HER2免疫组化检测的质量控制培训

1、HER2免疫组化检测的质量控制苏州大学附属第一医院郭凌川1内容提要要HER2检测的质质量控制制和质量量保证HER2检测质量量的影响响因素检测前检测中检测后HER2检测的质质量保证证内部质保保外部质保保Ring研究HER2检测的质质量控制制和质量量保证3质量体系系定义义质量控制制（QC）用以确保保HER2检测结果果正确性性的内部部验证步步骤质量保证证（QA）通过与其其他实验验室检测测结果相相比较而而得到的的检测技技术评价价的方式式（例如，外部控控制）BilousM,etal.Mod Path2003;16:173182.质量控制制与质量量保证有有何区别别？质控达到和/或维持目目标质量量在检测中中

2、每个步步骤均进进行样品品检查，从而决决定是否否进行相相关改进进操作步骤骤的内部部验证每批实验验都应进进行确保每个个检测结结果均准准确质保旨在改善善总体检检测操作作与其他检检测中心心相比较较质控/质保原则则（推荐荐）内部质量控制a) 染色 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 设立对照组:细胞系和组织标本免疫组化评分0/1+, 2+, 3+ 需经原位杂交确定 若对照组检测未能达标，需重新进行实验b) 评分 评价:若正常组织检测为阴性而肿瘤组织检测细胞膜膜染色阳性，则免疫组化检测即以足够乳腺癌：仅浸润性肿瘤不均匀: 选择代表性区域异质性特异区域: 按最高分评分c) 实验室 设立适当对照组d) 检测步

3、骤 难以确定的检测病例1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室e) 记录 使用标准化检测报告表 记录任何:与标准化标本处理步骤相违背的不当操作难以确定病理诊断的病例持续质量评价对相关从业人员进行教育培训每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 参与Ring研究Adapted by permissionfromMacmillanPublishersLtd; BilousMetal.Mod Pathol2003;16:173182.2003.质控/质保原则则（推荐荐）内部质量控制a) 染色 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 设立对照组:细胞系和组织标本免疫组化评

4、分0/1+, 2+, 3+ ，2+需经原位杂交确定 若对照组检测未能达标，需重新进行实验b) 评分 评价:若正常组织检测为阴性而肿瘤组织检测细胞膜膜染色阳性，则免疫组化检测即以足够胃癌或胃食管交界癌：选择代表性区域不均匀: 选择代表性区域异质性特异区域: 按最高分评分c) 实验室 设立适当对照组d) 检测步骤 难以确定的检测病例1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室e) 记录 使用标准化检测报告表 记录任何:与标准化标本处理步骤相违背的不当操作难以确定病理诊断的病例持续质量评价对相关从业人员进行教育培训每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 参与Ring研

5、究Adapted by permissionfromMacmillanPublishersLtd; BilousMetal.Mod Pathol2003;16:173182.2003.HER2检测质量量的影响响因素8影响IHC检测结果果之常见见问题诸多因素会影响IHC结果的评评估标本固定定较差1染色不均均细胞质染染色,IHC02弥散性非非均一性性细胞质质染色标本点状状假阳性性染色2棕色点状状染色为为胞质染染色而非非胞膜染染色标本边缘缘假阳性性染色1肿瘤标本本边缘染染色而中中心无染染色W Hanna供图;Dako供图.影响FISH检测结果果之常见见问题标本制备备染色步骤骤固定不完完全1片状染色色

6、;信号较弱弱或缺失失过分固定定1持续性自自发性荧荧光;信号较弱弱或缺失失消化封闭闭不完全全2较强自发发性荧光光；背景景亦呈现现较强非非特异性性染色Abbott供图;2.Ventana供图.取样组织处理理固定方式式检测仪器器精准度度实验室步步骤固定时间间检测方法验证检测人员员抗原修复复类型实验试剂剂对照实验条件件使用图像像分析判读标准报告内容容评分系统统HER2检测偏倚倚检测后检测前检测中影响HER2检测结果果之因素素WolffAC,etal.J ClinOncol2007;25:118145.HER2检测的影影响因素素：检测测前12影响HER2检测结果果之因素素:检测前取样组织处理理固定方式式

7、固定时间间Pre-analyticHER2检测偏倚倚WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.检测前取样原发性乳乳腺癌最好为手手术切除除而非活活检标本本，包含含癌旁乳乳腺组织织避免细针穿刺活检检取样转移性乳乳腺癌穿刺活检检取样胃癌经内镜活活检取样样或经手手术切除除之标本本影响HER2检测结果果之因素素:检测前取样HER2检测偏倚倚WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.检测前HER2检测偏倚倚影响HER2检测结果果之因素素:检测前组织处理理方式提供新鲜鲜及已定定位之标本或或切除后后迅速经经甲醛固固定之标标本立即转送送至备

8、检检实验室室:尽量缩短短从标本本切除至至浸入10%NBF固定之间间的时间间，通常常控制在在2030分钟以内内乳腺癌： 最多多1小时胃癌：2030分钟之内内从手术切切除到实实验室接接收之间间的组织织处理不不当会造造成不理理想和不一致致的HER2检测结果果最坏的情情况下，检测有有可能失失败组织处理理HER2检测偏倚倚检测前HER2检测偏倚倚影响HER2检测结果果之因素素:检测前固定时间间乳腺癌最少6小时不超过48小时胃癌穿刺活检检最少1小时（以以便充分分固定）比较大的的样本需需要至少少8小时不超过48小时固定时间间HER2检测偏倚倚检测前HER2检测偏倚倚乳腺癌HER2检测指南南（2009版）编写

9、组乳乳腺癌癌HER2检测指南南（2009版）中华华病理学学杂2009;38(12):836840.胃癌HER2检测指南南编写组胃胃癌癌HER2检测指南南 中华华病理学学杂志2011;40(8):553-557.影响HER2检测结果果之因素素:检测前固定方式式首选10%中性缓冲冲福尔马马林（NBF）10%NBF相当于4%甲醛溶液液固定方式式HER2检测偏倚倚检测前HER2检测偏倚倚WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2检测的影影响因素素：检测测中18影响HER2检测结果果之因素素：检测中中检测仪器器精准度度实验室检检测步骤骤检测人员员抗原修复复类型

10、实验试剂剂对照实验条件件HER2检测偏倚检测中WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.检测方法法验证影响HER2检测结果果之因素素：检测中中验证检测测方法用于检测之实实验步骤骤应经已已知实验验结果验验证标准化实实验条件件需经标标准化试试验方法法验证后后才可常常规应用用HER2检测偏倚检测中检测方法法验证WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.影响HER2检测结果果之因素素：检测中中检测仪器器之精准准度应有常规规校准及及维护检检测仪器器的相关关操作流流程移液器孵育箱水浴锅温度计检测仪器器精准性性WolffAC,etal.

11、JClin Oncol2007;25:118145.HER2检测偏倚检测中仪器准确确度指该该实验仪仪器能正正确显示示操作者者的设定定方式正正确运作作仪器精确确度指该该实验仪仪器每次次操作都都能显示示相同的的检测结结果可重复性性影响HER2检测结果果之因素素：检测中中实验室步步骤须经验证证之免疫疫组化实实验步骤骤实验室步步骤HER2检测偏倚检测中WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.影响HER2检测结果果之因素素：检测中中检测人员员相关检测测人员应应接受正正规检测测技术培培训（包包括资格考试试）并给予予相应支支持定期考评评：例如如年度考评检测人员员Wolf

12、fAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145;乳腺癌HER2检测指南南（2009版）编写组乳乳腺癌癌HER2检测指南南（2009版）中华华病理学学杂志2009,38(12):836-840HER2检测偏倚检测中影响HER2检测结果果之因素素：检测中中抗原修复复类型所采用之之抗原修修复系统统与现有有实验条条件相适适应，并并能产生生可重复复性结果果抗原修复复类型WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2检测偏倚检测中相同FISH阴性乳腺癌组组织标本本应用相同同浓度抗抗HER2抗体检测测结果合理抗原修复过度抗原修复假阳性抗原修复复对

13、免疫疫组化检检测结果果很重要要图片由A Morey,StVincentsHospital, NSW,Australia提供.影响HER2检测结果果之因素素：检测中中检测试剂剂所有试剂剂应确保保其质量量稳定，经对照照组实验验验证后后可使用用所有验证证应当记记录，签签名和登登记日期期检测试剂剂WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2检测偏倚检测中影响HER2检测结果果之因素素：检测中中对照对照组与与实验组组实验过过程应一一致应使用已已知实验验结果的的组织作作为对照照可用已经经验证的的对照检检测新抗抗体活性性用于对照的组组织标本本可自行行制备或或购买而而

14、得对照HER2检测偏倚检测中阳性及阴阴性对照照组织标本本阳性对对照组理想之阳阳性对照照组, HER2阳性(IHC3+)1W Hanna供图;2.L Bornstein供图.MDAMB175,HER2阴性(IHC1+)2对照细胞胞系之准准备SK-BR-3,HER2阳性(IHC3+)1内部对照照设置患者标本本中肿瘤瘤未累及及部分可可作为内内部阴性性对照组组；若阴阴性对照照结果亦亦出现染染色，则则原肿瘤瘤标本之之染色结结果无效效对照监控控如若对照照组未显显示预期期结果，则实验验应重做做例如，正正常乳腺上皮膜染染色重复免疫疫组化检测W Hanna供图.影响HER2检测结果果之因素素：检测中中检测实验验

15、条件检测应于适当条件下进行温度及湿湿度的变变化会影影响染色色结果检测条件件需确保保得到可可靠且可可重复的的HER2检测结果果检测条件件WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2检测偏倚检测中如何达到到高质量量免疫组组化检测测勿让低年年资实验验室技术术人员配配置试剂剂若试剂未未能正确确配制，免疫组组化结果果将不可可靠低年资技技术人员员应接收收试剂配制训练及上上级指导导监督正确的抗抗体稀释释可避免免疫组化化的误差差记录每次次抗体稀稀释的浓浓度，每每次登记记相应日日期及时时间如遇错误误检测结结果，上上述记录录数据可可用来追追溯错误误原因完善改进进抗原修修复

16、方法法较耗时但但必须进进行设计验证证步骤目的确定经证证实或验验证之相相关实验验步骤是是否可于于本实验验室可行行确定检测测参数固定检测方法法及条件件试剂及浓浓度操作设定定(若自动化化操作)操作人员员技术能能力样本(检测组)选择25100个样本用用不同经经证实的的检测方方式进行行检测，可使用用组织芯芯片请注意:乳腺癌与与胃癌标标本进行行检测验验证应分分开进行行设计验证证步骤记录实验验验证的的每一操操作步骤骤这些记录录可用于于建立实实验室标标准化操操作参考考指南记录所有有操作步步骤若任何一一个步骤骤发生变变化，整整个实验验必须重重做目标：阳阳性及阴阴性实验验验证组组与原实实验结果果达95%的一致性性

17、使用自动动化平台有助助HER2检测标准准化方法抗体单位HER2 检测准确性自我评估专家评估自动4B5694.7%95.2%自动A0485390.0%92.0%自动CB11481.0%83.5%手动A0485678.4%85.7%手动CB11981.6%82.0%手动SP3278.0%88.0%如果使用用自动化化检测，必须基基于现有有的经验证的的手动操作方案案PQCC委员会提提供数据据国家质量量控制认认证项目目中自动动与手动动HER2检测方法法对比HER2检测的影影响因素素：检测测后35影响HER2检测结果果之因素素：检测后后图像分析析方法判读标准报告内容容评分系统统HER2检测偏倚倚检测后Wo

18、lffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.影响HER2检测结果果之因素素：检测后后检测结果果判读标准及评评分系统统需依国内内/国际HER2检测指南南进行标标准化操操作HER2检测偏倚检测后HER2检测偏倚判读标准评分系统统图像分析析方法IHC检测结果果判读及及评分多数操作作指南推推荐下列列分析免免疫组化化检测结结果的标标准：依细胞染染色百分分比及强强度进行行评分:乳腺癌:全膜染色色评估染色色侵入部部分，但但不包括括原位部部分寻找完整整深染色色及均匀匀的全膜膜区域胃癌：基基底侧膜膜、侧膜膜或完全全性膜染染色分析检测测结果时时，细胞胞质染色色应排除除在外。若细胞胞质

19、染色色干扰细细胞膜染染色结果果判断时时，应重重新检测测。正常上皮皮细胞不不应有染染色出现现。若出出现染色色，则应应重新检检测。留意待检检标本出出现收缩缩/破损,这些现象象会造成成检测结结果的假假阳性若标本染染色不均均，应依依染色最最强部位位进行评评分根据对照照组实验验结果决决定实验验组检测测结果是是否可信信乳腺癌或或胃癌检检测应使使用其特特异性评评分标准准ISH检测结果果判读及评分所有乳腺腺癌及胃胃癌IHC2+标本均需需再次进进行ISH检测进行行确定分析ISH检测结果果时之注注意事项项：乳腺癌：依H&E和/或免疫组组化染色色检测结结果来确确定肿瘤瘤的侵及及程度;原位癌不不予评分分从浸润性性肿瘤

20、的的两个不不同区域数细胞胃癌：由由于HER2的表达异异质性，必需筛选出整个扩增增区域包包括来自自于不同同肿瘤领领域的细细胞以提提供一个个更加统统一的分分析评分分标准Brightfield方法如SISH建议确认认HER2扩增重点点区域依对照组组检测结结果决定定实验组组检测结结果是否否可信于两个肿瘤瘤侵及区区域计数数至少20个不重叠叠的细胞胞若信号不不均匀(25%)，应重新新检测若检测结结果自发发荧光过过强或核核清晰度度较差时时则应重重新检测测若背景干干扰信号号辨识时时，应重重新检测测(10%细胞质信信号)重复信号号作单一一计数影响HER2检测结果果之因素素：检测后后检测报告告检测报告告应包含含以

21、下信信息：标本部位位及类型型固定液种种类标本离体体至固定定时间标本固定定的时间间抗体检测方法法图像分析析方法对照设置置HER2检测偏倚检测后HER2检测偏倚报告内容容乳腺癌HER2检测指南南（2009版）编写组乳乳腺癌癌HER2检测指南南（2009版）中华华病理学学杂2009;38(12):836840.HER2检测的质量保证证理想的质量体系系包括内部质保保计划外部质保保计划参与Ring研究内部质保保43内部质保保理想想计划继续进行行质控及及检测仪仪器维护护继续进行行实验室室人员技技术训练练及能力力测评实验步骤骤严格格遵守标标准化操操作方案案常规对照照组(阳性，阴阴性及内内部对照照组)；任何对

22、对照组若若出现非预期实验验结果，则应重重新检测测将检测阳阳性率及及阴性率率与已发发表数据据比较，从而监控控检测质质量对病理医医生进行行继续教教育及能能力测评评(如进行同同行检测测能力比比较)继续进行行常规评评价及总总结，分析现存存问题，及时弥弥补不足足外部质保保45外部质保保内容美国病理理学会（CAP）认证内内容要求求检查时时记录验证检测测之方法法检测步骤骤之使用用检测技术术人员之之培训标本及试试剂之正正确标记记标本及试试剂之正正确贮存存检测仪器器之校准准及质控控内部质保保计划及及实施依据检测质量量检测技术术人员及及病理医医生检测测能力之之测评检测报告告之准确确性及质质量正确提交交检测结结果W

23、olffAC,etal.J ClinOncol2007;25:118145.参与外部部质保之之益处可证明本本实验室室HER2检测结果果是否准准确可验证本本实验室室检测方方法检测操作作较差之之实验室室可得到到较多相相关建议议及帮助助本实验室室检测技技术及检检测结果果判读的困难可得得到及时时纠正及及弥补美国病理理医师学学会（CAP）认证（乳腺癌）CAP提供HER2检测认证证熟练检测测(按照ASCO*/CAPHER2检测指南南和认证证列表)质量管理理/QC结果报告告具有IHC或ISH进行HER2检测条件件的CAP认证实验验室需要要注册并并参与CAP认可的熟熟练性测测试实验室表表现将被被监测；实验室必

24、必须达到到90%或以上的的测试评评分（如如果每次次测试都都能成功功提交的的话）发送HER2切片到其其他设备备进行组组织处理理和染色色、并将将结果拿拿回进行行判读的的实验室室，必须须参与熟熟练性测测试*ASCO,美国临床床肿瘤医医师协会会英国国家家外部质质量保证证评价计计划（乳腺癌癌）向全球实实验室开开放计划针对对免疫组组化及原原位杂交交检测参与该计计划的实实验室每每季度需需对该计计划组织织所提供供的细胞胞系标本本进行免免疫组化化检测，检测结结果将交交回该计计划组织织送回该计计划组织织之检测测结果将将由四位位专家进进行最终终评分，取平均均分作为为参与实实验室最最后得分分最终评分分结果有有利于相关实验验室改进进现有实实验操作作技术以以及