成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养

1、成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养【摘要】目的探究成年大鼠骨骼肌成肌细胞的原代培养方法。方法取成年istar大鼠的后肢肌肉,利用组织块法培养成肌细胞。并对培养细胞进展形态学研究和细胞鉴定。结果采用组织块培养成肌细胞的密度可达118/l,成肌细胞的分化鉴定显示94%以上的细胞呈骨骼肌特异的肌细胞。结论利用组织块法成功培养成年大鼠原代骨骼肌成肌细胞,该方法实用性强,所得成肌细胞纯度高,为深化研究心力衰竭骨骼肌成肌细胞自体移植奠定了基矗【关键词】骨骼肌成肌细胞原代培养大鼠成年【Abstrat】bjetive：Texplreanexperientalethdfrpriaryulturefadultrat

2、skeletaluslesarblastethds:uslefpsterirlibfristarratereulturedbytissueultureethd.Theellsereuntedandbservedbylightirspybinedithidentifiatin.Results:Thenuberfskeletaluslesarblast118perillilitre.skeletaluslesarblastelldifferentiatinareditshedthatver94%ellserestainedpsitivefrygenin.nlusins:Tissueultureet

3、hdnvenientlyperitsthepurifiatinandPrliferatinfyblast.Theseesultsprvidethebasisfrfuturestudiestassesstheabilityftheellstrepairheartfailure.【Keyrds】skeletaluslesarblastpriaryultureratadult心肌细胞是终末化组织，不能再生。心梗后坏死的心肌必然被纤维组织代替。当前内外科的治疗均不能修复及逆转已经坏死的心肌，坏死的局部经过心脏重构，最终开展为缺血性心力衰竭，其5年生存率不到50，缺血性心衰的病理生理有多种因素参与，但丧

4、失心肌细胞是主要原因。如何攻克缺血性心力衰竭已成为本世纪的最大课题。目前治疗终末期心力衰竭的唯一有效方法是心脏移植，而心脏移植受到器官来源、经费、免疫排挤反响方面的限制，可以承受心脏移植手术的病人目前每年只能到达近百例，目前细胞移植已经成为治疗缺血性心衰最有前景的方法之一。心肌细胞移植是向心肌梗死疤痕区注入某些肌源性未成熟或未分化的细胞成分，这些细胞在心肌的微环境下可以成熟，向心肌细胞转化，改善心功能。骨骼肌成肌细胞是首先应用于临床试验、并在临床试验中研究最多的移植细胞。越来越多的证据说明，相比拟间质干细胞而言，骨骼肌成肌细胞可能是更为理想的干细胞移植对象，其原因有以下几点：骨骼肌成肌细胞对缺

5、血、缺氧的环境更为耐受；骨骼肌成肌细胞可以确定的转化成横纹肌特性的肌细胞；骨骼肌成肌细胞容易提娶分立、培养和增殖1,2。1材料与方法选用成年istar大鼠购于哈医大实验中心，低糖DE培养基、ha，sF-10培养液、低糖DE培养基、小牛血清gaba公司产品骨骼肌成肌细胞获娶别离、培养及标记选用成年istar大鼠,麻醉下切取胫前肌1g,研磨肌肉组织,酶解15分钟(胶原酶IA，1.5g/l,37)，继之放PBSEDTA(0.25)中37下20分钟，置入100一u细胞过滤器中，过滤后离心,细胞置于F-10培养液中,1青链霉素(10000单位/l)，放入细胞培养箱中培养(37,52)。3d换液一次,待细

6、胞长满瓶底即可传代。2结果成肌细胞的培养采用组织块培养法贴块2d后即可见有细胞从肌小粒边缘爬出,细胞呈梭形,胞浆透明。1周后细胞可长满瓶底的60%70%,其数目可达105,此时细胞可呈多角形,充分伸展,局部细胞密集区可见细胞呈向心性生长,互相间排列整齐,类似骨骼肌的纵切面。成肌细胞的分化鉴定换用诱导分化液后细胞可在3d内分化,交融交织形成肌纤维,可观察到收缩现象;并且局部细胞分化形成细长的肌管,高倍镜下可见多个核及核分裂象。这些现象为成肌细胞所特有,可以作为简便的鉴定方法。3讨论目前最大的动物和临床研究资料是使用骨骼肌成肌细胞，它存在于成人骨骼肌中，在创伤后可增生，重构肌肉。近10年来有诸多关

7、于在鼠与绵羊将骨骼肌成肌细胞成功移植到心肌的研究报告。它们显示可将自体骨骼肌成肌细胞注射到受损心肌内，形成横纹迹2000年6月15日成肌细胞移植首先应用于临床3。1期临床试验的成功证实了此方法的可行性4。然而在试验中唯一不利的事件是移植后心律失常的发生。然而在试验中唯一不利的事件是移植后心律失常的发生，在早期术后3周内发生在4例患者中，除一例患者耐受。发生原因可能由于骨骼肌成肌细胞不能形成心肌细胞间的间隙连结，它们不能与心肌本身的细胞等速进展电传导，从而易导致恶性心律失常。但FrigliL等的研究说明，骨骼肌成肌细胞缺血心肌移植后骨骼肌成肌细胞可以和心肌细胞之间形成通道连接，松弛素可以增强这种

8、细胞间连接5。我们采用组织块法成功培养了成年大鼠的成肌细胞,组织块培养法实用、可行,耗材少、本钱低,可获得含量超过90%以上的成肌细胞。采用此方法培养成肌细胞,短期内获得大量成肌细胞成为可能,也为我们进一步开展成肌细胞心肌内自体移植创造了条件。我们的研究结果意图在于贴近临床,为心力衰竭患者采用自体成肌细胞治疗提供实验根据,也为心脏疾病的基因治疗奠定基矗参考文献1nniT，DeppiP，BelliniS。Hlgusustleae1UlaratriKseededithautlgusyblastsaSatissueengineeringapprahtabdinalalldefetrepairBiat

9、erials2022ay：26(15)：2567742RigatelliG，RssiniK，VindigniVNeperspetivesinthetreatentfdaagedyardiuusingautlgusskeleta.3enasheP,HagegeAA,Srsin,etal.yblasttransplantatinfrheatfailure.lanet.2001,357:279-280.4enasheP,HagegeAA,VilquinJT,et,al.Autlgusskeletalyblasttransplantatinrrseverepst-infartinleftventriulardysfuntin.JAllardil,2022,41;1078-835FrigliLFraniniF，TaniA.rphfun