抑郁模型大鼠海马内环境的研究

1、抑郁模型大鼠海马内环境的研究【摘要】目的研究海马内环境稳态在抑郁症中的作用。方法20只雌性istar大鼠分为对照组、模型组。elisa法检测血清皮质醇、雌二醇，光镜和电镜观察海马a3区形态学变化，免疫组化法检测海马脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达。结果与对照组比拟，模型组皮质醇程度显著升高，雌二醇程度明显下降，海马a3区神经元损伤严重，脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达明显降低。结论抑郁状态下，海马内环境稳态被破坏。【关键词】抑郁症海马内环境稳态脑源性神经生长因子血管内皮生长因子【abstrat】bjetive:tstudytheatinfhippapalinternalenvi

2、rentindeprssin.ethds:20fealistarratseredividedintthentrl,delgrup.serurtislandestradilereeasuredithelisa.hippapala3rphlgyerebservedbylightandeletrnirspe.bdnfandvegfexpressinseredetetedbyiunhistheistry.results:parediththseinthentrl,inthedelgrup,theserurtisllevelinreasedbviusly,seruestradillevelderease

3、dsignifiantly,andthea3neurnshadseveriusstruturedaage,andtheexpressinsfbdnfandvegfdereasedarkedly.nlusin:thehestasisfhippapalinternalenvirentisdisruptedindepressin.【keyrds】depressinhippapalinternalenvirenthestasisbrain-derivedneurtrphtifatrvasularendthelialgrthfatr海马内环境指海马神经元的细胞外液，其理化性质和各种成分应保持相对稳定的状

4、态，即稳态。海马内环境的理化特性包括温度、浸透压、酸碱度等，成分有各种离子、激素、递质、细胞因子等。海马内环境稳太破坏均会损伤海马功能和构造，进而影响行为、情绪和内脏功能。现代医学认为海马损伤在抑郁症发病中起重要作用1-2，但抑郁状态下，海马内环境出现何种变化目前尚没有系统研究，这就是本课题的研究目的，而本文主要对海马内环境中相关成分进展初步观察。1材料和方法1.1实验动物的选取和分组安康istar雌性大鼠，清洁级，体重22620g,中国医科大学动物实验中心提供，合格证号：医大动物合格证sxk(辽)2022-0005。适应性饲养1周后，选择行为学得分相近的20只大鼠，随机分为对照组、抑郁症模型

5、组模型组，每组10只。室温2025，湿度40%50%。1.2抑郁症模型的建立模型组大鼠建立慢性不可预见性应激模型，即在21d内随机施加电击足底36v交流电，5in、冰水游泳4,5in、摇摆1in、夹尾1in、禁水24h、禁食(24h)等刺激，每种刺激4次。1.3血清雌二醇和皮质醇检测在实验的d22，2组大鼠均腹腔注射20%氨基甲酸乙酯0.4l/100g麻醉后，腹主动脉取血，离心后取血清，低温冻存。采用elisa方法检测皮质醇和雌二醇(estradil，e2)，此项工作由沈阳军区总医院内分泌实验室完成。1.4海马组织学观察首先是he染色：取完成1.3后2只大鼠，立即断头取双侧海马，置于10%甲醛

6、中固定，石蜡切片，he染色，观察海马a3区神经元的形态学变化。其次电镜观察：取完成1.3后的2只大鼠，升主动脉插管，150l生理盐水快速冲去血液，快速灌入42.5%戊二醛固定液，取双侧海马，修块，再于戊二醛中固定2h，pbs反复清洗后，再经1%锇酸固定2h，双蒸水冲洗，梯度乙醇脱水，临界点枯燥，离子溅射真空渡膜，扫描电镜下观察超微构造。1.5脑源性神经生长因子和血管内皮生长因子表达取完成1.3的6只大鼠开胸，升主动脉插管，生理盐水快速冲去血液，取双侧海马，4%多聚甲醛固定46h，30%蔗糖溶液沉底。做海马石蜡冠状切片，片厚25，隔4片取1片，采用免疫组化sab法检测脑源性神经生长因子(brai

7、n-derivedneurtrphtifatr，bdnf)和血管内皮生长因子(vasularendthelialgrthfatr,vegf)表达，相关抗体和试剂盒均购于武汉博德试剂公司，阴性对照选用pbs。利用bi-2000医学图像分析系统，测定海马a3区bdnf和vegf表达的平均灰度值。1.6数据处理数据以x-s表示，采用spss13.0中anva检验进展统计学处理。2实验结果实验过程中没有实验动物死亡及脱失现象。2.1海马形态学变化光镜下，对照组a3区有大量致密锥体细胞，排列整齐，细胞完好，边缘明晰；模型组细胞层次减少、稀疏、排列紊乱，大量细胞坏死。电镜下，对照组细胞器丰富，轮廓明晰，细

8、胞核呈圆形，核膜明晰光滑完好，核染色质分布均匀；模型组细胞器减少，线粒体空泡化，细胞核变小，不规那么，且核膜增厚，核周电子密度降低。2.2海马内环境相关成分变化与对照组比拟，模型组皮质醇显著升高，e2明显下降。bdnf和vegf免疫阳性反响产物呈棕黄色，前者分布神经元胞浆内，后者主要分布于血管内皮细胞内。对照组bdnf和vegf表达较多，模型组较少，二者灰度值均升高。详细数据见表1。表1各组海马内环境相关成分的变化注：与对照组比拟：ap0.05,bp0.013讨论海马作为边缘系统的重要构造，具有形成学习记忆和协调行为、情绪和内脏活动等的重要功能。近年来，海马在抑郁症的作用备受关注。影像学研究观

9、察到抑郁症患者的海马构造出现萎缩，且与病程有关3。众多动物实验也证实，海马损伤是抑郁模型动物的共同表现，这在本实验中也得到了验证，如海马a3区出现细胞层次减少、细胞损伤、细胞器破坏等。海马神经元所处的细胞外液属于机体内环境，其成分和理化特性相对稳定是神经元发挥功能的前提。在海马内环境成分中，有些可以保护神经元，有些那么起破坏作用。生理程度的皮质醇不会损伤海马，但高浓度皮质醇那么有明显损伤作用。雌激素与皮质醇相反，具有神经元保护作用。本实验没有通过微透析技术检测脑灌流液中的皮质醇和e2程度，其原因是二者均为类固醇激素，可以自由通过血脑屏障，血清程度与脑内浓度根本一致。实验观察到，模型组血清中皮质

10、醇程度显著升高、e2那么明显下降，这些变化说明抑郁状态下，皮质醇过度分泌，e2那么分泌减少，提示在激素方面海马神经元失去了保护。bdnf和vegf均为保护海马的细胞因子，对神经元具有营养和支持作用。本实验采用免疫组化技术检测到，模型组二者表达均下降，提示抑郁状态下，海马神经元失去了营养性细胞因子的营养和支持作用。上述实验结果提示，抑郁状态下，海马神经元的保护成分减少，破坏因素增加，即海马内环境稳态被破坏，从而导致海马损伤，因此恢复海马内环境稳态是防治抑郁症的重要环节。参考文献1anjaurbah,hristphredeker,andtt.itte.indutinfneurgenesisintheadultdentategyrusbyrtialspreadingdepressinj.strke,2022,39:3064-3072.2tariqued.perera,sungshipark,yelen