农药提取与净化

1、第一部分蔬菜农药残留的提取一 . 分析样品的提取分 析 样 品 的 分 类分析 样品 是指 实验 室 中， 用于 分析 测定 并 提供 某种 样品 残留 数 据的 那一 部分 样 品。所以分析的样 品 要求 必须 是 均 匀 且 具 有 代 表 性 的。在处 理比 较陌 生的 样 品， 尽可 能参 考相 关 文献 报道 的方 法制 备 ， 这 样可 以减 少 TOC o 1-5 h z 许多困扰。由于样品中的物质和结构的差 异， 使 得 样 品的 提取 ，尤 其是 浓 缩提 取 的 净 化 。一般将样品分为三类：中等和高含水量的样品；根和鳞茎类蔬菜：胡萝卜、洋葱；夜绿 素含 量最 低 的 蔬

2、菜和 水果 ：仁 果、 核 果、 浆果 和柑 橘 ；叶绿素含量高的作物：叶菜和豆菜；干燥品；油脂类。农 药 残 留 条 件 的 选 择提取 就是 将残 留在 样 品中 的多 种农 药，采 用合 适的 有机 溶剂 和 方法 ， 将 其分 离出来，以供净化 后测 定，这 是农 药分 析非 常关 键的 一步。提取效果 的好 坏，一 方面决定 于溶 剂的 选择 ， 另一 方面 和提 取的 方 法也 有密 切的 关系 。 在选 择提 取 溶 剂 时 ，既要注意到溶剂本身的性质， 又要 结合 农 药的 特性 及样 品的 状 况，在选用提 取方 法时也要考虑上述情况。溶剂的选择在农 药分 析中 几 乎 不

3、单独 采用 非极 性溶 剂 ， 通 常是 与极 性溶 剂 混合 使用 或只 采用极 性溶 剂。 主要 溶 剂的 极性 强弱 如下 ：水乙腈甲醇醋酸 乙醇异丙 醇丙酮 二恶 烷四氢呋 喃 甲 基乙 基甲 酮 苯酚正丁醇 乙 酸乙 酯乙醚 硝 基甲 烷二氯甲 烷氯仿 苯甲苯 二 甲苯四氯化 碳 二硫 化碳 环 己烷正己烷 正 庚烷 煤 油在农 药分 析中 应用 最 广的 溶剂 为石 油醚 、 丙酮 、二 氯甲 烷和 乙 酸乙 酯等 。农药的极性在提 取样 品中 的农 药 残留 时，农药本身 的 极性 以及 在提 取溶 剂 中的 溶解 度，直接影 响提 取效 果，一 般采 用和 农药 极性 相 仿的

4、 提取 溶剂 ，即“ 相似 相溶 ”原 理，选 择具 有广 泛覆 盖面 的 溶剂 作为 农残 提取 溶 剂。 部分 有机 磷的 极 性强 弱如 下：氧化 乐果敌百虫敌敌畏马拉流磷倍硫 磷 甲 基对 硫磷对硫 磷甲拌磷 溴硫磷辛硫磷样品的状况样品 的特 点和 状态 ， 在提 取时 也必 须认 真 考虑 。在AOAC（美国分 析化 学家 协会）中 将样 品分 为 脂 肪性 和非 脂肪 性 两 大 类。脂 肪含 量大 于 10%为 脂肪 样品，小于10%则 为非脂肪 性样 品。脂肪性大的样品 ，需要先提取脂肪， 而后 测定 脂肪 中的 农药残 留量。 非脂肪 性 的样品又分为含水样 品和干品两大类；

5、前 者的 水分 含量 75%，后者 为干 的或 低水 分 样品。 含 水分 样品 又 分含 糖多 少分 类： 含 糖 5%以下， 含 糖 1530%等几 种 . 如 下表 示 :脂肪干品低糖中糖状态非脂 肪含水 样品高糖 TOC o 1-5 h z 不同现状的样 品 , 必须采用不同的提取溶剂。在谷物、茶叶一类水分低的样品中，不同提取溶剂 的 提取效率的差异最为突出，即便采用极性溶剂也不能完全提取 ，必须采用含水2040%的溶剂或预先向试样中加入等量的水之后再行提取。土壤是个比较特殊的样品，是农药污染最 大的受害者，许多 农 药较强的与 土壤 耦合 ，比动植物组织的提取更困难。土壤的水分 、有

6、机质、极性 化合物以及其 他因 素的 不同 对农药的结合也不同，一般粘土高沙 土低。农 药 残 留 的 提 取 和 纯 化 （ 净 化 ）在农 药残 留分 析中 ，提取 溶剂 必须 适用 于 具有 不同 含量 的水 分 、油 脂 、糖 分和 物质 的基 质中 ，提取 出具 有各 种极 性的 化 合物 。为 了 提供 合适 的条 件，使 残留 物从 样品中转移到提取溶液中。例如土壤、粮食等干燥样品用一种或多种混合溶剂浸泡，经震 荡或 索氏 提取；中、高含水 量的 样品 ，需在 高速 捣碎 机中 ，在一 种或 混合 溶剂 TOC o 1-5 h z 的存在下加以粉碎。在通常情况下，蔬菜和水果用匀浆

7、机或组织捣碎机提取。1初 步 提 取 溶 剂 的 体 系丙酮提取法：用于含多糖类样品中农药的提取，再用二氯甲烷 经液- 液分配转入二氯甲烷中。在有机磷和有机氯多残留分析中已经广泛使用。乙腈提取法：适用于一些农药，但若是水溶的农药时，采用二 氯甲烷进行液 -液分 配。丙酮- 正已烷混 剂： 用于非极性化 合物 ， 极性有机 磷和 有机氯农药及其性代谢产物。此外，也有报道采用乙腈- 二 氯甲 烷、 乙腈-氯仿、丙酮- 二氯甲烷、丙酮-石油 醚。对于谷物、 秸 秆、 茶 、土壤等干燥 样品 ， 添加一倍水量后或用 含水 溶 液 提 取 ，提取率比直接用极性溶剂要高得多。2初 步 提 取 液 的 纯

8、化 （ 净 化 ）液 - 液 分配 净化 法： 液 - 液 分配 是一 种常 用的 净化 方法 ，基 本 原理 是 分 配 规 律 ， 根据 农药 与杂 质在 不 同溶 剂中 溶解 度的 差 别 ， 常用 一种 非极 性 溶剂 和极 性溶 剂对 来 进行 分配 ，如 ：丙 酮 - 已烷 、乙 腈 - 乙烷 （ 石油 醚） 、丙 酮 - 二 氯甲 烷、 二甲 基甲 酰 胺 - 已 烷等 。 农药 与 脂肪 、 蜡质 、 色素 等 一起 被正 已烷 提取 后 ， 再用 一种 极性 溶剂 ， 如乙 腈与 其共 同振 摇 ，使农 药与 脂肪、蜡质、色 素完 全分 开。这样农药 大部 分被 乙腈所 提取

9、 ，经几 次提 取，农药几 乎可 以完 全与 脂肪 等杂 质分 离 ，从 而达 到 净化 的目的。弗罗 里硅 土柱 层析 方 法： 弗罗 里硅 土柱 层 析净 化方 法 在 农药 残 留分 析中 已有 广 泛应 用，而在多残 留 分析 中常 用极 性不 同 的溶 剂体 系，把各种 农药 淋洗 入不 同的 洗提馏 分中 ，使 农药 得 到分 组分 离。 MILLS 等提 出的 淋洗 体系 为A、 B、 C3种 极性 依次增 大的 体系 ： A液 ：二 氯甲 烷： 正已 烷 （ 1： 4） 、 B 液： 二 氯甲 烷： 乙腈 ：正 已 烷（ 50： 0.35 ： 49.65 ）、 C液 ：二氯 甲

10、烷 ：乙腈 ：正已 烷（ 50： 1.5 ： 48.5 ） THEIR 的用 石油 醚： 二氯 甲 烷（ 4： 1 ）石 油醚 ： 二氯 甲烷 （ 3： 3） 二 氯甲 烷： 甲 醇 （ 19： 1 ）的 淋洗 体系 ，分 离水 果和 蔬菜 中的 一 些磷 酸酯 、有 机氯 、 甲基 氨基 甲酸 酯、 苯 基氨 基甲 酸酯 和脲 类 农药 。黄士 忠等 研究 采用 二 氯甲 烷： 石油 醚： 丙 酮（6：3： 1）预淋及 二氯 甲烷 ：石油 醚： 丙酮 （ 6： 3.5 ： 0.5 ） 淋洗 ，分 离了 土壤 和粮 食中 10 种有 机 氮， 回收 率 81103%。农 药 残 留 的 提 取

11、 操 作 方 法震 荡 法 ：将样 品和 溶 剂装 入具 塞容 器（具 塞锥 形瓶），放在震 荡机 上，进 行往返震 荡或 旋转 震荡 。 定时 开塞 放气 。组 织 捣 碎 提 取 法 ： 将 样品 和溶 剂装 入组 织 捣碎 机中 ， 通 过高 速 旋转 的刀 具掺 合， 使溶 剂侵 入样 品组 织 中，与其残 留农 药充 分接 触，使 残留 农药 提取 出来 。本法 提取效率 高。 适用 范围 广 ，每 次提 取时 间 35 分钟 ，提 取次 数 12 次 。索 氏 提 取 法 : 将样品 装入 和提 取器 匹配 的 滤纸 包好 ，然 后用 合 适的 溶剂 反复 提 取。回流液一定要浸

12、泡整 个试 样。 本方 法 适用 于干 品， 如谷 物 、干 果、 脱 水 蔬 菜 、茶叶、干饲料等。消 化 法 ：酸、 碱消 化 法， 条件 是农 药在 酸 、碱 中稳 定。其它 方法 ：超 声波 法 、浸 渍法 、洗 脱法 等 等农 药 残 留 的 净 化 技 术在样 品的 提取 液中，除了农药 残留 外，还 有色 素、油 脂或 其他 天然 物质，在测定前 须去 除这 些干 扰 物质 ，这 就是 净化 。由于 农药 种类 不同 ，采用 的检 测器 也不 同 。 各 种检 测器 对净 化 液程 度的 要求 也 互不 相同 。 ECD放 射 源易 受污 染， 对净 化 要求 高， FPD对净

13、化 要求 不高 ，采 用简 单 的方法净化就可以了。液 - 液 分配 ：在 一组 织不 相溶 的溶 剂对 中 ，溶 解某 一溶 质成 分 ，这 种溶 质以 一 定比例分配在溶剂的两相中。 在两 相溶 剂 中的 分配 比称 为分 配 系数 。 如 此反 复分 配，便可 使不 同的 物质 组 分得 到分 离，从而达 到净 化的 目的 。 分 配 时溶 剂体 积及 提取 次数，必 须根 据 P 值 进 行计 算。 P 值指 在一 组等 容积 互不 相溶 的 溶剂 对，溶 质以 一 定 比例分配在溶剂的两相中，该 比值 即为 该 物质 对该 组溶 剂的 P 值 。1 乳化 的 解决：溶液分配 过程 中

14、，往 往会 出现 乳化 现象，如不很好 的解 决，会 TOC o 1-5 h z 影响分析结果的准确性。加入饱和硫酸水溶液：由于溶液中有大量的硫酸钠 离子 存在 ， 盐析 作用 可以使乳化层破坏，（也可以加入适量的氯化钠）。加入 一定 量 的 硫酸 水 溶液， 加入 量由 10 毫升、 20 毫 升、 30 毫 升逐 步增 加，乳化可以减轻或消除，此法只适用于对酸稳定的农药。采用 高速 离心 ，破 坏 乳化 层， 消 除 乳化 现 象。根据样品的情况添加，如蜂蜜和炼乳类，可以加草酸钾，茶 叶 类的 可加 入丙酮或甲酸，含糖样品，可以加入丙酮。2在 多残 留分 析中 常用 极性 不同 的溶 剂

15、体系 ，把 各种 农药 淋 洗入 不同 的洗 提馏分 中， 使农 药得 到 分组 分离 ，然 后测 定 。MILLS 等 提出 的淋 洗 体系 为 A、 B、 C3种 极 性依 次增 大的 体系 ： A液 ： 二 氯甲 烷 ： 甲醇 （ 19： 1） 的淋 洗体 系， 分离 水果 和 蔬菜 中的 一些 磷酸 酯 、有 机氯 、甲 基氨 基 甲酸 脂、 苯基 氨基 甲 酸脂 和脲 类农 药。黄士 忠等 研究 采用 内 径 1.5 厘 米， 长 18 厘米 的玻 璃层 析柱 ， 在柱 底部 填入 少量玻 璃棉 ，先装 入 4 克无 水硫 酸钠 ，然后 再将 入 5 克处 理过 的 弗罗 里硅 土

16、，稍 加打 实，最上层 加 4 克无 水硫 酸钠 。该 柱 先用 30 毫 升二 氯甲 烷 ：石 油醚 ：丙 酮（6： 3：1 ）预 淋， 待预 淋液 面进 入上 层无 水硫 酸 钠时 ，将 待净 化的 浓 缩液 移入 柱中 ，弃 去收集 的预 淋液 ，待 上 液面 接近 上层 无水 硫 酸钠 时， 先用 50 毫 升含10%乙醚 的石 油醚淋 ，再 用 120 毫 升 二氯 甲烷 ：石 油醚 ： 丙酮 （ 6： 3： 1 ）淋 洗， 控制 流速 34 毫升 / 分，收集二次 淋 洗液、浓缩、定容。此法分离 了土 壤和 粮 食中 10 种 有机 氮类 农药， 其回 收率 为85101%。酸净

17、化 ： 是 化学 处 理净 化的 一种 方法 ， 它可 以有 效去 除脂 肪 、 色素 和杂 质。此法 只适 用于 对酸 稳 定的 农药 。凝 结净 化法 ：根 据一 些有 机磷 和有 机 氮农 药对 净化 要求 不 严格 和偏 酸性 条件下 稳定 的特 点，采 用凝 结净 化法 进行 净 化。在含有 30%丙 酮 或乙 腈提 取液 中加 入1013 毫升 的凝 结 液 （ 20 克 氯化 铵和85%磷酸40 毫 升溶 于 400 毫升 蒸馏 水中 配 置 ，再稀 释 5 倍）和 1 克 助滤 剂，振摇1520 次，静止5 分 钟，过 滤，根据杂质 和色 素的含 量，确定凝结 的 次数。在滤液

18、 中加 入 适用 氯化 钠（ 防止 乳 化），用（50*3 ）毫升二 氯甲 烷萃 取 3 次 ，合 并有 机相 ，浓 缩 、定 容。其 它： 氧化 铝层 析法 、活 性炭 和混 合 柱净 化法 等等二、一般试剂的要求、纯化、活化和灭活水 ：取 100 毫升 水 ，用 10 毫 升石 油醚 提取 ，取 5 微 升石 油 醚提 取液 ，进 行 分析，在色谱图上，除石油醚溶剂 峰外 ， 无其 他杂 质峰 。中 性氧 化铝 （层 析 用） ，在 550 灼 烧 4 小时 密 封保 存， 用 前于 130 烘 5 小时，储存于干燥器中备用。弗 罗里 硅土 （ 6080 目） 在 600650 灼烧 3

19、小 时， 用前 于130 烘 5 小时 ，储存 于干 燥器 中备 用 。 弗罗 里硅 土 （ Florisil, 硅镁 吸附 剂） 是 一种 合成 的硅 酸镁 ， 具有 很大 的表 面积 ，活化 3 小 时以 上 ，然 后放 在干 燥器 中避 光 保存 。使 用 前最 好再 于130 下活 化过 夜 ，至 少加 热 5 小时 ， 用玻 璃盖 瓶后 于130处保存 或者 置于 干燥器 中。 如在 室温 下 保存 2 天 后， 需于 130 重新 加热 。加2%水降活（ 按 重 量 计 ）弗罗 里硅 土，既使用 含有30%二氯甲烷 的 已烷 液作 为淋 洗溶 剂 ，可 吸附 1 克 油或 脂肪。

20、如用 含有10%二 氯甲 烷的 已烷 淋洗 时 ，甚 至可 吸附 2 克 油 或脂 肪。弗罗 里硅 土活 性的 测 定： 通常 认为 ， 1 克硅 酸镁 将要 吸附 100 毫 克分 子量 为 200 的化 合物，则活性 比 较合 适。选 用月 桂 酸 作为 被吸 附的 物质 。月桂 酸分 子量 在 200左右 ，是 固体 ，比 较 容易 提纯 ，易 溶于 已 烷中 、用 酸碱 滴定 法 可以 直接 测定 ，操 作 步骤如下：将 2.000 克弗 罗里 硅 土放 入 25 毫克 标准 磨口 锥形 瓶中 ，盖 上 铝箔 ，在130下加热过夜 ， 加 塞后 冷却 至室 温 ， 加 20 毫升 月桂

21、 酸溶 液 （内 含月 桂酸 400 毫克 ） ，塞好 后间 歇地 振 荡 15 分钟 。 等吸 附剂 沉 下后 ，吸 取上 清夜 10.0 毫 升 ，移 入 125 毫升 锥形 瓶中 。吸 取 的上 清夜 中不 应带 入 弗罗 里硅 土。 加入 中 性酒 精 50 毫升 和酚 酞指 示剂 3 滴 。用 0.05N 氢氧 化钠 溶液 滴定 至终 点。 称取 100 200 毫克 月桂 酸 ， 在相 同条 件下 ，用 0.05N 氢氧 化钠 溶液 进行 滴定 。确定 每毫 升 0.05N 氢 氧化 钠溶 液所 相当 的 月桂 酸毫 克数 ， 则 每 克弗 罗里 硅土 所吸附 的月 桂酸 值按 下

22、 式计 算 :每克 弗罗 里硅 圭所 吸 附的 月桂 酸的 毫克 数 （ 月桂 酸值 ）=200-（ 滴 定的 0.05N 氢 氧化 钠的 毫升 数 *每 毫升 0.05N 氢 氧化 钠 溶液 所相 当的 月桂 酸 毫克 数 ）硅 胶 （60120 目 ）630 2 小 时 , 冷 却至 5060 3-5%水 振摇 , 密封 保存 。无 水硫 酸钠 （分 析 纯） ，在 700灼 烧 4 小时 ， 密封 保存 。脱 脂棉，将脱脂 棉 发入 大号 索氏 提取 器 中，加4%丙酮- 正已 烷，在 水浴 上回流 4 小时 后， 在通 风 橱内 让其 自行 挥发 干 。溶 剂： 取 300 毫 升 溶

23、剂 ，放 入旋 转蒸 发 器中 浓缩 近干 （约 1 毫升 ）， 取 1 微升 注入GC， 在色 谱图 上， 除溶 剂峰 外 ，无 其他 杂质 峰。 提 纯方 法很 复杂 ，建 议直接 购买 农残 级试 剂 使用 。石油 醚 沸 程为 3060 主 要该 6090 90120 ， 其主 要成 分 为脂 肪族 烃类 的 混合 物； 丙 酮沸 程为 5557 ； 乙酸 乙酯 沸 程为 76.577.5 ； 乙腈 沸程 为 8182 ， 可与 水、 醇和 醚任 意 混合 ，毒 性很 大 ； 二 氯甲 烷 3941 ； 甲 醇 6466。三、提取效果的评价在实 验室 中， 一 般对 提取 方法 的评

24、价是 通 过 添 加 回 收 实 验 来量化的。一般 固定“净 化” 和“ 测定 ” 条件 ，而 变换 前面 的 “提 取” 条件 ，来 比 较“ 提取 ” 效 果 的 。 不足 的是 比真 正的 提 取率 要高 。 还 有一 种 完全 提取 法，采用与 农药 极性 相似 的提 取溶剂，长时间索 氏提 取。然 后与 选择 的方 法对 比。如 果两 种方 法的 结果 相近，则认为所采用的提取方法有效。采用 同位 素的 化学 性 质一 致性 的原 理， 把 农药 分子 中的 原子 换 成放 射性 同位 素， 使农药带上标记，此方法有直接了 解提 取 的效 果。 国内 使用 不 多。最 低检 出浓

25、度： 也叫 最低 检出 限， 表 示用 添加 法能 可靠 地 实际 检测 出待 测 农药 的最 低含 量 （以 mg/kg ） ， 最低 检出 浓 度必 须低 于或 等MRL值。以 色谱 法为 例，最低 检出 浓度 与最 小 检出 量、样 本溶 液定 容体 积、样 本溶 液进 样体 积、称 样重 量相 关， 以下 式表 示。 最 低检 出浓 度（ mg/kg ） =最 小检 出量 （ mg） *样 本溶 液定 容体 积 （ ml）样 本溶 夜进 样 体 积 （ul）* 称样 质量 （ g）根据 检测 目的 衡量 检 测方 法最 低检 出浓 度 是否 符合 要求 ， 若 为 了与 规定 的最 高

26、 残留 量（MRL值）比较，以判断被 检样 本 残留 量是 否超 标时 ，一般 要求 最 低 检 出 浓度 低 于 MRL值 一 个数量 级 （ 10 倍） 即 可。 若规 定 的MRL很 低 （ 小于 或 等 于 0.05mg/kg ）时 ， 则 最 低 检 出 浓 度 小 于 或 等 于 MRL值 即符 合 要 求 ， 最 低 检 出浓 度 与 规 定 的 MRL 值的关系见下表。最 低 检 出 浓 度 （ mg/kg ）0.0010.0050.010.020.020.040.10.10.20.51.0MRL 值 ( mg/kg )0.0010.010.020.050.10.20.5125

27、10. 回 收率 用添 加法 测 定回 收率 ， 原 则不 添 加浓 度以 接近 待测 样 本的农药含量为宜。但由于 待测 样本 中的 农药 残留 量是 未 知的 ，因 此 ，一 般以 该样 本的最高的残留量（MRL值）和方 法 最低 检出 浓度 10 倍 的浓 度做 添加 浓度 。 若没 有 MRL值 与最 低检出浓度之间的浓度作为添加浓度，即添加回收率试验必须选3 个添加浓度。若 没有 MRL值 参照 时， 以 最低 检出 浓度 和高 于 最低 检出 浓度 10 倍 的浓 度做 添加 回收 率， 每一个浓度进行3 次以上的重复试验。添加回收率结果应以接近100%为佳， 但由于杂质干扰，操作

28、误差等诸多因素的影响，实际结果会有很大偏差，添加回 收率70110%， 平均 回收 率 80%为 满意 结果 。 不同 添加 浓度 要求 回 收率 范围 如下 。添 加 浓 度 /(mg/kg)回 收 率 /%0.1801100.010.1701100.0010.01601200.001501203.相对标准偏 差（RSD）或变异系数：是标准偏差在平 均测 定值中 所占的百分率，也叫变异系数。在进行添加回收率实验时，对同一浓 度的 回收率试 验必须进行至少三次重复。平 均 实验结果偏差与添加浓度相关，添 加浓 度 愈低，允许偏 差愈大，不同 添加 浓度 回收 率 实验 所要 求的 相对 标 准

29、偏 差如 下。添 加 浓 度 /（ mg/kg ）相 对 标 准 偏 差 /%11010250.1125500.010.1501004确证实 验： 报告 检测 结果 之前 应需 进 行确 证实 验， 以免 做 出错 误结 论。 对待测 农药 进行 定性 定 量的 方法 有以 下几 种 ：（1 ）改 变测 定条 件或 方法 （如 色谱 法改用 光谱 法）；（2）改 变检 测器 ；（3）改变色 谱柱 ；（4）薄 层析 法 ；（5）衍生化法 ；（ 6） 气 - 质或 液 - 质 联用 技术 ；（7）生化测 定技 术（ 酶抑 帛 法、 酶 联 免 疫 法 ）等， 可根 据检 测目 的 和待 测农 药种

30、 类以 及 实验 室的 仪器 条件 和 技术 专长 等选 择有 效 的确 证方法。维护进 样口进样 隔垫 ，一般 3050 个 进样 换一 次 ，新隔 垫用 手拧 紧至 C 形环 不跟 转 ，切 勿 用扳 手。衬 管，不分流，一 般不 用玻 璃毛 ，不分 流防 止碎 ！一 般一 个月 一次，用手拧，注 意螺 纹，不用扳手，最后可用 扳手 适当 拧紧。 ALS 自动 进样 用筒 形，人 工进样为 锥形 。2衬管清洗 石英 衬管 可用5%的稀盐酸 浸泡 放置 超声 波清 洗机 超 20 分钟 ，然 后用 脱 脂棉通 几次 即可 （注 意 要用 蒸馏 水多 次冲 洗 、烘 干） 。 Liner 的

31、去活 化方 法论 Liner的玻 璃管 内部 ， 如 无 水质 柄的 棉花 棒，则 一般 的塑 胶枘 的棉 花 棒则 只可 用肥 皂水 中 刷洗 ，最 后 冲洗 干净 ，干 燥后 进 行去 活化 的步 骤：干 燥后 Liner 先 用玻 璃吸 管吸 取 甲醇 冲洗 ，反 覆数 次 ，然 后溶 剂换 成EA（ ethylacetate 乙 酸乙 酯） ，以 玻璃 吸 管吸取 冲洗 Liner ，最 后把 溶剂 换成 n-hexane （正 已烷）重覆 前面 所述 的步 骤，要 注意的 是溶 剂使 用顺 序 不可 以变 动！将二氯 二甲 基矽 烷和 甲苯 以 1:9 的 体积 混合 ， 并以表 面

32、皿 加盖 ， 需 注 意盛 世装 这个 混合 液 的玻 璃容 器，本身也 会与 前述 的衬 管示 意图，黑条为 O形圈 混 合液 反应 ， 故 在使 用 后会 有一 段时 间其 容 器内 部会 呈现 疏水 性质， 将前 面以 n-hexane 洗 干 净的 liner 放入 其中 ，要 注意 在 liner 的管 壁上 绝 对 不可 以出 现气 泡， 当 所有 的 liner 都放 好 后， 盖上 表玻 璃， 于 通风 厨中 静默 1-2 小时，将反应完 成 之 liner 取出（ 每次 一支，其余 的浸 泡在 反应 剂中，绝对不要 一次将 所有 的 liner 拿 出来 暴露 于空 气中 ）

33、 。先 以 n-hexane 是 要洗 掉未 反应 的二 氯 二甲 基矽 烷，而最后 的甲 醇是 要和 在已 经 和玻 璃表 面反 应的 二 氯二 甲基 矽烷 ， 另 外的确 一个 CI 基 反应 （ endcap ）， 所以 如 果顺 序搞 错的 话是 很 凄惨 的事 情, , 上 面 的步 骤结 束后 ，可以 将 liner 置于 高温 烘 箱中 ，在 300 度 下烘 一个 晚上 ！隔天 早上 取出 时，须 于干 燥皿 或烘 箱中 降温 ，而不 要于 空气 中 ，这 样你 的 liner 会很 快速 的 开始 吸收 水气，最后 将 liner 置放 于防 潮 箱中 保存，反应的 副 产物

34、 是气 态HCL，要全程 在抽 气厨 中操 作 ，二 氯二 甲基 矽烷 会 与空 气中 的水 分反 应 ，注 意存 放 的 条 件 。衬管 填放 硅烷 化玻 璃 棉的 作用 及填 放方 法 。 作用 ： 防 止样 品 吸附 ， 减小 死 体积 。对极 性样 品特 别有 效 ，也 可以 防 止注 射器 针尖 的歧 视现 象 ，加 速样 品气 化 ，还 可以 避免 颗粒 物质 堵塞 色 谱柱 ， 即 一是 样品 汽 化均 匀；一是防止 进 样垫 的残 渣堵 塞色 谱柱。一般要放 在衬 管 的中 间。这样用棉 签 ，刚 好扎 在玻 璃棉 的 上方 ，不 可用 针，防止划 破硅 烷化 层 。调 换不

35、同厂 家和 型号 的 进样 针时 ，玻璃 棉可 以放 下一 点 。人 工进 样和 自动 进样 选用 的 衬管 也不 一样 ，可 心 查 Agilent 易 耗品 手 册。分流 平板 ：棉 球粘 溶 剂擦 。注 射针 ：每 2-3 天 溶剂 浸泡 超声 波清 洗一 次。3老 化正常 使用 前，使 用后 ，比使 用温 度高30，1HR；新柱子 使 用前 老化 要长，基线稳定。4检测器检测 器中 ELECROMETR放E 大 镜不 能关 ， FPD点 火 时不 插管 ， 点火 后插 管， 防止水损坏FPD，用毕 ，取 下。应用 经验 TOC o 1-5 h z 浓缩时爆沸，可以调整真空度。水浴温度需

36、考虑溶剂沸点。定容后，离心去除固形物，不影响结果。进样垫更换前一般会发生漏气（压力下降），标准样出现杂 峰。衬管更换前一般会发生标准样峰丢失。日 常测 试：a： GC每日 使用 ，则 不必 关 机。 检测 器 150 ， 不点 火。 b. 使 用标准 混合 溶液 进样 ， 结果 与前 期比 较， 无 误后 ，开 始进 样检 测 。助 剂（ 活性 炭、硅 胶、硅藻土等 ）回 收 率：先将每个 单品 称 重填 入使 用的 层析柱 中（ 约 56cm），单 独计 算 回收 率 ；然后 按实 际使 用要 求 ，填 充助 剂 ，再 作 回收率 实验 。回 收率 可 以不 要求 大于 某个 值 ，但 一定

37、 要稳 定。 A300 克 活性 炭加 1 升 盐酸（ 1mol/L ）煮 沸 4 小时 抽滤，用无 C1 离子 水洗 至 无 C1 离 子，然 后 120 烘干备用 。每 批助 剂使 用 前要 做添 加回 收试 验 （ 90%以上且稳 定） 。进样口温度与农 药沸点和稳定性 有关 。载气恒流结果稳 定性好。开 发方 法， 一定 要 3 个梯 度浓 度比 较 ，观 察是 否出 峰及 杂 峰。FPD 尾 吹气 调整 对溶 剂峰 1 分 钟附 近 的峰 有影 响。ECD 基 线 200FPD20 正常 。晚 间进 样 口 100 ， FPD 不点 火。ECD正常。HP-5 可做 磷氯 ， 做氯 的

38、柱 子 小 。层 析柱 0.8-10磷 丙酮 洗针 对氯 正已 烷洗 针每 日进 样： 高于 程序 升温30 ，运 行 30 分钟 -溶 剂 -1 标样 -2 标 样 - 溶剂 -样品 - 溶 剂 -1 标样 -2 标样 峰面 积相 关5%（变异数 2%）表示 机器 正常 。计算 ：取 两针 结果 最 近的 谱图 ，建 立比 较 依据 ， NEWCALIBRATION及 ADDLEVEL新 手做 样： 样 品 2 分添 标 回收 2 分 已 知样 品 1 分使 用一 段时 日后 ，峰 消瘦 或分 离欠 佳 #进样口 端截 去 20cm#更 换衬 管 #在柱子 最高 温度 处保 持 30 分钟

39、烘烤 。层 析柱 ： #前期洗 液至 填充 物表 面 #加 样液 ，流 至填 充物 表 面，#加2 3 次ml 洗 液， 流至 填充 物表 面， #加足 够多 洗液 ，流 至填 充物 表 面。进 样针 每周 清 洗 1-2 次 ， 放假 前取 下 清洗 。装卸进样针 TOC o 1-5 h z 柱子长度调整与实际一致，可调整载气实际流量。溶 剂验 证： 将 25ml 溶 剂浓 缩， 定容 1ml 。定容技巧：将浓缩吹干的烧瓶，移入一定量的溶剂 ，荡 洗 ，进 样。升温慢，分离度大，流速慢，分离度大。磷 DB-210 升温 120（ 2） -35/-180 （ 0） -10/-220 （ 3）

40、POSTRUN后运行，用来吹 扫柱 子 ，防 止柱 子吸 附干 扰物 。氯 DB-1 升 温 120（ 2） -26/-160-80/-180（ 5）-20/-240 （ 9）27.BEEP 打开 ，方 法 改变 发出 警告 音。对 某一 确定 的样 品， 怎样 确定 炉温 汽 化室 和检 测器 的温 度 比如 对甲 醇和 DMF的 条 件有 什么 不 同？ 单一 的物 质，可 以看 它的 沸点 是多 少 进样 口应 尽可 能高 于 它的 沸点 ，如 250 度 而炉 温应 低于 进样 口 ，如 280 度。 以上 所 说为 检测 单 体 物 质 ， 恒温 。另 外还 可以 用 程序 升温 ，

41、如 50 度 2 度 / 分 钟 250 度 保持 10 分 钟当 改变 空气 与氢 气比 例时 ，比 如将 氢 气流 量调 大， 会对 实 验有 什么 影响 ？氢气与空气比为1/8 与 1/2 之间， 否则灵敏度会下降第一部分：固体、半固体样品的提取方法索 氏 提 取 法 （自 动 索 式 提 取 ）索氏提取 法 是一 种 经 典 萃 取 方 法 ，在当前农药残留分 析 的 样 品制 备 中 仍 有 着 广 泛 的 应 用 。美 国 环保署（EPA）将 其 作 为 萃 取 有 机 物 的标准方法之一（EPA3540C）; 国 标 方 法 中 也 用 索 式 提取法作为提取方法。由于是经典的提

42、取方法，其它样品制备方法一般都与其对比，用于评估 方法的提取效率。索氏提取方法的主要优点是不需要使用特殊的仪器设备且操作方法简单易 行 ，很多实 验室都 可以得以 实现、使 用成本 较低。主要 的缺点 是溶剂 消耗量 大、耗时也 较长、 需冷凝水等。 TOC o 1-5 h z 索氏提取中玻璃材质的脂肪提取器是比较容易损坏的玻璃器皿之一，尤其是提取器外壁 的 虹 吸 回 流 管 很 容 易 破 损 ， 在 实 验 操 作 中 应 小 心 谨 慎 一 些 ;决 定 索 氏 提 取 效 率 的 因 素 除 了 提 取 溶剂之外，还有就是提取溶剂的回流次数（在某种程度上可以说是提取时间），一般实验

43、室中使用的水浴锅温度分布不是很均匀、提取用的圆底烧瓶的瓶壁厚薄不一均会造成的回流速率 的差异;一般在实验中水浴的温度不能过高 以防止暴沸造成目标物的损失;在索氏提取中 ，装样品一般都是用滤纸筒，不宜使用金属的筛筒（这会造成部分农药目标物的分解， 如Fe 可能会 造 成 某 些 有 机 氯 农 药 分 解 ） 。此 外 ，应 注 意 滤 纸 筒 在 装 样 之 后 与 提 取 器 的 匹 配 ，尤 其 须 注 意 纸筒不能堵塞虹吸回流管。实验中所使用的索氏提取器不宜过大，否则溶剂蒸气到达提取器 之 前 由 于 环 境 空 气 的 冷 凝 作 用 而 减 少 （特 别 是 冬 天 等 环 境 温

44、度 较 低 的 时 候 ）， 从 而 减 缓 了 提 取 效率，使得提取耗时过长。由于索氏提取是一个相对开放的提取体系，因此在提取操作中还应注意防止产生污染; 实验操作中最好将冷凝管顶端进行覆盖。索氏 提 取 管 的 清 洗 ，一 般 可 以 用 铬酸洗 液进行 清 洗 ，去离子水（可以在使用前多准备一些用正己烷 萃 取 一 下 备 用 ）在 清 洗 干 净 、烘干 或者风 干 。索氏提取中还有一种自动索氏提取法（AutomatedSoxhletExtractionMethod），EPA3541也有标准方法。相比与索氏提取，自动索氏提取法具有提取时间较快、操作自动化、溶剂可 以回收等有点。由于

45、该方法本人没有使用过，因为只能根据资料简单陈述这些。振荡 提 取 和 组织捣碎法（ 匀 浆 法 ）振 荡提 取 和 组 织 捣碎法（匀浆法 ）， 这 两 种 提 取 方 法 相 对 更 为 简 单 ， 一 般 对 植 物 样 品 、 食品，尤其是含水量较高的新鲜样品，如蔬菜、水果等使用时较为方便简单。这两种方法也不 需要特设的设备，普通的振荡器、离心机、匀浆机等均可使用。这 两种 方 法 在 很 多 农 药 残留分析的标准方法中均有使用，如GB/T5009系 列 方 法 和 日 本的 “ JAP肯定 列 表 检 测 方 法 - 食品中残留农药兽药饲料添加剂检测方 法 ”。在这两种方法中，一般使

46、用的提取溶剂以极性溶剂居多，标准方法中以使用乙腈居多。 由于这些样品中含水量一般都较高的，如果使用单一的非极性溶剂提取，由于疏水性强，浸 润或渗透样品的能力有限，会造成提取效果的降低。振荡法和和组织捣碎法（匀 浆 法 ）以 及 后 面提 到 的超 声 提 取 、 微 波提取等方法中，还有一个 重 要前处理步骤，即固液分离 。 实 现 这 个 步骤 可 以用 过 滤 （抽 滤 ）和离心等操作进行。过滤 可 以 用 简 单 的 滤 纸 进 行 ，也 可 以 用 助 滤 剂 （ 如 Celite545） 进 行 抽 滤 。如 果 使 用 离 心 分 离 时 ，应 注意防止容器的破碎。在这两种提取方法

47、中，为了避免液体转移产生的损失，一般都是直接从提取液中抽取部 分液体用于后续的操作。超 声 波 提 取 法超声波提取具有不需要加热、操作简单、节省时间和提取效率高等优点，目前在农药残 留 分 析的样品前处理中也有广泛的应用，如 EPA3550方 法 。超声波提取一般有利用超声波清洗器提取 的 ， 也有 专 门 针 式 提 取 器 （如 超 声 波 细 胞 破 碎仪 ） 。无 论 是 哪 种 提 取 设 备 ，都 是 利 用 了 超 声 波 的 “空 化 ”作 用 。超 声 波 提 取 的 特 点 很 明 显 ，不 需要加热，这个尤其适用于热不稳定性目标物的提取。目前实验室使用较多的还是超声波清

48、洗器作为提取仪器。一般在超声波提取之前应该将 待提取样品用提取溶剂浸泡一段时间，使之相互充分的接触、渗透。在超声波提取中，最好 都是使用混合提取溶剂，分步骤提取，以提高目标物的提取效率。超声波提取法对玻璃容器 也有一定的要求，如果玻璃容器的质地不好，有裂隙等，在提取过程中很容易破裂，因此在 选择玻璃器皿时应特别注意。有机溶剂在使用超声波提取时，挥发性会增强，所以要注意提取容器不能密闭，应有一 定的空间。使用超声波清洗器进行提取，需注意在整个超声容器中超声波场的分布是不均匀的，类 似在波场的分布中有死角，这会使得部分样品的提取效率显著下降，从而导致重现性较差。超声波提取所需要的溶剂量较大，一般都

49、是分步提取、过滤。虽然操作简单但是操作的 劳动强度较大，而且需要进行过滤等步骤将提取溶剂与样品分离。超 临 界 流 体 萃 取 法超临界流体萃取具有耗时短、消耗有机溶剂少等优点，所以在农药残留分析样品前处理 中，特别 在食品及中草药有效成分等天然药 物成分 的提取 中有较多 的 应 用;早期超临 界流体 萃取色谱仪（如吉尔森的，如果操作的时候没 有说明 书是不 行的）用于 萃 取 时所需要设 置的条 件等 都 较 多 。如 需 要 二 氧 化 碳 、低 温 冷 却 设 备 （ 乙 二 醇 冷 却 剂 ） 、加 入 改 性 剂 （ 提 高 极 性 化 合 物 的 溶解度）、压力设置、收集溶剂等等

50、。现 在 的 超 临 界 流 体 萃 取 仪 器 （如 美 国 ASI） 有 了 很 大 的 改 进 ， 仪 器 的 性 能 、 功 能 、 体 积 等 都 有 了 较 大 的 改 进 。由 于 需 要 使 用 特 殊 的 设 备 和 耗 材 ，目 前 国 内 用 SFE 分 析 农 药 残 留 的 文 献 还是相对其他方法较少。超 临 界 流 体 萃 取 最 大 的 优 点 是 有 机 溶 剂 的 使 用 （基 本 不 用 或 者 极 少 使 用 ）， 而 且 很 容 易 实 现对一些大分子化合物、热敏性和化学不稳定性物质的提取。当然设备成本是很多实验室必 须考虑的问题。加速溶剂提取法加 速

51、 溶 剂 提 取 法 被 美 国 环 保 署 选 定 为 标 准 方 法 （ EPA3545 ） 。 加 速 溶 剂 提 取 很 容 易 实 现 自动化（顺序提取），目前，在对土壤和生物样品中农药残留分析的前处理上都有应用。虽然加速溶剂提取相比索氏提取和超声波提取等方法，消耗溶剂较少、自动化程度高、 操作相对简便，但加速溶剂萃取最大的问题就是分析成本，即仪器和耗材相对较贵（特别是 滤膜，一次性的），一般的实验室难以承受。 TOC o 1-5 h z 加 速 溶 剂 提 取 的 效 率 较 高 ，但 是 一 般 的 共 提 物 也 相 对 较 多 ，这 样 会 影 响 后 续 的 净 化 操 作

52、 。 目前，已经有在线净化的报道（如在戴安公司的网站上就有相关的净化资料），即在样品的 下面装 入 净化所需的吸附剂，达到提取- 净化的目的。但是，对不同的样品和农残目标物的检测，具体的方法需有多次实验确定。ASE 自动化程度高、操作简单，参数的设置也较为容易， 而且在后续操作中自动过滤，这大大 减 轻了实验者的劳动强度，也避免了目标物的损失。ASE在提取水分含量较高的样品时，不能用无水硫酸钠脱水（主要是防止结块，堵塞管路）。对于样品量的要求，应该结合 各个体积大小的萃取池装填样品，不能装填过多或者过于紧密，否则会影响萃取的效率。同 样，由于是高温提取，对于一些容易热解的目标物是不太适宜的。此

53、外，加速溶剂提取装置还是很好的研究亚临界水萃取的仪器。6微 波 萃 取 法微波萃取就是通过分子极化和离子导电两个效应对物质直接加热，且加热均匀（目前的 理论有微波热效应和非热效应的，具体就不在此讨论了）。根据微波的作用原理，微波萃取 需要极性溶剂，但是一般都是混合溶剂提取。国内微波萃取的文献也相对较多一些，也能从 某种程度上说明这种方法的适用性。微波萃取主要有两种方式：敞开式和密闭式。（关于更 多 的 微 波 原 理 可 以 参 考 本 论 坛 中 微 波 萃 取 /消 解 版 面 ）一般的家用微波炉，其微波的发生都是脉冲形式的，如果从实验现象来看的话，就是在 微波断开时的瞬间溶剂会有强烈的暴

54、沸现象产生。家用微波炉的炉腔中微波场的分布是不均 匀的（通过转动盘来克服这个问题）。关于能否用改装的家用微波炉进行微波萃取实验，这个问题也是讨论较多的。个人认为 可行性可以暂且不讨论，可以先从敞开微波萃取实验本身来看：首先，在使用微波萃取时， 应 该 有 搅 拌 装 置 ，最 好 是 使 用 磁 力 搅 拌 器 ，一 则 使 得 提 取 溶 剂 在 最 快 的 时 间 内 达 到 温 度 平 衡 ， 避免由于微波场分布不均匀带来的弊端；二则搅拌对提取的效率也有一定的提高。其次，对 于 实验来 说，需要 较为精确 的温度 控制系 统，这是一 个难点 ，因为目 前的测 温方法（热 电偶、 热电阻、

55、光纤、红外等）在这种微波萃取方式中的应用都有其局限性；就是说，提取器中溶 剂的实际温度很难及时的表观和控制。从这两点来看，如果要改装的话，还是很麻烦的。在使用非脉冲微波萃取时，暴沸现象就可以避免了，主要是微波的连续供给，不会形成 一个极大脉冲。微 波 萃 取 还 有 一 个 问 题 就 是 微 波 分 解 ，因 为 微 波 不 仅 对 溶 剂 而 且 对 目 标 物 本 身 也 有 作 用 ； 但是在实际使用中，只要微波的功率设置合理，其分解目标物的影响是在可接受范围内的。 微波提取的效率需通过微波的功率、萃取的溶剂比例、萃取时间、萃取温度等来进行优化。由于是高压、高温条件，密闭微波萃取装置在

56、萃取效率，萃取时间、消耗溶剂等方面比 常压微波萃取更胜一筹，由于萃取的环境是高压、温度也是较高的，有点类似加速溶剂萃取 的作用；故此，提取的效率、提取的时间和消耗的溶剂都由于常压萃取。但是，密闭微波萃 取的令人困扰的问题就是控温的问题，也引出了安全问题。由于不是每个萃取罐都是有温度 或压力控制的（不知道目前有没有产品有相关的功能），当每个萃取罐中的样品组分有所差 异时，可能对温度或压力产生一定的变化。由于是微波萃取的温度相对较高，所以对目标物而言，热不稳定性农药是不适用的；敞 开式微波萃取实验的操作有些类似超声波萃取，可以分步萃取，也需要借助过滤等方式实现 液固分离；微波萃取的提取效率较高，而

57、且对样品，如植物中色素的共提现象要小一些，这 样能使净化稍微容易一些。相对而言，敞开式微波萃取在处理样品量的方面比密闭萃取要稍逊一些。一般常压微波 萃取一次只能萃取一个样品，并需要冷凝水冷却提取溶剂，而密闭微波萃取可以多个样品同 时萃取。目前国内的微波仪器就有微波消解、萃取一体的产品。7基质固相分散 技 术基 质固相分散技 术 ： MATRIXSOLID-PHASEDISPERSION （ MSPD ） 是 将 样 品 （ 固 态 或 者 TOC o 1-5 h z 液 态 ）直接与适合反相键合硅胶（如C18、C8 等）一起混合和研磨（现在 已 经扩大到其他材料了，如硅藻土等），使样品本均匀分

58、数于固体相颗粒表面制成半固体装柱，然后采用类似 SPE 的操作进行洗涤和洗脱。其优点如 下：依靠填料颗粒的机械剪切力和 C18等填料的去杂作 用 ，是样品匀浆和提取在同一过程中 完成， 不需要溶剂和除杂步骤；C18 等能够破坏脂质的细胞膜，使细胞成分释放并在填料中重新分布；样品基质和待测组分均匀分布在填料中， 样品的各种成分按照相似相溶规律在填料表面的键合相中依极性高低进行溶解和分布；组分 的 保 留 与 填 料 、 样 品 基 质 和 溶 剂 有 关 。 MSPD 样 品 处 理 速 度 快 ， 溶 剂 用 量 少 ， 同 时 样 品 量 也 少，因此要求检测方法（仪器）具有较高的灵敏度。常

59、用 的检测方 法有：酱 油中氯 丙醇的 测定、苹果 汁中农 药多组 分测定 、持久性 化合物（多 氯联苯）等的提取测定等等。第二部分：水样的提取方法1液 液 萃 取 法液液萃取法是根据目标物农药分子在水中和有机相中的分配定律，利用有机溶剂对水样 品 进 行 提 取 农 药 残 留 的 一 种 方 法 。 大 部 分 农 药 的 正 辛 醇 - 水 分 配 系 数 （Kow） 都 较 大 ， 也 就 是 脂 溶性或疏水性较强，利用液液萃取能很好的萃取水样中的农残目标物。液液萃取是经典的提 取方法，也是很多的方法与之相比的标准。液液萃取一般在分液漏斗中进行，分液漏斗的活塞最好是聚四氟乙烯的，这样可

60、以避免 玻璃活塞上所涂的润滑剂溶解在有机溶剂中对分析结果造成必要的的影响。一般的液液萃取 都 是 分 步 萃 取 的 ，在 水 样 中 加 入 一 些 盐 类 物 质（ 如 氯 化 钠 、硫 酸 钠 等 ）或 调 节 水 样 的 pH 值 ， 能降低目标物在水中的溶解度，从而提高萃取萃取的效率。一般的非极性强的目标物分子可 以用石油醚、正己烷、环己烷、正辛烷等溶剂进行提取；中等极性目标物可以用二氯甲烷等 溶剂进行提取；对于一些强极性、强水溶性的农药（某些有机磷农药如甲胺磷和某些氨基甲 酸酯类农药），一般液液萃取是很难达到理想的效果。液液萃取操作时要注意将过量的气体 排出。液液萃取虽然对大部分的