高效液相色谱法测定岗松中槲皮素的含量

1、高效液相色谱法测定岗松中槲皮素的含量【摘要】目的对岗松进展分析研究，测定岗松中槲皮素含量,为岗松的质量标准制定提供方法和根据。方法采用高效液相色谱法HPL测定岗松中槲皮素含量。色谱柱为Lihrspher18(4.6250,5)，流动相为甲醇-水-磷酸-三乙胺50:50:0.45:0.2，检测波长370n，柱温室温，流速1l/in。结果槲皮素在0.080.48g范围内呈良好线性关系r=0.9994，平均回收率为100.64，RSD为1.65(n=9)。结论该法简便可行，重复性好，可作为岗松中槲皮素的含量测定方法。【关键词】岗松；槲皮素；高效液相色谱Abstrat：bjetiveTdevelpae

2、thdfrdeteriningthententfqueretininthenaturalherbfBaekeafrutesensL.ethdsAnHPLethdassetuptdeterinethententfqueretininBaekeafrutesensL.,usinglihrspher18(4.6250,5)lun，andethanl-ater-phsphriaid-triethylaine(50:50:0.45:0.2)asthebilephase,theUVdetetinavelengthas370n,ithaflratef1.0l/inatrteperature.ResultsA

3、gdlinearasbtainedintherangef0.080.48gandtheaveragereveryas100.64%,RSDas1.65%(n=9).nlusinTheethdissiple,andithgdreprduibilityfrthedeterinatinfqueretininBaekeafrutesensL.Keyrds：BaekeafrutesensL.;Queretin;HPL岗松为桃金娘科岗松属植物岗松BaekeafrutesensL.，主要分布于广西、广东、江西、福建等地，具有化淤止痛、清热解毒、利尿通淋、杀虫止痒之成效，用于跌打淤肿、肝硬化、热泻、热淋、小便

4、不利、阴痒、脚气、皮肤瘙痒、疥癣、水火烫伤、虫蛇咬伤。目前对岗松生药的研究除了其挥发油成分外1，还从岗松中提取别离得到了黄酮类化合物槲皮素。关于岗松中黄酮类化合物的含量测定未见文献报道。本研究采用高效液相色谱法，对其中的黄酮类化合物槲皮素进展含量测定，以期为药材的进一步开发利用提供根底化学数据，为岗松药材的质量标准研究奠定基矗1仪器与试药美国aters公司液相色谱仪，515泵，UV2487可变波长检测器；威玛龙色谱工作站。槲皮素对照品供含量测定用，批号0081-9904由中国药品生物制品检定所提供，经面积归一化法测定，纯度大于98%；岗松植物采自广西南宁，经广西中医药研究院中药研究室赖茂祥副研

5、究员鉴定为桃金娘科岗松属植物岗松B.frutesensL.。甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸、三乙胺及其它试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为Lihrspher18(4.6250,5)；流动相为甲醇-水-磷酸-三乙胺50500.450.2；检测波长370n；柱温室温；进样量20l；理论塔板数按槲皮素计算大于3500。2.2提取条件的选择对回流时间进展了比拟，结果加热回流1h的提取率显著高于0.5h，而与回流2h的提取率相当见图1，说明回流1h根本可以将样品中的槲皮素提取完全，为缩短分析时间，选择回流时间为1h。图1不同提取时间提取率的比拟略2.3对照品溶液及供试品溶液的制备2.3.

6、1对照品溶液的制备精细称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成12.5g/l的对照品溶液，色谱图见图2。图2槲皮素对照品色谱图略2.3.2供试品溶液的制备取岗松药材粉末0.3g，精细称定，置烧瓶中，精细参加50%甲醇-盐酸95:5混合溶液25l，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜0.45滤过，取续滤液，即得。色谱图见图3。2.4线性关系的考察精细称取槲皮素对照品约10g，置10l量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得1g/l标准品溶液，精细汲取2.5l标准品溶液至50l量瓶中，用流动相稀释并定容至刻度，得50g/l的溶液，摇匀，备用。分别精细汲取50g/

7、l的对照品溶液0.8l，1.6l，2.4l，3.2l，4.0l，4.8l至10l量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件，进展测定。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进展线性回归，得回归方程为Y=8.2491106X-2.9605104，r=0.9994。结果说明，对照品在0.080.48g范围呈良好线性关系。图3供试品色谱图略2.5精细度实验取同一供试品溶液，连续重复进样6次，结果槲皮素峰面积平均值为1944301，RSD=1.69%。2.6稳定性实验取同一供试品，每隔2h进样，进展了12h考察，结果槲皮素含量的RSD1.83%。2.7重复性实验精细称取同一批次岗松药材样品各

8、6份，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算，结果槲皮素的平均含量为1.0639g/g，RSD2.30%。2.8加样回收率试验称取已测知含量的药材样品槲皮素平均含量为1.0639g/g0.15g，共9份，精细称定。按高、中、低3个浓度分别精细参加1.0g/l的槲皮素对照品溶液0.10，0.16，0.22l，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并计算，结果槲皮素的加样平均回收率为100.64%,RSD=1.65%。2.9样品含量测定搜集不同产地的岗松药材，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件依法测定槲皮素含量。结果见表1。表1岗松样品中槲皮素含量测定结果略3结论本实验建立了分析岗松药材中槲皮素含量