会造成多种肿瘤标志物假阳性；9.良性疾病会引肿瘤标志物升高，肝脏良性疾病如肝炎、肝硬化会造成AFP升高，肾衰会造成CEA水平增高等，前列腺炎会引起PSA水平增高等。三、常见问题答疑Q7 肿

18、瘤标志物阳性意味着什么？1.采血检测三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？动态监测三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？136月份TM水平0肿瘤标志物动态监测动态监测TM水平变化，比参考范围更有意义cutoff三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？单项标志物轻度升高者，定期复查监测指标的数值变化情况，有条件的尽量复查全部的常用标志物，一旦体内有恶性肿瘤存在，可能会有几种标志物异常。如果复查后数值一直维持在参考值

19、上限的临界水平，则意义不大。以下几类情况要特别重视： 单次检查升高特别明显，数倍于正常值的上限 反复检查，数值动态持续升高 有家族性遗传史肿瘤筛查时肿瘤标志物增高三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？无症状患者伴CA19-9水平升高的临床处理原则三、常见问题答疑Q8 无症状的肿瘤标志物升高的患者如何处理？三、常见问题答疑Q9 肿瘤标志物阴性意味着什么？TM阴性 未患恶性肿瘤三、常见问题答疑Q9 肿瘤标志物阴性意味着什么？TM阴性 三、常见问题答疑Q9 肿瘤标志物阴性意味着什么？1. 抗雄激素治疗前列腺疾病，会降低血清PSA水平，甚至假阴性2. 钩状效应会造成肿瘤标志物水平偏低或假阴性3. 标本保存不当，会造成易降解的肿瘤标志物水平偏低，甚至假阴性4. 产生肿瘤标志的肿瘤细胞数目少5. 细胞或细胞表面被封闭6. 机体体液中一些抗体与肿瘤标志物（肿瘤抗原）形成免疫复合物7. 肿瘤组织本身血循环差，其所产生肿瘤标志物不能分泌到外周血三、常见问题答疑Q9 肿瘤标志物阴性意味着什么？1. 抗雄三、常见问题答疑Q10 肿瘤产品注册证问题指标名称上海透景罗氏雅培贝克曼