shiyan抗微生物药物和敏感性试验课件

1、 抗菌药物敏感试验 临床病原生物学教研室抗菌药物敏感性试验纸片琼脂扩散法 经世界卫生组织推荐,目前各国临床微生物学实验室广泛采用的标准纸片扩散法是由Kirby和Bauer所建立的纸片琼脂法,即Kirby-Bauer法(K-B法纸片琼脂扩散法) 实验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上,纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度,在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度.目的要求1.掌握纸片扩散法的原理、操作方法、结果判读和临床意义2.熟悉纸片扩散法的质量控制。

2、器材与试剂1.菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌2.培养基：M-H培养基3.试剂：无菌生理盐水、0.5麦氏比浊管、药敏纸片4.其他：无菌棉拭、镊子、毫米尺、接种环操作步骤1.取分纯待测菌菌落(直径1mm)数个置于生理盐水管中，校正浓度为0.5麦氏标准，校正后菌液15min内接种。2. 用无菌棉拭子蘸取菌液,在管内壁将多余菌液旋转挤去后在琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60度,最后沿平板内缘涂抹1周3.平板置室温下35分种后用纸片分离器或无菌镊将含药纸片贴于琼脂表面,各纸片中心相距应大于24mm,纸片距平板内缘应大于15mm4.35孵育1618h,甲氧西林和万古霉素药敏结果孵育

3、24h ，量取抑菌圈直径。5.药敏纸片的选择参照书上表1-2(五) 结果解释用精确度为10mm的游标卡尺量取抑菌环直径,参照标准解释结果.根椐常规剂量给药后测定药物能在体内达到的血药浓度将抗菌药物敏感性标准分为以下三级敏感(susceptible):表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭中介度(intermediate):不是敏感性的度量,这一范围作为“缓冲域”,以防止由微小的技术因素失控导致的结果偏差,因而其临床意义是不确定的,故不应作临床报告.对于KB法测得的结果在中介度的药物,如没有其他替代品,使用前应作定量(稀释法)药敏试验(MIC)以确证其敏感性耐药(r

4、esistant):表示测试菌不能被在体内感染部位可达到的抗菌药物浓度所抑制 表 纸片法药敏试验纸片含药量和结果解释 抗菌药物 纸片含药量 抑菌圈直径(mm) 耐药 中介 敏感 阿米卡星 30 ug 14 1516 17 庆大霉素 10 ug 12 1314 15 青霉素 10单位 28 - 29 苯唑西林 1ug 10 1112 13 氨苄西林 10 ug 13 1416 17 哌拉西林 100 ug 17 - 18 头孢唑林 30 ug 14 1517 18 头孢呋辛 30 ug 14 1517 18 头孢他啶 30 ug 14 1517 18 氨曲南 30 ug 15 1621 22 亚

5、胺培南 10 ug 13 1415 16 环丙沙星 5 ug 15 1620 21 万古霉素 30 ug - - 15 克林霉素 2 ug 14 1520 21 复方新诺明 1.25/23.75 ug 10 1115 16 抗菌药物敏感性试验(七) 质量控制采用标准菌株金葡菌ATCC25923,大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853等与测试菌在同一条件下做药敏试验标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内.如果超出范围,则不应发出报告,及时检查原因,予以纠正每日标准菌株的测定结果应以抑菌圈直径为纵坐标,天数为横坐标绘制室内质控图,要求每天抑菌圈变化数不得超过2mm标准菌株应每周在MH琼脂上传代一次,4保存 抗菌药物敏感性试验意义1.对敏感性不能预测的临床分离菌株进行常规药敏试验,帮助临床医师选择抗感染治疗药物2.临床因治疗效果差而考虑更换抗菌药物时,应对拟选药物进行药敏试验3.了解所在医院或地区常见病原菌耐药性的变迁情况,定期通报临床,有助于临床的经验治疗选药4.评价新抗菌药物抗菌谱和抗菌活性5.对细菌耐药谱进行分析和分型有助于某些菌种的鉴定,并作为医院感染流行病学调查的手段之一抗菌药物敏感性试验特殊耐药菌检测（一）耐甲氧西林葡萄球菌检测金葡菌：1ug苯唑西林抑菌圈10mm或MIC0.4ug/ml凝固酶阴性葡萄球菌： 1ug苯唑西