武汉大学天然产物的提取虎杖课件

1、虎杖中白藜芦醇的提取 武汉大学天然产物化学及提取200722030144总纲虎杖及白藜芦醇简介分离方法简介发展现状及前景简介虎杖是什么？ 中药虎杖为蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc. )的干燥根茎及根，性微寒、味微苦，具祛风利湿、散瘀定痛、止咳化痰等功效。 虎杖含蒽醌、二苯乙烯类(芪类) 、酚类、黄酮类等多种成分，其中二苯乙烯类主要为白藜芦醇和白藜芦醇苷(虎杖苷) ，蒽醌类主要以大黄素、大黄素甲醚为代表,也含有多种蒽醌苷。白藜芦醇及其苷具有抗肿瘤、降血脂、抑制血小板聚集、调节脂蛋白代谢、保肝、抗氧化、抑菌等多种药理作用 ，而虎杖蒽醌具有抗菌、保肝

2、、抗癌等功能，是虎杖中两类主要的活性成分。临床上以虎杖为主药的制剂种类也很多。白藜芦醇 对白藜芦醇生理功能的认识源于WHO的一项流行病学调查。流行病资料显示，法国人心血管疾病的发病率明显低于其他国家，这与其红葡萄酒摄入量较高有关。进一步的研究证实，白藜芦醇是红葡萄酒中发挥心血管保护作用的主要物质。 白藜芦醇苷(虎杖苷)是白藜芦醇与葡萄糖结合的产物，它们均属于虎杖成分中的芪类化合物。 白藜芦醇为白色针状晶体，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂，在波长365nm的紫外光照射下能产生荧光，并能和三氯化铁一铁氢化钾起显色反应。 分离方法简介有机溶剂萃取法大孔吸附树脂法膜分离法有机溶

3、剂萃取法试验方法 精确称取一定量预先干燥、粉碎的虎杖粗粉，加入提取溶剂，在一定温度下进行搅拌，加热回流提取一定时间。采用TLC法进行定性分 析，与标准品进行对照分析。使用紫外分光光度计在306nm处测其提取液的吸光度，根据标准曲线计算其浓度，得出提取率。标准曲线的绘制 精密称取白藜芦醇标准品，置于容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度定容。分别配制不同浓度的标准溶液，用紫外可见分光光度计在306 nm处测其吸光度值。提取剂浓度的确定 不同浓度的乙醇溶液具有不同的极性，根据相似相溶原理可知，不同极性的溶液必然会影响到白藜芦醇的提取效果。提取温度的确定 提取温度对天然产物提取是一个很重要的影响因素，而且

4、白藜芦醇具有热敏性，其苯环上的羟基在高温下易被氧化失去生物活性，也因为此原因限制了其有机合成的进展。结论 由虎杖提取白藜芦醇的较优的工艺条件：提取剂为浓度60的乙醇，提取温度为50度，料液比为1:40，提取时间为2.5 h。大孔吸附树脂法 大孔吸附树脂具有吸附快、解吸快、吸附容量大、易于再生、使用寿命长等优点，现已广泛应用于天然产物的分离和富集，但该法存在有机试剂和能量消耗大，对环境污染严重等问题。树脂的预处理吸附原液的制备 虎杖粗碎加一定量的水，在一定的温度下自然发酵酶解一定时间，加甲醇提取3次，每次2 h，过滤，合并滤液，减压浓缩回收甲醇，加适量水冷却后过滤得吸附原液，备用。树脂的静态吸附

5、量、解吸率测定 单位质量树脂吸附白藜芦醇的量是重要的参数，不仅要求树脂吸附量大，而且必须解吸率要高，以保证有效成分最大限度的回收。树脂对白藜芦醇静态吸附的动力学研究 将t时刻树脂吸附白藜芦醇的量对时间t作图即得树脂的静态吸附动力学曲线。 进行平衡吸附试验，计算树脂吸附量，以树脂吸附量对白藜芦醇的浓度作图，得等温吸附曲线。洗脱剂及浓度的选择 对已经吸附样品的树脂进行脱附试验，作出脱附曲线。考察洗脱剂的种类、浓度、用量等因素对树脂脱附性能的影响，确定最佳的脱附工艺。产品的制备 将白藜芦醇洗脱液收集浓缩，去除溶剂，并冷冻干燥，得到白藜芦醇初产品，采用高效液相色谱法测定其含量。 相关文献显示吸附树脂用

6、于虎杖中自藜芦醇的分离，省去了传统溶剂萃取法的烦琐工艺，仅吸附脱附一步工艺即可得到高含量的白藜芦醇，并且收率高、成本低(树脂可再生，溶媒用量少)、操作简便，可推广应用。实验过程 虎杖苷液态发酵后浓缩，用60%的乙醇以1：8的料液比在常温下提取，过滤得到滤液，然后将滤液连续投入微滤膜装置中，收集其滤液，再将滤液投入超滤膜装置中，收集其滤液。超滤膜的浓缩液中含有大黄素，可以回收利用。实验过程中分别记录时间、操作压力、温度、膜通量等数据。浓缩液虎杖苷液态发酵 浓缩 60%乙醇提取液 过滤 滤液 微滤膜 产品3 精制 滤液 超滤膜 滤液 干燥 产品2 干燥 浓缩液 产品1膜的清洗 实验完成后，微滤膜和

7、超滤膜需要清洗，以恢复膜的水通量。先用复合清洗剂清洗 ，然后用次氯酸纳漂洗，最后用清水洗至中性。观察膜清洗前后的通量变化情况。 查阅相关文献知，整个实验过程膜保持着良好的通量，微滤膜和超滤膜经清洗后，膜通量恢复到原来的99%以上，而且相比大孔吸附树脂法来说，整个过程无废水产生，能耗低，可降低生产成本，实现清洁生产的目的。 发展现状及前景 目前的研究一致证实了白藜芦醇具有抗氧化、抗癌、保护心血管的作用。很多实验表明:白藜芦醇还具有雌激素调节,对氧化DNA 具有保护作用,最近几年国内外学者还发现了白藜芦醇具有明显的抗病毒作用,但目前的研究结果在对雌激素样作用方面尚不一致。 今后应结合临床试验进一步深入研究,研制出白藜芦醇制剂，应用在肿瘤、心血管疾病、病毒性疾病的预防治疗。另一方面，对白藜芦醇的安全性、有效性研究相当滞后，相应的毒理研究亦很少，尚需进行大量的研究工作。 在完善理论研究的同时，也注重实用产品的研制与开发。国内